在肾癌细胞系GRC—1细胞周期不同阶段Wnt—5A基因的？…

Ｗｎｔ基因所编码的蛋白质与许多生长因子一样具有分泌型生长因子的结构特点,其家族成员Ｗｎｔ－５Ａ是许多恶性肿瘤的自分泌生长因子,在肾细胞癌中表达显著升高。为研究在细胞周期的不同阶段生长因子ＷＮＴ－５Ａ在转录水平的表达情况,我们采用胸腺嘧啶双阻断及高压笑气处理的方法,使肾细胞癌细胞系ＧＲＣ－１细胞同步化。用半定量反转录多聚酶链反应对处于细胞周期不同阶段的细胞ｃＤＮＡ进行扩增,Ｓ期与Ｇ１,Ｍ期Ｗｎｔ－５     

Wnt-5b在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞的影响

Wnt-5b是Wnt信号转导途径中一个重要的成员,其与Wnt-5a具有80%的同源性,目前国内对于其在肿瘤的表达与功能尚不十分清楚.通过免疫组化检测70例不同分化程度结肠癌和30例正常结肠组织中Wnt-5b的表达揭示,其在结肠癌组阳性率表达低于正常组,随肿瘤分化程度减低,有下降的趋势;蛋白质印迹法检测表明,Wnt-5b在高分化人结肠癌细胞株Caco-2表达量低于低分化人结肠癌细胞株RKO和正常人结肠细胞株NCM460;Wnt-5b可减低Caco-2中β-Catenin的表达,抑制细胞运动能力,增加细胞凋亡率.以上结果提示,Wnt-5b在结肠癌中很可能扮演抑制肿瘤的角色,与抑制β-Catenin的表达和肿瘤细胞的运动能力及促进细胞凋亡有关.     

Survivin基因在肾癌组织中表达作用机制

[目的]分析基因Survivin在不同类型肾脏组织中的表达水平以及对肿瘤细胞凋亡的作用。[方法]选取肾细胞癌(RCC)患者的肿瘤组织、癌旁组织以及正常人的肾组织样本开展研究,通过免疫组化染色法和RT-PCR法分析不同组织样本中Survivin的表达水平。此外,使用RCC细胞系786-O细胞进行培养并转染过表达Survivin和阴性对照质粒,通过流式细胞术分析Survivin基因对肿瘤细胞凋亡的作用。[结果]与癌旁组织(43.33%)和正常组织(0%)相比,RCC组织(83.33%)中的Survivin阳性表达率最高(P<0.05)。在所有RCC组织样本中,RCC组织中男性的Survivin阳性表达率高于女性(90.91%vs 62.50%);年龄≥60岁患者的Survivin阳性表达率高于年龄<60岁的患者(94.74%vs 36.84%)(P<0.05)。RCC组织的细胞凋亡指数(0.64±0.32)与癌旁组织(1.19±0.26)、正常组织(4.78±1.07)之间差异显著(P<0.05),RCC组织的细胞凋亡指数中最低。与阴性对照组相比,过表达Surviv...     

丙型肝炎病毒NS5A蛋白对Huh7细胞周期的影响

应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒（HCV）全长开放阅读框的质粒pBRTM／HCV1～3011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3．1（-）中。通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3．1（-）中。再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达。在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3．1（-）转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化。G0／G1期由60．6％下降到49．7％,S期由23．9％上升到32．7％,而转染pcDNA3．1（-）细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大。从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用。     

siRNA下调EZH2 基因对肾癌细胞系769-P增殖的影响

目的：运用小干扰RNA下调果蝇zeste 基因增强子人类同源物（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）在肾癌细胞系769-P 中 的表达,明确其对肾癌细胞增殖的影响。方法：将处于对数生长期769-P 细胞分为实验组（experiment group）、阴性对照组(negative group)、空白对照组（blank group）,合成靶向EZH2 基因的小干扰RNA片段（EZH2-siRNA）和无效序列片段后,通过脂质体介导分 别转染至实理组和阴性对照组,空白对照组未做任何处理。以qRealtime-PCR 检测EZH2 基因mRNA 水平的变化情况,以MTT 法检测各组细胞增殖变化;流式细胞术（FCM）检测转染后细胞周期变化情况。结果：实理组中EZH2 在mRNA 表达水平明显受 抑制;MTT实验中第4 天始,实验组中769-P 细胞的增殖能力开始受抑制,第5 天时实验组细胞抑制更明显,与阴性对照组和空 白组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。siRNA 转染后实验组中G0/G1 期细胞比例明显增多(81.32± 3.14)%,与阴性对照组 (44.13± 1.52)%和空白对照组(45.71± 2.32)%差异有统计学意义。结论：EZH2-siRNA 可有效下调并抑制肾癌细胞769-P的增殖, EZH2在肾癌的发生、发展中发挥了重要作用,为下一步研究肾癌基因治疗提供了理论支持。     

