免疫沉淀法测定乳酸脱氢酶同工酶1的研究

应用免疫沉淀法测定了乳酸脱氢酶同工酶1(LD1).血清与抗血清用量为10:1,加入抗血清5min后再加入与血清量相等的饱和硫酸铵溶液.离心后测定上清液中的LD.总酶活性在618U/L内线性关系良好.二份标本批内精度CV值分别为3.76%和4.70%,批间CV值为7.00%,免疫沉淀法与电泳法高度相关(n=22,r=0.976).72例正常人LD参考值为102.31±16.4U/L,LD1为23.65±4.39U/L,LD1/LD为23.12±3.85%.免疫沉淀法的优点是特异性高,操作简单,可用于自动生化分析仪.精确度高,线性关系好,测定范围宽,是测定LD1的理想方法.     

大鼠血小板中的神经肽Y及其对血管收缩的影响

特异性放射免疫分析显示大鼠血小板与富血小板血浆(PRP)分别含NPY免疫活性物质90±16ng/10~7血小板与93±19ng/ml,大大高于普通血浆(1.2±0.1ng/ml)与贫血小板血浆(PPP)(1.7±0.3 ng/ml)中的含量(P<0.001)。血小板样品HPLC各馏分的NPY放免活性峰位与标准NPY的峰位相符。PRP经胶原最大程度聚集后,血小板内的NPY浓度降为34±5 ng/10~7血小板,而PPP中的NPY浓度则升高到26±4 ng/ml。1.6 ml PRP经胶原作用产生最大程度聚集,由此分离所得的PPP引起离体灌流大鼠尾动脉收缩,张力上升380±80 mg;上述PPP经NPY抗血清处理后引起尾动脉收缩的幅度显著减小(190±40 mg,P<0.001)。而1 nmol/L人工合成NPY并不引起血管收缩。结果表明大鼠血小板中含有大量NPY,在不可逆聚集时可以释放,释放的NPY可能参与血小板聚集时释放物质的缩血管效应。     

恒河猴(Macaca mulatta)生殖周期内性类固醇激素分泌规律的研究

本文用放射免疫测定法对7只雌性恒河猴(Macaca mulatta)的20个月经周期进行了雌二醇、孕酮和睾酮的动态测定分析,其中15个月经周期的中期都有睾酮和雌二醇峰(其峰值分别为1010.7±411.3pg/ml和179.1±91.3pg/ml),孕酮在黄体期的峰值为2.54±0.65ng/ml。正常黄体期的血清孕酮水平不低于1ng/ml。20个月经周期的平均天数为28.6±5.4天,滤泡期和黄体期分别为11.9±2,6和19.2±6.3天。月经周期可用公式Y=18.92±0.03×X~2 (Y:月经周期,X:黄体期。R=0.9444)表示。实验结果表明,测定周期内三种性类固醇激素可以准确确定排卵。睾酮在生殖周期内的分泌调节机制还待进一步研究。     

固相抗体放射免疫分析法测尿中微量白蛋白

将抗人白蛋白抗体(或第二抗体)与纤维素偶联,建立了固相放免法。其剂量反应曲线在20—540ng/ml范围内呈一直线,灵敏度为20ng/ml。20例正常人尿中微量白蛋白测定值为5.71±1.39 mg/24 h尿,与液相放免法的7.17±3.70mg/24 h尿的结果相接近。固相一抗放免法和液相或固相二抗放免法均有很好相关。     

全自动生化分析仪测定血清AST同工酶

应用天冬氨酸氨基转移酶抑制剂“AMANO-3”水解样品中的线粒体型天冬氨酸氨基转移酶同工酶（m-AST）,测定血清中剩余的胞浆型AST同工酶（c-AST）活性,进而与总AST活性相比较并计算出受抑制剂水解的m-AST同工酶活性．由于此方法采用蛋白水解反应破坏m-AST,因此测定方法可直接应用于生化自动分析仪．亦建立了一个适于日立7150分析仪的AST同工酶联合测定方法．其测定和计算出的m-AST同工酶批内CV为3.5％～7.9％;其结果(y)与AST同工酶电泳迁移率(x)相关．y=1.019x-0.489,r＝0.996（n＝30）．测定了113名健康人m-AST和c-AST,其m-AST参考值范围1.64～9.64U/L,x±s＝(5.641±2.013)U/L;c-AST参考值范围5.69～16.81U/L,x±s＝(5.641±2.013)U/L．     

