木麻黄SSR-PCR反应体系的建立与优化

为得到木麻黄SSR-PCR反应的最佳体系,以4个种(短枝木麻黄、山地木麻黄、粗枝木麻黄、细枝木麻黄)的24个无性系为材料,采用L₁₆(4⁵)正交设计对影响木麻黄SSR-PCR反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg²⁺和引物)在4个水平上进行了优化,并利用直观分析和方差分析两种方法对PCR结果进行评价。结果表明:引物、Mg²⁺和dNTP均对木麻黄SSR-PCR反应结果有极显著的影响(P<0.01),影响程度由大到小为:引物>Mg²⁺>dNTP,而Taq酶对扩增结果无显著影响;确定了两种木麻黄SSR-PCR反应体系(体系6和体系15),体系6为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^-1引物、1.5 mmol·L^-1 Mg²⁺、0.1 mmol·L^-1 dNTP、0.5 U Taq酶;体系15为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^-1引物、1.75 mmol·L^-1 Mg²⁺、0.2 mmol·L^-1 dNTP、1.25 U Taq酶,反应体系共10μL,不足部分用ddH2O补足。从节约成本和降低非特异性产物的角度考虑可将体系6作为最佳体系,体系15为备用体系;本试验所选荧光引物M26、M36的退火温度在52~62℃均可扩增出清晰明亮的条带。为简化操作步骤和减少非特异性产物,可选择60℃作为引物M26、M36的最佳退火温度。     

国产前原鹅观草的订正

对我国文献中记载的前原鹅观草（Ｒｏｅｇｎｅｒｉａｍａｙｅｂａｒａｎａ（Ｈｏｎｄａ）Ｏｈｗｉ）的标本和植物,与原产于日本的该种进行了比较形态学、细胞学研究,二者差异显著。作者认为我国所记载的该种种名应是山东鹅观草（Ｒｏｅｇｎｅｒｉａｓｈａｎｄｏｎｇｅｎｓｉｓ（Ｂ．Ｓａｌｏｍｏｎ）Ｊ．Ｌ．Ｙａｎｇ,Ｙ．Ｈ．ＺｈｏｕｅｔＹｅｎ）,其内稃先端钝圆,长为外稃的３／４,染色体数为２ｎ＝４ｘ＝２８,具ＳＹ染色体组,结实率达９０％以上,过去被错定为Ｒ．ｍａｙｅｂａｒａｎａ。而Ｒ．ｍａｙｅｂａｒａｎａ在日本系一天然杂种,其内稃先端尖,与外稃等长或稍短,染色体数为２ｎ＝６ｘ＝４２,具ＨＳＹ染色体组,结实率极低,仅０．２％～０．４％。     

云南松SSR-PCR反应体系的建立与优化

为了建立适宜云南松SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用近缘种火炬松的引物,采用正交设计L16(45)对云南松SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了适于云南松的SSR反应体系.在10μL的反应体系中,模板DNA的用量为30.0 ng,Taq DNA聚合酶的用量为1.0 U,Mg2+的浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物的浓度为0.2 μmol/L.扩增程序为:94℃预变性4 min;94℃变性45 s,48℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环;72℃延长10 min,4℃保存.最后利用1个居群对该体系进行稳定性验证,结果可用于云南松SSR标记的研究.     

纤毛鹅观草与本田鹅观草的生物系统学研究

本文通过对鹅观草属的两个种:本田鹅观草(Roegneria hondai Kitagawa)和纤毛鹅观草(R.ciliaris(Trin)Nevski)及其种间杂种的形态变异、染色体配对行为和同工酶电泳酶谱的分析,研究了这两个种间的亲缘关系,杂种F_1减数分裂染色体配对数很高,F_1自然条件下具有低的结实率。R.ciliaris根部和幼叶的酯酶、过氧化物酯同工酶谱与R.hondai的酶谱间存在差异。上述结果表明,R.ciliaris和R.hondai亲缘关系很近,享有两个共同的基本染色体组,可拟定R.hondai的染色体组为S~hy~h。R.ciliaris同R.hondai间的亲缘关系较R.ciliaris同R.pendulina和R.pendulina同R.hondai间更近。     

拟鹅观草属6种2亚种和鹅观草属3种植物的核型研究

对拟鹅观草属Pseudoroegneria 6种2亚种和鹅观草属Roegneria 3种植物的核型进行了研究,核型公式如下：P. spicata (Pursh) A. Lve,2n=2x=14=12m (2sat)+2sm; P. strigosa ssp. aegilopoides (Drobov) A. Lve,2n=2x=14=12m (2sat)+2sm; P. libanotica (Hackel) A. Lve,2n=2x=14=10m+4sm (4sat); P. stipifolia     

