miR-199b-3p通过靶向PLCε抑制前列腺癌细胞的恶性增殖

该研究的目的是确定miR-199b-3p在前列腺癌(PCa)中的表达及其对PCa细胞增殖的影响及作用机制。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199b-3p在PCa组织、良性前列腺增生(BPH)组织、PCa细胞及人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中的表达,并分析其表达与PCa临床病理特征的关系。蛋白质印迹法(Western blot)用于检测磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(PLCε)的表达。采用CCK-8法和克隆形成实验对其体外增殖进行评估。Edu测定法用于检测细胞对Edu的吸收。荧光素酶报告实验被用来验证miR-199b-3p和PLCε的靶向结合情况。结果显示,在PCa组织中miR-199b-3p的表达水平明显低于BPH组织,且与临床病理特征中的组织学分期相关。上调miR-199b-3p可以显著抑制PCa细胞的增殖和Edu的摄取能力,PLCε被鉴定为miR-199b-3p的下游靶基因,且其表达量与miR-199b-3p的表达量呈负相关。此外,补救实验结果显示,上调PLCε能够逆转miR-199b-3p在PCa细胞增殖中的抑制作用。总之,miR-199b-3p可通过靶向PLCε 3?非编码区(3?-UTR)负性调控PLCε进而抑制PCa细胞的恶性增殖。     

MiR-324-5p可能通过靶向淀粉样前体蛋白抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡

miRNAs是一种非编码的小RNA,通过靶向mRNA的3′UTR调控基因的转录后翻译。为明确miR-324-5p对棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用和机制,体外培养3T3-L1脂肪细胞,利用棕榈酸诱导细胞凋亡的同时过表达或抑制miR-324-5p,通过Annexin-V/FITC染色、RT-qPCR等方法检测miR-324-5p对3T3-L1脂肪细胞凋亡的作用。通过在线软件预测miR-324-5p的靶基因并进行验证。结果显示,过表达miR-324-5p能够显著抑制凋亡相关基因BCL-2相关X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)和胱天蛋白酶3(caspase3)的表达水平(P0.05);而抑制miR-324-5p后能够显著促进这些基因的表达(P0.05);靶基因预测及验证结果表明,miR-324-5p能够显著降低淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的表达水平(P0.05)。本研究认为,miR-324-5p可能通过靶定APP抑制棕榈酸诱导的3T3-L1脂肪细胞凋亡。     

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。     

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。     

miR-324-5p、miR-605-3p在脑胶质瘤组织的表达及与临床病理参数和预后的关系

摘要 目的：探讨微小核糖核酸（miRNA）-324-5p、miR-605-3p在脑胶质瘤组织的表达及与临床病理参数和预后的关系。方法：选取2018年1月～2019年12月徐州医科大学附属医院收治的90例脑胶质瘤患者。收集术中部分瘤组织和瘤旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测miR-324-5p、miR-605-3p表达。根据脑胶质瘤组织中miR-324-5p、miR-605-3p表达的平均值分为高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法分析不同miR-324-5p、miR-605-3p表达脑胶质瘤患者生存情况,采用多因素Cox回归分析脑胶质瘤患者预后的影响因素。结果：与瘤旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-324-5p、miR-605-3p表达降低（P＜0.05）。不同分化程度、淋巴结转移、世界卫生组织（WHO）中枢神经系统肿瘤分类的脑胶质瘤患者miR-324-5p、miR-605-3p表达比较有差异（P＜0.05）。90例脑胶质瘤患者3年总生存率为36.67%（33/90）。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-324-5p高表达组、miR-605-3p高表达组总生存率高于miR-324-5p低表达组、miR-605-3p低表达组（P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示,低分化、淋巴结转移和WHO中枢神经系统肿瘤分类Ⅲ～Ⅳ级为脑胶质瘤患者死亡的独立危险因素,miR-324-5p和miR-605-3p升高为独立保护因素（P＜0.05）。结论：脑胶质瘤组织中miR-324-5p、miR-605-3p呈低表达,与分化程度、淋巴结转移、WHO中枢神经系统肿瘤分类有关,miR-324-5p、miR-605-3p低表达还可导致不良预后。     