siRNA下调EZH2基因对肾癌细胞系769-P增殖的影响

目的：运用小干扰RNA下调果蝇zeste基因增强子人类同源物（enhancer ofzeste homolog 2,EZH2）在肾癌细胞系769-P中的表达,明确其对肾癌细胞增殖的影响。方法：将处于对数生长期769-P细胞分为实验组（experiment group）、阴性对照组（negative group）、空白对照组（blank group）,合成靶向EZH2基因的小干扰RNA片段（EZH2-siRNA）和无效序列片段后,通过脂质体介导分别转染至实理组和阴性对照组,空白对照组未做任何处理。以qRealtime-PCR检测EZH2基因mRNA水平的变化情况,以MTT法检测各组细胞增殖变化;流式细胞术（FCM）检测转染后细胞周期变化情况。结果：实理组中EZH2在mRNA表达水平明显受抑制;MTT实验中第4天始,实验组中769-P细胞的增殖能力开始受抑制,第5天时实验组细胞抑制更明显,与阴性对照组和空白组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。siRNA转染后实验组中G0/G1期细胞比例明显增多（81.32±3.14）%,与阴性对照组（44.13±1.52）%和空白对照组（45.71±2.32）%差异有统计学意义。结论：EZH2-siRNA可有效下调并抑制肾癌细胞769-P的增殖,EZH2在肾癌的发生、发展中发挥了重要作用,为下一步研究肾癌基因治疗提供了理论支持。     

基于数据挖掘分析ATP1A1基因在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的:通过数据挖掘分析ATP1A1在肾透明细胞癌中的表达及意义。方法:通过Oncomine数据库检索关于ATP1A1的mRNA信息,采用The Human Protein Atlas分析ATP1A1蛋白在正常肾组织和肾透明细胞癌中表达情况,GEPIA网站中TCGA数据对ATP1A1低表达的肾透明细胞癌患者进行生存分析,Meth HC数据库分析ATP1A1甲基化水平和蛋白相互作用,利用String-DB数据分析ATP1A1与上下游蛋白的相互作用。结果:肾透明细胞癌(Clear cell Renal Cell Carcinoma,cc RCC)组织中ATP1A1的mRNA表达水平较正常对照组明显降低。免疫组化结果证实ATP1A1蛋白质表达变化与mRNA相似。TCGA数据中得出ATP1A1低表达患者的总体生存期明显短于高表达组患者。此外,ATP1A1基因启动子区在肾透明细胞癌中的甲基化水平明显高于正常肾组织中。同时,ATP1A1与ATP1B1、FXYD2、ATP1B2等蛋白可能存在相互作用。结论:大数据分析结果表明ATP1A1在肾透明细胞癌中低表达,并与其发生发展相关,可能作为其潜在的治疗靶点。     

PC-1基因在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2不同细胞周期的表达

目的:检测PC-1基因在前列腺癌细胞周期中各时间点的表达变化。方法:用200 ng/mL诺可唑(nocoda-zole)处理前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2,16 h后使细胞处于G2/M期,在不同时间点收获细胞,分别进行流式分析和Western印迹,检测PC-1基因的表达。结果:流式分析和Western印迹结果显示,在G2/M期,LNCaP和C4-2前列腺癌细胞系中PC-1基因高表达。结论:PC-1基因的表达与前列腺癌细胞的细胞周期有关,提示PC-1可能在细胞周期调控中发挥作用。     