急性肝功能衰竭大鼠胃肠道细菌培养结果分析

目的用硫代乙酰胺诱导急性肝功能衰竭大鼠模型,作胃肠道细菌培养,同时测定门静脉内毒素水平,以探讨肠道菌群与内毒素血症的关系 .方法 SD大鼠40只,随机分成2组,正常对照组15只,肝衰竭组25只.肝衰竭硫代乙酰胺按300 mg/kg皮下注射(30 mg/ml配制),每天1次,连续2 d.对照组用生理盐水作对照 .两组同时实验,第3天剖腹作胃肠冲洗液细菌培养及门静脉内毒素测定.结果[ HT SS 两组大鼠门静脉内毒素水平分别为 正常对照组(29.33±18.50)ng/L;肝功能衰竭组(105.81±18.82)ng/L (较正常对照组明显升高P＜0.01).两组大鼠胃小肠细菌培养结果细菌总数正常对照组胃(1.69±0.85)(lg n/ml),空肠(2.12±0.54)(l g n/ml),回肠(3.04±0.58)(lg n/ml);肝功能衰竭组胃(2.94±0.98)(lg n/ml), 空肠(3.60±1.12)(lg n/ ml),回肠(4.88±1.56)(lg n/ml)(较正常对照组明显增多 P＜0.05).肠杆菌数正常对照组胃(0.83±0.59)(lg n/ml),空肠(1.13±0.9 8)(lg n /ml),回肠(2.13±1.44)(lg n/ml);肝功能衰竭组胃(2.48±1.06)(lg n/ml),空肠 (2. 79±0.35)(lg n/ml),回肠(4.4±0.61)(lg n/ml)(较正常对照组明显增多,其中胃、空肠P＜0.05,回肠P＜0.001).结论由硫代乙酰胺诱导的大鼠急性肝功能衰竭模型肠道细菌上移过度生长,细菌菌落总数及肠杆菌数明显增多, 门静脉内毒素水平明显增高,且肠道菌群紊乱与内毒素血症有密切关系.     

恒河猴(Macaca mulatta)生殖周期内性类固醇激素分泌规律的研究

本文用放射免疫测定法对7只雌性恒河猴(Macaca mulatta)的20个月经周期进行了雌二醇,孕酮和睾酮的动态测定分析,其中15个月经周期的中期都有睾酮和雌二酮峰(其峰值分别为1010.7±0.65ng/ml. 正常黄体期的血清孕酮水平不低于1ng/ml. 20个月经周期的平均天数为28.6±5.4天, 滤泡期和黄体期分别为11.9±2.6和19.2±6.3天. 月经周期可用公式Y=18.92±0.03×X²(Y:月经周期,X: 黄体期. R=0.9444)表示.实验结果表明, 测定周期内三种性类固醇激素可以准确确定排卵.睾酮在生殖受气内的分泌调节机制还待进一步研究.     

微量定磷法测定红细胞钙调素含量

 磷酸二酯酶在钙调素(CaM)激活下水解cAMP为AMP。后者经蛇毒水解为无机磷酸和腺苷。用孔雀绿显色测定无机磷酸量与标准CaM比较即可测出CaM活性。该法测定CaM灵敏度3.4ng,可测范围3.4—48ng,批间变异系数3.8％—6.4％。 纯化的红细胞(RBC)经超声破碎,沸水浴加热,离心上清与标准CaM所作的磷酸二脂酶平行激活曲线呈正相关(r=0.9900,p<0.0005)。RBC CaM含量测定,批间变异系数11.5％,回收率97.8％±2.0％。本法测得30例正常人RBC CaM含量为6.31±1.5fg/cell,性别之间无显著差异(p>0.5)     

赭曲霉毒素 A 的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA) 技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素 A (OTA) 全自动检测方法 . 将 OTA-BSA 作为免疫分子免疫 Balb/c 小鼠, OTA-KLH 为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析 (ELISA) 法筛选出专一针对 OTA 的高效价的阳性克隆 3G9 ,用杂交瘤细胞制备抗 OTA 单克隆抗体 . 用 OTA-BSA 包被 96 孔板为固相抗原,与游离 OTA 共同竞争有限的抗 OTA 单克隆抗体,以稀土离子 Eu3+ 标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立 OTA-TRFIA. 该方法的灵敏度为 0.03 μg /L ,测量范围为 0.03 ~1 000 μg /L ,批内和批间变异分别为 3.7% 和 5.3% ,平均回收率为 94.2% ,与赭曲霉毒素 B 的平均交叉反应为 3.7% ,与黄曲霉毒素 B1 、 牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好 . 8 条不同时间进行的间接竞争 OTA-TRFIA 的效应点均值 ED80 、 ED50 、 ED20 分别为 (0.33±0.02) μg /L、 (1.44 ±0.08) μg /L 和 (5.22 ± 0.12) μg /L ,说明方法的稳定性好,样品经 TRFIA 和 ELISA 试剂盒同时检测 OTA ,两者的相关系数为 0.925 ,结果相符 . 研究表明, OTA-TRFIA 是目前报道的 OTA 检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景 .     