miR-659-3p靶向CTNNBIP1调控甲状腺癌细胞凋亡的机制

[目的]探讨miR-659-3p在甲状腺癌细胞中的潜在功能和机制。[方法]纳入甲状腺乳头癌患者60例,比较甲状腺患者癌旁组织和癌组织中miR-659-3p的表达水平。过表达或敲低miR-659-3p后检测甲状腺癌细胞TPC-1的增殖水平和凋亡水平,并进行底物鉴定。[结果] miR-659-3p的表达水平在60个甲状腺癌组织中也显著上调(P<0.05)。miR-659-3p敲低后TPC-1的增殖水平显著下降(P<0.05)、 TPC-1的凋亡水平显著上升(P<0.05)。敲低CTNNBIP1时,TPC-1的凋亡水平下降(P<0.05)、 TPC-1的细胞活力水平上升(P<0.05)。过表达miR-659-3p时,CTNNBIP1的蛋白水平和mRNA水平显著下降(P<0.05);敲低miR-659-3p时,CTNNBIP1的蛋白水平和mRNA水平显著上升(P<0.05)。过表达miR-659-3p后,Wnt/β-catenin通路的关键蛋白β-catenin的核定位增多;敲低miR-659-3p后,β-catenin的核定位减少。[结论] miR-...     

miR-124-3p靶向TLR4抑制流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应

目的:探讨miR-124-3p靶向Toll样受体4(TLR4)对流感病毒性肺炎小鼠炎症反应的影响。方法:建立流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染所致病毒性肺炎小鼠模型,采用RT-qPCR测定肺组织miRNA-124-3p表达水平。病毒性肺炎小鼠尾部注射miR-124-3p agomir或agomir NC后,第4 d摘眼球取血并取出肺组织,ELISA检测血浆中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察肺组织病理变化,Western印迹测定TLR4和核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白水平。结果:与正常肺组织比较,病毒性肺炎小鼠肺组织miR-124-3p表达量降低(P0.001);miR-124-3p agomir注射组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α明显低于注射agomir NC组和模型组(P0.001),而高于正常组;HE染色结果表明miR-124-3p agomir注射组小鼠的肺组织炎细胞渗出和浸润较agomir NC组和模型组减轻;与agomir NC组比较,miR-124-3p agomir注射组的TLR4、NF-κB p65表达减少(P0.01)。结论:miR-124-3p抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应。     

miR-25抑制结肠癌细胞凋亡

为了通过结肠癌细胞实验,探究miR-25对结肠癌细胞凋亡的影响,本研究通过qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-25的表达情况;通过CCK-8法检测miR-25抑制剂转染组细胞活力状态;将miR-25抑制剂转染至结肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;通过Caspase-3活性检测试剂盒检测结肠癌细胞中Caspase-3表达情况;通过流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平;通过Elisa试剂盒检测4-HNE、GSH和MDA含量。结果表明:结肠癌细胞中miR-25表达明显高于正常结肠粘膜组;miR-25抑制剂转染结肠癌细胞后,结肠癌细胞活力明显低于空载体对照组;miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中Bax蛋白显著高于空载体对照组(p0.05),且Bcl-2蛋白低于空载体对照组(p0.05),Caspase-3活性高于空载体对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于空载体对照(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后结肠癌细胞中4-HNE (p0.05)和MDA (p0.05)含量明显增加,GSH (p0.05)含量显著降低。miR-25抑制剂可促进结肠癌细胞凋亡,其机制可能与增加结肠癌细胞中ROS水平导致氧化应激水平增强有关。     

肝细胞癌患者血清外泌体microRNA表达鉴定

目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、肝硬化患者(LC)及乙型肝炎病毒阳性的肝细胞癌患者(HCC)血清外泌体中的表达。结果:高通量测序筛选到肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNA共88种,其中58种表达上调,30种表达下调。选择其中8种差异表达的miRNAs进行q RT-PCR验证,结果显示,此8种miRNAs在细胞上清外泌体、细胞内、癌与癌旁组织中的表达趋势与测序结果一致。miR-221-3p和miR-224-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著高于Health组、CHB组和LC组(P0.01),miR-124-3p和let-7a-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著低于其他各组(P0.05)。四个组中,miR-21-5p、miR-191-5p、miR-34a-5p和miR-122-5p的表达水平不存在显著性差异(P0.05)。结论:血清外泌体中的miR-221-3p、miR-224-5p、miR-124-3p和let-7a-5p可能成为肝细胞癌的候选标志物。     

lncRNA ROR1-AS1通过靶向miR-758-3p调控神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

