拟南芥不同组织细胞对DAPI染色的差异分析

4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)作为一种DNA特异性荧光染料,在荧光显微观察各种生物细胞中得到了广泛应用。然而,植物不同组织细胞响应DAPI染色目前仍缺乏比较系统的表征。本文利用模式植物拟南芥,探究了其各个组织细胞对DAPI染色的差异。首先我们构建了一个细胞核定位的稳转基因植物UBQ10∶BAG5-eYFP。接下来的试验发现在非固定的BAG5-eYFP植物活细胞中,只有表皮细胞和叶肉细胞能被DAPI染色。相比于叶绿体,线粒体中的DNA对DAPI染色较为敏感,表现出DAPI荧光和线粒体marker CoxIV-RFP很好的共定位。多聚甲醛固定之后,根部分生区、气孔保卫细胞能被DAPI染色。这些结果表明,拟南芥不同组织细胞对DAPI染色呈现出很大的差异。叶片表皮细胞和叶肉细胞对于探究植物活体细胞核的研究将会是一个很好的模型。     

线粒体

如果你能找到一点正在进行旺盛生长的面包霉菌丝(如将面包或馒头小块在潮湿温暖条件下发毛),并在油浸系高倍显微镜下仔细观察,在菌丝的细胞质内你会看到很多呈不规则运动的细小颗粒或杆状体。这些便是线粒体(Mitochondria)。可以用烟鲁绿对线粒体进行活体染色。目前已经知道,在动植物细胞内普遍存在有线粒体。它是一种以双层生物膜为基础形成的细胞器。这种细胞器在生物氧化过程中起着非常重要的作用。其主要功能是为细胞提     

活体染色

活体染色(vital staining)一般是指用无毒或毒性很小的染料,在不影响细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞的某些结构着色的一种实验方法。最早进行活体染色的是Paul Ehrlich(1885)他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲基蓝(美蓝)溶液中,再用显微镜来观察尚处在生活状态下的活细胞结构。当时荷兰植物生理学家Pfeffer(1887)也用活体染色的方法对水绵、蕴藻及浮萍叶的细胞进行了观察。但他们的研究没有引起人们的普遍重视,未能深入地开展     

植物细胞有丝分裂实验的染色改进

植物细胞有丝分裂实验的染色改进笔者采用０．０２％亚甲基蓝溶液来培养活体植物,从而省去课本中“装片制作的染色”过程,效果较好。１原理亚甲基蓝是一种活体碱性染色剂,低浓度的亚甲基蓝溶液对植物细胞基本无毒害作用,不影响植物体细胞的正常生命活动,同时能使活体...     

孔雀草花冠腺毛是观察线粒体的好材料

孔雀草花冠腺毛是观察线粒体的好材料高震（上海教育学院生物系,２００３３３）用孔雀草筒状花冠的腺毛水封片,不用染色,先低倍后高倍镜检细胞线粒体,其数量及布朗运动明显,因线粒体一般在分泌及巨长旺盛的细胞特别多,腺体毛细胞生长旺盛,分泌大量分泌液需要线粒体...     

超微结构研究中的铀-铅-铜染色方法

本文介绍了超微结构研究中的铀-铅-铜技术。铀-铅-铜方法能选择性地染色细胞内的线粒体、内质网和高尔基体,细胞的其他部分一般不染色,从而使这些细胞器在细胞内的分布非常突出。利用这一特点,可在透射电镜下观察半薄切片,研究线粒体、内质网和高尔基体的三维结构以及细胞器之间的相互关系。     

人外周血树突状细胞亚型的形态学观察

Ｓ１００ 蛋白染色是鉴定树突状细胞（ＤＣ） 的一种重要而可靠的方法。本文采用Ｓ１００ 蛋白免疫细胞化学方法及电镜观察, 对人外周血树突状细胞的亚型进行研究。结果表明： 人血ＤＣ在形态学上分为两个亚型－ Ⅰ型中等淋巴细胞大小, 线粒体少, 核内异染色质多; Ⅱ型胞体较大, 线粒体丰富, 异染色质少     