快速同时检测玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

目的：利用稀土离子作为示踪剂,建立DON/ZEN双标记间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法同时检测DON、ZEN。 方法：以DON BSA、ZEN-BSA共包被于固相微孔板,与DON/ZEN标准或样品中的DON、ZEN竞争结合抗DON多抗、抗ZEN单抗,然后分别用稀土离子Eu3+-羊抗兔IgG及Sm3+ 羊抗鼠IgG进行示踪检测,并对建立DON/ZEN-双标记TRFIA进行方法学的考核。结果：DON/ZEN-双标记TRFIA检测灵敏度,DON为0.2 ng/ml、ZEN为0.7 ng/ml,检测范围为：DON 0.2~100 ng/ml,ZEN 0.7~50 ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明玉米、小麦样品中DON平均回收率分别为102.8%、98.8%,ZEN平均回收率分别为94.2%、95.7%。DON/ZEN-双标TRFIA检测时,DON与ZEN不相互干扰,该方法特异性好。玉米样品检测结果表明,DON/ZEN双标记TRFIA与单标记DON -TRFIA、ZEN-TRFIA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性,两者检测DON的结果相关系数为0.9760,检测ZEN结果的相关系数为0.9695,结论：DON/ZEN-双标记TRFIA灵敏度高,检测范围宽,重复性、稳定性好,一次检测可同时得到DON、ZEN两个结果,是一种简便、快速、经济、稳定、可进行大批量样品筛查的检测方法。     

一种测定CuZn-SOD总量的新方法——化学发光免疫分析法

通过探索,用ABEI发光剂标记人CuZn-SOD,用液相竞争结合法测定样品中CuZn-SOD含量。此法试剂稳定,结果重复性好,批内CV=2.6～6.0％,批间CV=6.9～7.9％,回收率97.7—106.1％,可测范围为1—500ng,适合测定血清及体液中微量CuZn-SOD。     

双波长分光光度法测定肝素钠效价

本文介绍了在室温条件下,以天青作显色剂,用双波长分光光度法测定肝素钠的效价。本法快速准确,测定浓度0—20u/ml,相对误差在±4％以内,标准偏差0.19,变异系数2.5‰,与羊血浆法测定结果相差±4u/ml以内。     

高效液相色谱法测定超滤后血浆中的谷氨酰胺

用高效液相色谱法测定超滤后血浆中的谷氨酰胺, 平均回收率为96.75%, 在130～1300μmol/L范围内呈线性关系(r=0.9906), 健康人正常值男性为(694.97±102.31)μmol/L, 女性为(623.79±99.27)μmol/L, 男女间值有显著差别(P＜0.05)该分析方法简单、迅速, 可用于外科肠道内营养的监测和对肠粘膜结构与功能的研究.     

人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶(hMSE)的放免分析法,抗血清的亲和常数为5.1×10⁹L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.     

人类免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒混合感染者免疫细胞和肝生化指标的分析

目的 探讨人类免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒(HIV/HCV)混合感染者的免疫淋巴细胞亚群和肝脏生化指标的特征。方法 检测并分析研究组(40例混合感染HIV/HCV的血友病患者)和对照组(12例单独感染HIV的血友病患者)若干相关实验室指标。结果两组(研究与对照)结果 差异显著的指标分别为:自然杀伤(NK)细胞9.26%±5.98%对12.19%±5.80%,P<0.05;CD4/CD8细胞比值0.39±0.21对0.53±0.24,P<0.05;CD3细胞74.99%±10.33%对68.42%±8.82%,P<0.05;CD8细胞52.28%±12.59%对43.58%±10.99%,P<0.05;丙氨酸氨酶(ALT)(48.59±40.21)U/L对(26.87±27.23)U/L,P<0.01;天冬氨酸转氨酶(AST)(61.66±51.02)U/L对(34.17±30.24)U/L,P<0.001;谷氨酰转肽酶(GGT)(136.50±111.50)U/L对(43.88±36.17)U/L,P<0.001;甘胆酸(CG)(683.41±962.22)μg/L对(250.96±290.81)μg/L,P<0.001;透明质酸(HA)(180.94±196.69)ng/ml对(64.68±32.74)ng/ml,P<0.001;白/球蛋白(A/G)比值1.35±0.24对1.50±0.34,P<0.05。与单独HIV感染者比较,HIV/HCV混合感染者的NK细胞、CD4/CD8细胞比值和A/G比值显著降低,而ALT、AST、GGT、CG和HA的水平显著增加。结论 HIV/HCV混合感染可能加剧患者淋巴细胞亚群的不平衡,加重肝脏损伤和出现肝硬化趋势。     