该研究旨在探讨ROR1-AS1对神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制。收集67例神经母细胞瘤组织和瘤旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织中ROR1-AS1和miR-758-3p的表达情况。转染ROR1-AS1小干扰RNA、miR-758-3p模拟物或共转染ROR1-AS1小干扰RNA与miR-758-3p抑制剂至SK-N-SH细胞,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9的蛋白表达情况。双荧光素酶报告基因实验验证ROR1-AS1和miR-758-3p的调控关系。结果显示,神经母细胞瘤组织中ROR1-AS1的表达明显高于瘤旁组织,而miR-758-3p表达明显低于瘤旁组织。抑制ROR1-AS1表达或过表达miR-758-3p降低了SK-N-SH细胞活性、迁移数和侵袭数及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,而提高了细胞凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平。ROR1-AS1在SK-N-SH细胞中靶向负调控miR-758-3p表达,干扰miR-758-3p可逆转抑制ROR1-AS1对SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。这提示抑制ROR1-AS1表达可能通过靶向上调miR-758-3p阻碍SK-N-SH细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,ROR1-AS1有可能成为神经母细胞瘤治疗的分子靶点。     

miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用研究

为探讨miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用,采用qRT-PCR法和Western blot法测定24例乳腺癌组织和癌旁正常组织miR-486-3p和凋亡相关蛋白的表达水平;采用qRT-PCR法测定乳腺癌细胞MCF-7、HBL101和正常乳腺细胞MCF10A中miR-486-3p的表达水平。将MCF-7、HBL101和MCF10A细胞分为正常对照组、模拟物对照组、miR-486-3p模拟物组、抑制物对照组和miR-486-3p抑制物组,各组细胞转染后进行培养,采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,采用细胞划痕法测定MCF-7和MCF10A细胞的迁移情况,采用Transwell法和流式细胞术测定各组细胞侵袭和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western blot法测定凋亡相关蛋白mRNA和蛋白的表达水平。该研究得出乳腺癌组织中miR-486-3p表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05),乳腺癌组织中Bcl-2蛋白表达水平较癌旁正常组织显著增加(P0.05),而Bax和Caspase-3蛋白表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05)。乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p表达水平较正常乳腺细胞MCF10A显著降低(P0.05),其中以乳腺癌细胞MCF-7中miR-486-3p表达水平最低。miR-486-3p模拟物组乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p的表达水平较模拟物对照组显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组miR-486-3p的表达水平较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7和HBL101细胞在24 h、48 h和72 h时的吸光度值较模拟物对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组在24 h、48 h和72 h时吸光度值较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著宽于模拟物对照组(P0.05),而miR-486-3p抑制物组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著窄于抑制物对照组(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞穿膜细胞数量较模拟剂对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组穿膜细胞数量较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞凋亡数量较模拟物对照组显著升高(P0.05),而miR-486-3p抑制物组细胞凋亡数量较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较模拟物对照组显著降低(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组Bcl-2表达水平较抑制物对照组显著升高(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著降低(P0.05)。总之,miR-486-3p是乳腺癌的抑癌基因,可能通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,而对乳腺癌细胞的凋亡起促进作用。     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