细胞周期蛋白依赖激酶Roscovitine诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roseovitine（Ros）诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡及其作用机制。方法：以不同浓度Ros（101．1M、20yM、40μM）处理细胞24h,采用AnnexinV-PI染色以流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax和Bad的表达,流式细胞仪检测线粒体膜电位（脚）变化。结果：Ros以剂量依赖的方式诱导A549细胞凋亡,同时Bad和Bax在胞浆的含量随着Ros剂量的增加而减少,而在线粒体中却出现相反的结果,线粒体膜电位随Ros剂量的增大而降低。结论：Ros可通过促进Bax和Bad由胞浆向线粒体易位,诱导NSCLCA549细胞由线粒体途径发生凋亡。     

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1改善血管紧张素Ⅱ介导的内皮功能紊乱（英文）

动力相关蛋白(dynamin-related protein 1,Drp1)与线粒体的动态变化有着密切的联系,是介导线粒体分裂的主要功能蛋白。本研究旨在探讨血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)对血管内皮细胞线粒体融合和分裂的影响以及Drp1功能抑制剂Mdivi-1对Ang II介导的内皮损伤是否有减轻作用。Ang II或联合Drp1抑制剂Mdivi-1处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)后,用Western blot检测Drp1、e NOS和凋亡相关酶的蛋白表达,用Mito Tracker Red染色观察细胞内线粒体形态,用JC-1探针染色检测线粒体膜电位变化,用DCFH-DA染色检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,用Transwell实验检测细胞迁移情况,用Annexin V/PI染色检测细胞凋亡情况。结果显示,Ang II处理12 h后,HUVECs的Drp1的表达水平显著升高,内皮细胞迁移、凋亡及ROS的生成显著增加,e NOS表达量显著降低;同时,Ang II处理还诱导了线粒体形态的改变,使网状的线粒体变成了短管状,并伴随着线粒体膜电位的下降。Mdivi-1可以显著逆转Ang II对内皮功能的上述损伤作用,提高内皮细胞线粒体膜电位及e NOS的表达量,降低细胞内ROS水平,抑制内皮细胞凋亡及迁移能力。以上结果提示,Drp1抑制剂Mdivi-1可以减轻Ang II介导的内皮损伤。     

白头翁汤正丁醇提取物诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡

目的探讨白头翁汤正丁醇提取物(Butyl alcohol extract of Bai Tou Weng decoction,BAEB)对白念珠菌生物被膜细胞凋亡的影响。方法分别以DCFH-DA染色和JC-1染色,用流式细胞仪检测白念珠菌生物被膜细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)变化;Annexin V-FITC/PI染色染色荧光显微镜观察白念珠菌生物被膜细胞磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻并检测凋亡率;FITC-VAD-FMK染色观察白念珠菌生物被膜细胞metacaspase活性;DAPI染色观察白念珠菌生物被膜细胞核形态。结果≥128μg/mL BAEB处理后白念珠菌生物被膜细胞内活性氧水平显著升高,线粒体膜电位显著降低,PS外翻增加,凋亡率明显升高,metacaspase酶活性显著升高,细胞核出现固缩和碎裂。结论白头翁汤正丁醇提取物可诱导白念珠菌生物被膜细胞凋亡。     

基于活体成像的表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型的建立

目的:探讨并建立可供药物评价或生物学功能研究的表达人PSCA抗原的荧光素酶小鼠肿瘤模型。方法:克隆人PSCA基因及荧光素酶基因luc,构建真核表达质粒pcDNA-PSCA及pcDNA-luc,共转染RM-1细胞株;照度计检测转染细胞的荧光素酶活性,RT-PCR及流式细胞术检测PSCA的表达,筛选出共表达荧光素酶及人PSCA的RM-PSCA/luc细胞株;将RM-PSCA/luc细胞接种C57BL/6小鼠,观察所致肿瘤的生长情况及小鼠存活状况,并对小鼠进行活体成像检测Luc的表达;采用免疫组织化学染色方法检测人PSCA在小鼠肿瘤组织中的表达。结果:筛选到了稳定共表达Luc及人PSCA抗原的RM-PSCA/luc细胞,接种实验小鼠全部成瘤,肿瘤生长迅速,小鼠平均存活38天;转染荧光素酶基因的肿瘤细胞生物特性稳定,活体成像仪检测到转染荧光素酶细胞在小鼠体内活体成像,荧光素酶表达活性的强弱能够反映肿瘤大小;免疫组织化学染色方法检测到小鼠肿瘤组织PSCA的表达。结论:成功构建了可用于活体成像表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型,为相关肿瘤药物及疫苗的研发奠定基础。     