大鹅观草与阿拉善鹅观草杂种的形态学和细胞学研究

为探讨阿拉善鹅观草 ( R.alashanica( Keng) S.L.Chen)的染色体组组成 ,进行了大鹅观草 ( R.grandisKeng( 2 n=2 4 ,St St YY) )和阿拉善鹅观草种间杂交 ,对这两个种及其杂种 F1的形态学、繁育学和减数分裂染色体配对行为进行了研究。结果表明 :杂种 F1的形态特征介于父母本之间 ,其花粉母细胞减数分裂染色体平均构型为 :2 0 .4 0 +3.6 9 +0 .0 9 +0 .0 4 。表明阿拉善鹅观草含有一个修饰的 St基因组 ,即 Sta。     

高粱抗丝黑穗病SSR-PCR反应体系的优化

目的:找到一种可用于高粱抗丝黑穗病SSR-PCR扩增最适宜的反应体系。方法:利用单因素体系优化的方法,对SSR-PCR反应体系中Taq酶、dNTPs、MgCl2、模板DNA以及引物用量进行了优化,并且用不同引物、不同模板DNA对该优化结果进行验证。结果:实验表明,Taq酶、dNTPs、MgCl2、模板DNA以及引物的不同用量均对PCR反应结果有显著的影响。最适宜高粱抗丝黑穗病20μl SSR-PCR的反应体系为1U/μl Taq酶2.5μl,10mmol/L dNTPs 1.0μl,25mmol/L MgCl21.5μl,模版DNA2.0μl(50ng),10μmol/L引物1.5μl,10×Buffer 2.0μl。验证结果表明,该体系扩增出的条带清晰且稳定。结论:该结果为今后利用SSR-PCR标记技术研究分析高粱抗丝黑穗病奠定了基础。     

鹅观草与大鹅观草杂种的细胞遗传学及形态学研究

大鹅观草（ Ｒｏｅｇｎｅｒｉａ ｇｒａｎｄｉｓ Ｋｅｎｇ） 是分布于我国陕西的一种多年生四倍体植物。为了探索大鹅观草与鹅观草（ Ｒｏｅｇｎｅｒｉａ ｋａｍｏｊｉ Ｏｈｗｉ） 间的物种生物学关系, 通过对其进行远缘杂交,幼胚离体培养, 合成了远缘杂种; 并对亲本及杂种Ｆ１ 代花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ染色体配对行为及形态学进行了研究。结果表明杂种Ｆ１ 减数分裂染色体配对平均构型为： Ｒ－ ｋａｍｏｊｉ ×Ｒ－ｇｒａｎｄｉｓ１０－２６ Ⅰ＋ １２－３７ Ⅱ（ｃ－ 值＝ ０－７４） , 大鹅观草与鹅观草所含的ＳＹ 染色体组间存在较大的同源性分化; 杂种穗部特征大多数介于双亲之间。     

正交设计优化玉米SSR-PCR反应体系的研究

为建立适宜玉米SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用正交设计L16(45)表,对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、Taq DNA聚合酶的浓度进行4因素4水平优化筛选和扩增程序的优化,确立了最优反应体系和扩增程序.即在10 μL体系中,模板DNA 20 ng,1×PCR buffer,dNTPs 62.5 pmol/μL,Primers0.25 pmol/μL,Taq DNA polymerase 0.5 U.反应程序为:94℃预变性5 min:94℃变性45 s,60℃退火45 s,72℃延伸1 min,32个循环;72℃延伸5 min,4℃保存.使用300对SSR引物对重组近交系的两亲本扩增,筛选出条带清晰,有差异的引物94对,用于基因连锁图谱构建和QTL定位.     

山东百部种群的空间分布格局

采用扩散系数的t检验、Poisson分布的x^2拟合检验及Morisita指数的F检验研究了山东百部（Stemona shandongensis）种群的空间分布类型;用负二项参数（K）、Cassie指标（1／K）、Green指数（GI）和Lloyd的平均拥挤度（m^＊）与聚块性指标（PAI）研究其聚集强度。同时利用上述指数研究了取样面积、苗龄对山东百部种群分布格局和聚集强度的影响,分析了分布格局形成的原因。结果表明,总体上山东百部种群的分布格局类型为集群分布,种群聚集尺度多为8m^2;当年生植株种群聚集强度高于多年生种群;整个种群分布格局的演化趋向于高聚集强度的集群分布。     