miR-181-5p下调人非小细胞肺癌细胞KLF6表达并抑制其增殖、迁移和侵袭

[目的]探讨miR-181-5p下调人非小细胞肺癌细胞KLF6表达并抑制其增殖、迁移和侵袭的作用。[方法]检测30例肺癌和癌旁组织中miR-181-5p和KLF6 mRNA水平,并分析miR-181-5p与NSCLC患者临床病理特征的相关性。用萤光素酶检测miR-181-5p对KLF6的调控作用,将miR-NC、miR-181-5p inhibitor和miR-181-5p mimic转染到A549细胞,采用RT-PCR法检测各组A549细胞中miR-181-5p和KLF6 mRNA表达,同时分别采用MTT法和Transwell法检测各组A549细胞增殖、迁移和侵袭情况。[结果]肺癌组织的miR-181-5p和KLF6 mRNA表达水平均低于癌旁组织(P<0.05);miR-181-5p的表达水平与年龄、性别和是否吸烟不相关(P>0.05);miR-181-5p的表达水平与肿瘤直径、是否转移、TNM分期相关(P<0.05);miR-181-5p与KLF6有潜在的结合位点;转染miR-181-5p mimic可明显增加KLF6-wt的荧光素酶活性,对KLF6-mut没有...     

miR-423-3p通过靶向SUFU调节结肠癌细胞对5-Fu的敏感性

目的 研究miR-423-3p在结肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药中的作用和机制.方法 逆转录实验分析5-Fu耐药结肠癌组织和细胞中miR-423-3p的表达水平,MTT和流式细胞实验分析抑制miR-423-3p对5-Fu耐药结肠癌细胞活性和凋亡的影响,双荧光素实验检测5-Fu耐药结肠癌细胞中miR-423-3p的靶基...     

circFNDC3B/miR-655-3p轴调控乳腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡

为了探讨circFNDC3B对乳腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及可能机制,该研究首先采用RT-qPCR法检测了83例乳腺癌组织及乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D、Bcap-37)中circFNDC3B和miR-655-3p表达;然后分别转染circFNDC3B小干扰RNA、miR-655-3p模拟物、miR-655-3p抑制剂或共转染circFNDC3B小干扰RNA与miR-655-3p抑制剂至MCF-7细胞中,采用CCK-8法检测了细胞增殖,流式细胞术检测了细胞凋亡和周期,Western blot法检测了细胞中CyclinD1与Cleaved-caspase-3的蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证了miR-655-3p与circFNDC3B的调控关系。结果显示,乳腺癌组织和细胞系中circFNDC3B表达升高(P0.05),而miR-655-3p表达降低(P0.05)。下调circFNDC3B或上调miR-655-3p后,MCF-7细胞增殖活性和CyclinD1蛋白表达量降低,细胞周期进程受到阻滞,细胞凋亡率与Cleaved-caspase-3蛋白表达量增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。circFNDC3B靶向结合并负调控miR-655-3p。下调miR-655-3p对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响与上调miR-655-3p相反。下调miR-655-3p逆转下调circFNDC3B对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。这说明,circFNDC3B可能通过抑制miR-655-3p的表达促进乳腺癌细胞增殖和细胞周期进程,并阻碍细胞凋亡。     

circNEIL3靶向miR-218-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

该文旨在探讨circNEIL3对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。采用qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织、癌旁组织、人口腔鳞癌细胞(CAL-27、SCC-25、SCC-9、HSC-3)以及正常口腔角质细胞HOK中circNEIL3、miR-218-5p的表达量;以CAL-27细胞为研究对象,si-circNEIL3、miR-218-5p mimics、si-NC、miR-NC分别转染至CAL-27细胞, si-circNEIL3和antimiR-NC、si-circNEIL3和anti-miR-218-5p分别共转染至CAL-27细胞; MTT法检测CAL-27细胞增殖情况;流式细胞术检测CAL-27细胞凋亡情况; Transwell检测CAL-27细胞侵袭和迁移情况。双荧光素酶报告实验检测circNEIL3与miR-218-5p的靶向关系; Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达量。与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中circNEIL3的表达量升高(P<0.01),miR-218-5p的表达量降低(P...     