齐墩果酸诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制研究

齐墩果酸(oleanolic acid,OA)是一种广泛存在于自然界中的五环三萜类天然化合物,已有研究表明OA具有抗肺癌活性,但是具体机制尚未完全阐释清楚。本研究旨在证实OA是否能够诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡,并探索该效应是否与线粒体凋亡通路相关。我们将不同浓度的OA作用于细胞后,使用MTT法检测A549细胞的生长情况。采用AV/PI法进行染色后,经流式细胞仪检测其凋亡率,同时使用Hoechst 33342染色并使用荧光显微镜观察并拍照;Westen-blotting检测OA对A549细胞的线粒体凋亡通路相关蛋白相对表达水平的影响。MTT结果显示OA能够抑制A549细胞的生长,并呈时间剂量依赖性。AV/PI法染色结果显示OA能够诱导A549细胞凋亡,亦呈时间剂量依赖性。Hoechst 33342法染色结果相似。Westen-blotting结果表明OA能够上调A549细胞线粒体凋亡通路相关蛋白Bax,t Bid,Cleaved caspase 3的相对表达水平,同时下调该通路Bcl-xl,Bcl-2的相对表达水平。以上所有的结果表明OA能够显著抑制肺癌A549细胞的生长并通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达水平而诱导其凋亡。     

天竺葵质体和线粒体双亲遗传的细胞学机理——雄性和雌性配子超微结构和DNA荧光的研究

天竺葵（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｕｍ ｈｏｒｔｏｒｕｍ Ｂａｉｌｅｙ）生殖细胞和精细胞在发育中始终存在质体和线粒体。在精细胞中,质体的体积大、数量多,具基质浓厚和在切面上多为环状的特点。线粒体在生殖细胞和精细胞中没有差异,体积较质体小得多,球形或杆状,边缘染色较深。在卵细胞中质体的含量比线粒体丰富,这两种细胞器的结构形态与精细胞的有明显的差异。细胞的质体多呈不规则的棒状和含淀粉粒。线粒体比精细胞的大２—３ 倍,许多为环状。ＤＮＡ 荧光的检测证明了在生殖细胞、精细胞和卵细胞中存在质体和线粒体类核。卵中的环状线粒体类核的形态在精细胞中是不存在的。本研究确定了雄性和雌性配子的质体和线粒体在结构形态上各具特点,可作为鉴别它们的标记,从合子中查明雄性质体和线粒体是否传递,以及在胚胎发育的早期雌雄亲本来源的细胞器的动态     

沉积物中活体底栖有孔虫的虎红染色方法比较研究

在有孔虫生态学研究中,区分底栖有孔虫活体与死亡壳体多使用虎红染色方法,但关于具体的染色时长、处理方式等方法描述比较简单,如仅有"采用虎红酒精染色",其具体方法常语焉不详,影响了研究结果比较的可靠性。为探求不同染色方法到底对实验结果产生多大偏差、有多少影响,本文利用经钙黄绿素培养的潮间带底栖有孔虫进行虎红酒精溶液方法对底栖有孔虫进行染色实验,结合活体有孔虫壳体生活时吸收的钙黄绿素能产生荧光效应,评估了不同保存条件下染色溶液的浓度、染色时间等处理方法下的染色效果。研究结果显示,2‰浓度的虎红酒精溶液适合区分活体与死亡底栖有孔虫壳体的染色要求,可以识别97%的活体底栖有孔虫;活体底栖有孔虫可以从一两个房室到多个房室被显著染色、呈现鲜艳的玫瑰红色,且这些被染色部分可以分布在早期、中期和后期房室。而实验保存处理方式以采集样品后立刻进行染色为佳,若条件限制则可使用纯酒精浸泡或冷冻保存处理后,尽快进行染色。染色时间一般在24小时以上较为合适,但对较长时间保存的样品则建议增加染色时长——两天以上,以达到染色效果。比较而言,酒精浸泡或冷冻保存比福尔马林浸泡样品具有较好的染色效果。     