霍乱疫苗中残余霍乱毒素检测方法的建立及验证

采用间接酶联免疫法,即用神经节苷脂包被,加入待检样品,再加入兔抗霍乱毒素B亚单位抗体,用标准样品的吸光值(A值)对标准样品的浓度绘制4-参数拟合曲线,根据标准曲线计算出待测样品中的CT浓度。结果显示,在浓度范围(0.6～16)ng/ml之间,CT标准浓度和检测浓度成线性关系,r2=0.9986。精确度在浓度范围(0.6～16)ng/ml,CT的平均回收率在96.24%～114.44%之间。精密度:批内变异CV%≤12.98%,批间变异CV%≤18.48%。特异性CT浓度在10ng/ml时,平均回收率为102.6%;CT浓度在5ng/ml时,平均回收率为111.17%;CT浓度在2.5ng/ml时,平均回收率为123.83%。实验表明该方法可检测霍乱疫苗原液中CT的含量。     

酸性区3融合重链促进基于蛋白质内含子的双载体B域缺失型凝血因子Ⅷ转基因表达

最近的研究表明,蛋白质内含子(intein)介导的B区缺失型凝血因子Ⅷ (BDD-FⅧ)的轻链和重链剪接可顺式促进后者的分泌,而且剪接反应在细胞内、外均可发生．为进一步提高基于蛋白质内含子的双载体转BDD-FⅧ基因的功效,将具有促进重链分泌作用的位于Pro¹⁶⁴⁰～Ser¹⁶⁹⁰的酸性区3(acidic region-3,AR-3)引入重链,检验对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性的影响．用融合蛋白内含子的附加ar-3重链(HCAR3IntN)基因和轻链(IntCLC)基因共转染培养的HEK293细胞,分别用ELISA和Coatest法定量分析分泌至培养上清中剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性,并用免疫印迹观察了细胞内的BDD-FⅧ剪接．结果显示,共转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞,分泌至上清的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性分别为(173±26) μg/L和(1.31±0.15) U/ml,明显高于未添加ar-3的蛋白质内含子融合重链(HCIntN)与轻链(IntCLC)基因共转染细胞[(102±12) μg/L和(0.79±0.09) U/ml],提示AR-3对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性有明显改善作用．而且,分别转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞混合培养后的上清中,亦检测到剪接的BDD-FⅧ蛋白和活性[(35±7) μg/L和(0.28±0.08) U/ml],表明蛋白质内含子可进行不依赖细胞机制的蛋白质剪接．另外,转基因细胞总蛋白呈现明显的可与FⅧ多克隆抗体进行反应的剪接BDD-FⅧ蛋白条带,直观地反映细胞内BDD-FⅧ的剪接．为动物模体内运用蛋白质反式剪接技术的双腺相关病毒载体(AAV)转BDD-FⅧ基因实验提供了依据．     

高血钙和厌食症

对280例厌食的6～12岁学龄儿童作血锌、铜、钙、镁测定发现:63.2％(177例)血钙总值为4.18±0.38(正常2.2～3.9mmol/l),健康对照组100例为3.55±0.10(P<0.01)血钙显著高于正常值和对照组。血镁0.86±0.08(正常0.7～1.18mmol/l),对照组0.78±0.06(P>0.05),两组差异不明显。血锌6.4％(18例)为10.79±0.44(正常11.47～19.10mmol/l),对照组15.51±3.19(P<0.01),血锌降低较对照组显著。铜/锌比例10.35％(29例)为1.71±0.34(正常0.82～1.2),对照组0.9±0.11(P<0.05),铜/锌比例升高较对照组显著。低锌与铜/锌比升高之总和16.8％(6.4％±10.4％)。     

三种龟鳖目动物性激素季节性变化的比较研究

本文研究了三种龟鳖目动物血浆性激素不同时期的变化,得到如下结果:1.雄性动物血浆性激素以黄喉水龟含量最高,均数为304.46±292.15ng/dl血浆;中华鳖含量最低,均数为122.31±64.44ng/dl血浆。2.雌性动物血浆性激素以中华鳖含量最高,均数为75.93±67.35pg/ml血浆;乌龟含量最低,均数为50.16±35.75pg/ml血浆。3.雄性动物在交配期血浆中睾酮含量较非交配期高,说明精子的形成与睾酮有关。4.雌性动物血浆中雌二醇含量随着卵巢发育的周期性而变化。     

高灵敏、高特异性心钠素放射免疫测定方法及应用

本法应用戊二醛连结α-人心钠素(α-hANF)和牛血清白蛋白,产生的复合物免疫家兔,获得抗α-hANF血清,其最终效价为1:35万,亲和常数K_a=4.94×10^-10mol/L。α-hANF应用氯胺-T氧化法进行 ¹²⁵I标记,再经DEAE-SephadexA25柱层析纯化,得到单碘 ¹²⁵I-α-hANF,比放射性为300μci/μg左右。最小检出量为1.8pg/管。与8种肽交叉反应为:α-rANF 98％、心房肽Ⅲ 40％,其它6种无交叉反应。样品变异系数,批内:4.4％,批间:16.3％。