miR-182在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察前列腺癌组织及不同前列腺癌细胞系中miR-182的表达,并探讨下调其表达对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测30例前列腺癌组织和30例相应的癌旁组织以及前列腺正常上皮RWPE-1细胞、前列腺癌PC-3、LNCa P和DU145细胞中miR-182的表达,进一步采用Lipfectamine 2000脂质体转染miRNA-182 inhibitor和阴性对照miRNA于PC-3细胞后,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)法检测转录因子FOXO1、血管内皮生长因子(VEGF)和抑癌基因p53蛋白的表达。结果:miR-182在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.05);miR-182在前列腺癌细胞系PC-3、LNCa P和DU145中的表达均高于前列腺正常上皮细胞RWPE-1(P0.05),其中PC-3细胞中miR-182表达水平最高。转染miRNA-182 inhibitor至PC-3细胞成功下调miR-182表达后,细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡能力明显增强,FOXO1表达水平显著升高,VEGF和p53的表达明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-182在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,下调miR-182的表达可能通过增加FOXO1的表达并减少VEGF和p53的表达,抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-29b对人子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响

为了探讨miR-29b对人子宫内膜癌(endometrial cancer, EC) RL95-2细胞凋亡的影响及机制,本研究将RL95-2细胞转染miR-29b mimics和miR-NC后,采用MTT法检测细胞活力;运用Annexin V-PI法检测细胞凋亡;采用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达;使用流式细胞术检测ROS水平。研究结果显示:与miR-NC组比较,miR-29b mimics过表达miR-29b组在培养24 h和48 h后的RL95-2细胞活力显著降低(p0.05)。与miR-NC组比较,miR-29b mimics组的RL95-2细胞凋亡率显著增加(p0.05)。与miR-NC组比较,miR-29b mimics组的RL95-2细胞Cleaved caspase-3蛋白表达水平显著增加(p0.05)。此外,miR-29b mimics组的RL95-2细胞ROS水平明显低于miR-NC组(p0.05)。本研究的初步结论表明:miR-29b可能通过调控ROS水平促进人RL95-2细胞凋亡。     

miR-382-5p通过靶基因PTEN阻滞NB4细胞分化

该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化; Western blot检测PTEN及髓系分化标志物CD11b的蛋白质水平;实时荧光定量PCR检测miR-382-5p的表达水平;过表达PTEN的慢病毒载体分别感染NB4细胞和HL-60、THP-1细胞;脂质体转染miR-382-5p的模拟剂(mimics)和特异性抑制剂(inhibitors)NB4细胞。结果显示, PTEN促进ATRA诱导的NB4细胞分化,而在HL-60和THP-1细胞中并无明显促分化效应。NB4细胞中,脂质体转染miR-382-5p mimics在mRNA和蛋白水平均抑制了PTEN的表达,并且抑制了ATRA诱导的分化;转染miR-382-5p inhibitors则恢复了PTEN表达,同时促进了ATRA诱导的急性早幼粒细胞NB4细胞的分化。该文结果提示, miR-382-5p靶向抑制了PTEN的表达从而抑制ATRA诱导的NB4细胞分化。     

miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

[目的]探讨miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为。[方法]用双萤光素酶检测试剂分析荧光素酶活性,同时应用RT-PCR检测MRC5细胞和A549细胞中miR-28-5p和MTSS1 mRNA水平;用Lipofectamine法将miR-NC、miR-28-5p inhibitor和miR-28-5p mimic转染到A549细胞,培养48h后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和迁移情况,同时蛋白印迹法法检测A549细胞中MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3表达。[结果] miR-28-5p与MTSS1有潜在的结合位点;转染miR-28-5p mimic可明显降低MTSS1-WT的荧光素酶活性,对MTSS1-MUT没有影响,而miR-28-5p inhibitor则表现出相反作用,表明miR-28-5p与MTSS1存在靶向调节作用;A549细胞中miR-28-5p mRNA的相对表达量高于MRC5细胞(P<0.05),A549细胞中MTSS1 mRNA的相对表达量低于MRC5细胞(P<0.05);通过miR-28-5p inhibitor降低miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达增加,细胞增殖和迁移降低(P<0.05);通过miR-28-5p mimic增加miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达降低,细胞增殖和迁移增加(P<0.05)。[结论] miR-28-5p在A549细胞中高表达,通过基因干预降低miR-28-5p表达后,miR-28-5p通过靶向MTSS1的3’端非编码区,提高MTSS1的翻译水平,抑制A549细胞的恶性生物学行为。