细胞周期蛋白依赖激酶Roscovitine 诱导非小细胞肺癌A549 细胞凋亡及 其机制的研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制剂Roscovitine(Ros)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡及其作用机制。方法:以不同浓度Ros(10μM、20μM、40μM)处理细胞24h,采用Annexin V-PI染色以流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax和Bad的表达,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)变化。结果:Ros以剂量依赖的方式诱导A549细胞凋亡,同时Bad和Bax在胞浆的含量随着Ros剂量的增加而减少,而在线粒体中却出现相反的结果,线粒体膜电位随Ros剂量的增大而降低。结论:Ros可通过促进Bax和Bad由胞浆向线粒体易位,诱导NSCLC A549细胞由线粒体途径发生凋亡。     

青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制.方法:用青蒿素处理K562细胞.通过MTT比色法检别细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析;Western-blotting测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素C的表达.结果:青蒿素抑制K562细胞的增殖,IC5D为1.5× 10-5mol·L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测G2期细胞比例增高,S期减少;Western-blotting检测药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带.结论:青蒿素可能通过线粒体细胞色素C途径诱导K562细胞凋亡.     

91份精液检测结果

目的对91份精液标本进行常规检测．并对两种方法检测白细胞结果作对比分析。方法直接涂片镜检和经特殊处理后瑞-姬氏染色镜检精液中细胞和精子形态分析。精子体外活体染色测精子的活率。结果直接涂片镜下均查到自细胞,占100％,经染色后确定为自细胞者25例,占27．5％,其中非自细胞60份,占66％,有5例检出阴道毛滴虫。检出率5．5％。假死精子检出率25．3％。结论直接涂片镜检精液具备了感染性特征,尚不能确诊,对精液有形成分。精囊感染的确诊,必须染色,仔细检测。     

四季海棠成熟胚珠的组织化学及超微结构的初步研究

应用四季海棠的胚珠,进行石蜡切片,做PAS反应、苯胺兰黑染色等组织化学染色;又做超薄切片,进行超微结构观察。PAS反应:胚囊内染色深,珠被浅,各处均有红色淀粉粒。苯胺兰黑染色;显示胚囊内蛋白质丰富,卵核质兰色,核仁深兰,反足细胞更深。在超微结构中:珠被细胞中见到细胞核、线粒体、质体、内质网、同心圆潴泡、液泡等,近珠孔处珠被细胞内线粒体较多。珠心细胞内可见微管及其它细胞器。胚囊内助细胞可见丝状器。见到卵核、极核、线粒体、内质网、液泡、质体(其中未见淀粉粒)等。     

鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定

以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液.在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞.对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst 33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白.建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法.     

α-生育酚对脑皮层神经元线粒体的保护作用

目的探讨α-生育酚对神经元线粒体的保护作用。方法将神经元细胞进行分组,分为：（1）正常对照组,（2）单纯氧自由基损伤组,（3）α-生育酚保护组。利用Fenton反应造成神经元细胞氧自由基损伤,用激光共聚焦显微镜观察各组神经元JC-1染色结果,并检测各组神经元琥珀酸脱氢酶（SDH）和细胞色素氧化酶（CCO）活性。结果（1）JC-1染色结果分析：α-生育酚保护组神经元线粒体功能强于单纯氧自由基损伤组。（2）SDH和CCO酶活性分析：α-生育酚保护组神经元SDH和CCO酶活性高于单纯氧自由基损伤组。结论α-生育酚可以有效对抗氧自由基对神经元线粒体的损伤。