肾透明细胞癌Caki-1细胞系差异表达基因的生物信息学分析

目的比较肾透明细胞癌Caki-1细胞系与正常肾上皮细胞系ASE-5063中的差异表达基因（DEGs）,寻找潜在的肾透明细胞癌特异性分子标志物。 方法利用GEO数据库自带的GEO2R在线分析工具分析基因芯片GSE78179,将筛选出的DEGs分别导入Metascape、STRING以及Cytoscape进行综合分析并筛选出核心基因。最后使用FunRich等软件对筛选出的核心基因进行GO和KEGG富集分析。 结果共筛选出562个DEGs,其中上调基因345个,下调基因217个。进一步使用MCODE筛选出36个关键基因,GO功能分析发现这些基因与细胞粘附分子活性、趋化因子活性、细胞通讯和信号转导等密切相关;KEGG通路富集结果则表明差异基因主要集中在趋化因子信号通路、TNF信号通路以及NF-κB信号通路等多种与肿瘤相关的通路上。 结论运用生物信息学方法筛选出肾透明细胞癌Caki-1细胞系中DEGs,其中数个核心基因广泛参与多种肿瘤的病理进程,但尚未在肾透明细胞癌有相关研究报道,提示其可能是治疗肾透明细胞癌的潜在靶点。     

细胞周期素G1和G2在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌（尿路上皮癌）中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2000-2006年有完整临床和病理资料的膀胱移行细胞癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱移行细胞癌和5例癌旁组织中细胞周期素G1和G2的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对细胞周期素G1和G2的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK（q）检验。结果细胞周期素G1在膀胱移行细胞癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。而细胞周期素G2在膀胱移行细胞癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱移行细胞癌与癌旁组织相比,差异有显著性（P〈0.05）。随着移行细胞癌组织中细胞周期素G1表达的增高,周期素G2的表达却显著下降,两者呈显著负相关（P〈0.01）。结论细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌与癌旁组织中对细胞周期调控和/或DNA修复起了重要作用,并参与了诱导细胞凋亡的过程。     

囊性肾细胞癌5例超声特征及诊断体会

目的：提高对囊性肾细胞癌的认识。方法：回顾我院5例经病理诊断为囊性肾细胞癌病例的超声图像、临床症状和预后随访。结果：肿瘤声像图在肾囊肿的基础上,分为(1)单房囊肿型(2例),囊壁见光斑,不均匀增厚,或乳突状突起。(2)多房囊肿型(2例)。(3)低回声实体型(1例)。CDFI、CDF在肿瘤的周围、内部及囊壁均无明显异常血流信号。5例患者均无明显临床症状,特别是血尿,全部为透明细胞癌,均行根治性切除术,无淋巴转移,均无复发和转移。结论：囊性肾细胞癌是一种罕见的肾细胞癌,是少血管性肿瘤,一般为早期,临床上一般无症状,预后较好。超声显示复杂性囊肿在临床上要引起重视。     

去泛素化酶在肾细胞癌中的作用

肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是成人肾脏的原发性恶性肿瘤。泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system,UPS）对控制蛋白质水平和调节生理病理过程至关重要。去泛素化酶（deubiquitinases,DUBs）是UPS的关键成分,特别是从靶蛋白中去除泛素链,通过严格调节正常生理学中泛素化和去泛素化之间的平衡,对蛋白质稳态和质量控制显示出至关重要的作用。越来越多的研究表明,功能异常的DUBs与RCC的进展和转移有关。根据底物的不同,一些DUB可能会抑制RCC,而另一些则促进。本文综述了RCC相关DUB的最新研究进展,描述了其分类、功能作用,总结了DUB在RCC中的作用和作用机制,并讨论了靶向DUBs用于癌症治疗。     

Tubulocystic Renal Cell Carcinoma: A Great Imitator

Tubulocystic renal cell carcinoma (TCRC) is a rare renal tumor. Patients are usually asymptomatic; it is usually detected incidentally, during imaging studies for Bosniak type III and type IV renal cysts. These tumors rarely metastasize. The role of targeted therapy in such rare tumors is still controversial. We report a case of TCRC initially presented as a Bosniak type II renal cyst and was discovered ultimately to be a metastatic disease. This type of presentation might broaden our understanding of this rare disease.     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及其诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

通过RT-PCR的方法克隆H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并构建了真核表达载体pCMV-Myc/NS1。将此真核表达质粒转染肺腺癌细胞A549,48 h后,经Western印迹检测,NS1基因能在细胞中正确表达。经荧光显微镜、透射电镜观察和流式细胞仪检测,发现该株流感病毒的NS1蛋白可诱导肺腺癌细胞A549凋亡。     