鹅观草属五个类群的核型与进化

报道了鹅观草属５个类群的核型,即长芒鹅观草,核型２ｎ＝４ｘ＝２８＝２２ｍ＋６ｓｍ（２ＳＡＴ）;短颖鹅观草,核型２ｎ＝４ｘ＝２８＝２０ｍ（２ＳＡＴ）＋８ｓｍ（２ＳＡＴ）;短柄鹅观草,核型２ｎ＝４ｘ＝２８＝２２ｍ（２ＳＡＴ）＋６ｓｍ;纤毛鹅观草,核型２ｎ＝４ｘ＝２８＝２０ｍ＋８ｓｍ（４ＳＡＴ）;毛盘鹅观草,核型２ｎ＝４ｘ＝２８＝１８ｍ＋６ｓｍ（４ＳＡＴ）＋４ｓｔ。同时,通过核型重要性状的递变分析,揭示了鹅观草属５个类群的相对进化程度以及宏观分类中４个组的系统发育关系,表明鹅观草属的半颖组在系统发育中可能既派生了颖体短小的小颖组,又派生了颖体长大的大颖组和长颖组。     

山东假瘤蕨与金鸡脚假瘤蕨的孢子形态研究

采用扫描电镜对山东假瘤蕨(Phymatopsis shandongensis J.X.Li et C.Y.Wang)和金鸡脚假瘤蕨(P.hastata(Thunb.)Pic.Serm.)正常发育的成熟孢子进行了系统地观察研究。结果显示,前者孢壁纹饰属粗糙型,后者孢壁纹饰属粗刺型,两者孢壁纹饰差异显著;孢壁纹饰特征在植物分类中具有重要意义,依据孢壁纹饰,山东假瘤蕨应为一个独立的物种,不宜并入金鸡脚假瘤蕨;建议恢复山东假瘤蕨在植物分类学上的种级地位。本研究还提供了金鸡脚假瘤蕨孢子形态特征;补充了假瘤蕨属的扫描电镜孢壁纹饰新资料。研究结果为弄清这两种植物的分类归属提供了孢粉学依据。     

阿多鹅观草——青海禾本科一新种

对青海禾本科一新种——阿多鹅观草进行了形态描述并提供了相关照片。该种与矮鹅观草相近,但本种的基生叶叶鞘顶端两侧有披针形叶耳;叶片两面均密被短柔毛,上面及边缘还杂有长粗毛;穗状花序短,长约4cm;花药草绿色,长约1mm,可以区别。     

鹅观草属4个种的核型与进化

报道了4个种鹅观草属（Roegneria C. Koch）植物的核型,其核型公式如下：芒颖鹅观草(R. aristiglumis Keng et S. L. Chen), 2n=4x=28=22m+6sm（2SAT）;短颖鹅观草(R. breviglumis Keng), 2n=4x=28=20m（2SAT）+8sm;红原鹅观草(R. hongyuanensis L. B. Cai), 2n=4x=28=22m+6sm（2SAT）;山东鹅观草(R. shandongensis（B. Salomon）J. L. Yang, Y. H. Zhou et Yen), 2n=4x=28=24m（2SAT）+4sm。同时对染色体主要特征的演变规律进行了分析,揭示了鹅观草属4个种的相对进化程度以及宏观分类中2个组的系统发育关系,表明鹅观草属的半颖组在系统发育中派生了颖体短小的小颖组。     

鹅观草种质资源醇溶蛋白遗传多样性研究

以8个地理类群的90份鹅观草野生种质材料为研究对象,采用A-PAGE(酸性聚丙烯酰胺)凝胶电泳技术进行蛋白质水平遗传多样性检测.研究结果表明,来源于不同居群的鹅观草共分离出26条谱带,每个材料可以分离出5～26条迁移率不同的谱带, 平均谱带数为16.39条,其中平均多态性谱带为12.65条,多态性比例为77.22%;基于供试材料醇溶蛋白每个位点谱带出现的频率,分别计算了地理类群内多样性指数(0.345)和总多样性指数(0.471),类群间的遗传分化系数为26.8%,表明鹅观草变异的73.2% 来源于类群内;90份供试材料醇溶蛋白的Jaccard遗传相似系数变异范围为0.133 3～1.000,平均遗传相似系数为0.395 7;利用种子醇溶蛋白可将90份材料分为12类,鹅观草种质资源之间的亲缘关系呈现出一定的地域性规律;不同地理类群间的遗传多样性指数从高到低的排列顺序依次为云南＞四川＞内蒙古＞新疆＞山西＞甘肃＞宁夏＞河北.因此在进行鹅观草种质资源收集和原地保护时,建议对云南和四川地区的鹅观草种质资源应给予极大关注.