COX-2 与mPGES-1 在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)和膜结合型前列腺素E2合成酶1(mPGES-1)在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法分别检测49例肾透明细胞癌组织标本和21例正常肾组织标本中COX-2和mPGES-1的表达。结果:COX-2在正常肾组织中的阳性表达率为4.8%,在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率为53.1%(P<0.05);mPGES-1在正常肾组织中的阳性表达率为4.8%,在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率为40.8%(P<0.05);COX-2和mPGES-1的高表达均与肾透明细胞癌的病理分级和临床分期无相关性(P>0.05);COX-2和mPGES-1在肾透明细胞癌中的表达呈正相关(P<0.05),r=0.5。结论:COX-2和mPGES-1在肾透明细胞癌发生及发展过程中共同发挥重要作用;COX-2和mPGES-1可能成为肾透明细胞癌新的治疗靶点。     

Cell death in the CNS of the Wnt-1 mutant mouse

Using the benzothiazolium-4-quinolium dye, TO-PRO-1, to detect cell death in live embryos, we labeled a developmental series of Wnt-1 null mutant and wild type embryos to determine if cell death contributed to the absence of the midbrain and rostral metencephalon observed in Wnt-1 mutant embryos. We found that there is no detectable cell death at early somite stages in Wnt-1 mutant embryos. However, we detected a significant, but transient, population of dying cells within the anterior dorsal metencephalon in 20–29 somite stage embryos. These cells located in the anterior dorsal metencephalon also stain positive using the TUNEL technique that utilizes terminal transferase to label DNA fragments that are typical in the nuclei of apoptotic cells. Thus, programmed cell death plays a role in the loss of the metencephalon, but apparently does not contribute to the earliest aspect of the mutant phenotype, namely the loss of the midbrain. © 1996 John Wiley & Sons, Inc.     

Wnt-5a抑制上皮性卵巢癌中β-catenin和MMP-26的表达及肿瘤细胞的迁移

Wnt-5a是Wnt信号转导途径中一个重要的成员,可影响Tcf/Lef转录因子,调控特定基因的表达．令人费解的是,它在不同肿瘤中具有截然不同的促进或抑制肿瘤作用．目前关于Wnt-5a在卵巢癌中的表达与功能尚不十分清楚．免疫组织化学检测显示,Wnt-5a在卵巢癌组织中的表达低于正常卵巢组织．蛋白质免疫印迹法检测揭示,Wnt-5a在卵巢癌细胞株A2780中表达低于正常卵巢细胞株TC-1,不同浓度Wnt-5a作用下 A2780细胞内β-catenin表达降低．实时荧光定量PCR检测mRNA揭示,不同浓度Wnt-5a作用下A2780细胞内β-catenin和MMP-26表达降低．细胞划痕、Tanswell法显示,Wnt-5a可抑制A2780细胞迁移．本研究结果提示,Wnt-5a在卵巢癌中扮演抑制肿瘤的角色,与抑制β-catenin和MMP-26表达、肿瘤的细胞运动能力有关．     

异常激活的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶通过上调周期蛋白D1表达促进肾透明细胞癌增殖

葡萄糖6-磷酸脱氢酶（glucose 6-phosphate dehydrogenase,G6PD）为磷酸戊糖途径的调节酶。研究表明,G6PD与多种恶性肿瘤的发生密切相关。然而,G6PD在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma, ccRCC）中的功能及其作用机制却鲜有报道。本研究通过TCGA数据分析发现,G6PD在肾透明细胞癌TNM Ⅲ/Ⅳ期mRNA表达水平显著升高,与患者的性别、原发肿瘤直径、淋巴结转移、远端转移、病灶一侧的偏重性、病理分级以及TNM临床分期密切相关。并且,G6PD异常激活有可能成为评价肾透明细胞癌患者不良预后的分子。细胞系检测结果提示,与对照293T细胞及恶性程度较低的786-O细胞相比,恶性程度较高的Caki-1细胞中的G6PD表达及活性明显增加。基因稳定转染结合CCK8分析结果显示,G6PD过表达或异常激活可显著提高293T及786-O细胞的增殖能力,并且促进786-O细胞中周期蛋白D1基因表达上调。综上,本研究通过TCGA数据库分析和稳定细胞系检测及CCK8分析,结果显示,G6PD在肾透明细胞癌中异常激活,并可上调细胞周期蛋白D1表达,进而促进肿瘤细胞增殖。该研究为进一步揭示肾透明细胞癌分子发病机制以及开发有效的靶向治疗方案提供了借鉴。