原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β表达

探讨原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）表达。从两组人群中分别选取原因不明月经过少子宫内膜组织40例,月经量正常子宫内膜组织40例。通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法检测ERβ表达。分析实验组与对照组ERβ-mRNA及蛋白质的表达情况,将不同年龄、人流次数子宫内膜ERβ-mRNA及蛋白质的表达进行比较。实验组ERβ-mRNA表达量为0.6457±0.2957,对照组为0.9637±0.3621,实验组ERβ-mRNA比对照组表达下调,差异有统计学意义（t=-6.589,P〈0.001）。实验组ERβ蛋白质表达量为347.37±30.35,对照组为445.21±45.67,实验组ERβ蛋白质比对照组表达下调,差异有统计学意义（t=-4.353,P〈0.001）。两组人群不同年龄、人流次数ERβ表达比较,差别无统计学意义。原因不明月经过少患者ERβmRNA及蛋白质在子宫内膜中的表达低于月经量正常子宫内膜,其可能与月经量减少有关。原因不明月经过少患者子宫内膜ERβ的表达与年龄、人流次数无关。     

原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β基因多态性及其表达

目的:探讨原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β(ERβ)基因多态性及其与表达的关系。方法:从2组人群中分别选取原因不明月经过少子宫内膜组织40例、月经量正常子宫内膜组织40例,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测ERβ的表达;分析实验组与对照组ERβmRNA及蛋白质的表达情况,将ERβ基因的各基因型、等位基因型与子宫内膜ERβmRNA及蛋白质的表达之间分别进行比较。结果:实验组ERβmRNA表达量为0.6457±0.2957,对照组为0.9637±0.3621,实验组比对照组表达下调,差异有统计学意义(t=-6.589,P0.001);实验组ERβ蛋白质表达量为347.37±30.35,对照组为445.21±45.67,实验组比对照组表达下调,差异有统计学意义(t=-4.353,P0.001);2组RsaⅠ基因型、AluⅠ基因型、CA重复序列基因型ERβ表达差异均无统计学意义。结论:原因不明月经过少患者ERβmRNA及蛋白质在子宫内膜中的表达低于月经量正常子宫内膜,可能与月经量减少有关;2组人群ERβ基因RsaⅠ、AluⅠ、CA重复序列基因型及等位基因型子宫内膜表达无差异。     

子宫肌瘤患者VEGF、ER及PR的表达及相关性

目的:研究血管内皮生长因(VEGF)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在子宫肌瘤组织中的表达及其相关性,探计三者在子宫肌瘤发生发展中的作用.方法:采用免疫组化sP法检测40例肌瘤组织及其附近正常平滑肌组织中VEGF、ER及PR的表达水平.同时采用Western-blot法检测其中VEGF的含量,结果:①经免疫组化检测,VEGF、ER及PR在子宫肌瘤组织中表达阳性率均高于相应的瘤旁组织,差异具有显著性(P＜0.05).②VEGF的表达与ER及PR成正相关.③经Western-blot检测,VEGF蛋白含量在子宫肌瘤组织中显著高于相应的瘤旁组织,差异具有显著性(P＜0.05).结论:雌孕激素及VEGF均参与了子宫肌瘤的发生发展.三者之间可能具有协同作用.     

卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞相互作用对VEGF和bFGF表达的影响

目的探讨卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞(HPMC)相互作用对血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法用Millicell将卵巢癌细胞SKOV3与HPMC进行非接触性共培养,用RT-PCR检测细胞VEGF及bFGF mRNA表达,ELISA检测细胞条件培养液中VEGF及bFGF蛋白水平。结果共培养后,SK-OV3 VEGF及bFGF mRNA表达分别为3.62±0.23及3.41±0.25,条件培养液中VEGF及bFGF蛋白水平分别为(523.5±24.9)pg/ml及(156.4±17.3)pg/ml,与SKOV3单独培养时相比,差别均有显著性(P<0.01)。HPMC共培养后VEGF及bFGF mRNA表达分别为3.96±0.09及3.54±0.21,条件培养液中VEGF及bFGF蛋白水平分别为(1567.62±45.42)pg/ml及(682.9±33.7)pg/ml,均明显高于HPMC单独培养时的水平(P<0.01)。结论卵巢癌细胞与HPMC均可合成VEGF及bFGF;二者共培养时,相互刺激表达更高的VEGF及bFGF。     

甲状腺肿瘤组织VEGF-C和ERβ的表达与LVD的相关性分析

目的:探讨甲状腺肿瘤和癌旁正常甲状腺组织中VEGF-C和ERβ的表达与组织平均淋巴管密度的相关性.方法:采用SP免疫组织化学染色检测116例甲状腺癌、56例甲状腺腺瘤和20例正常甲状腺组织中VEGF-C和ERβ及D2-40的表达;以D2-40阳性结果计算组织平均淋巴管密度(LVD).观察不同甲状腺组织中VEGF-C和ERβ的表达水平并分析其与LVD的相关性.结果:甲状腺癌组织中VEGF-C的高表达阳性率显著高于正常甲状腺和甲状腺腺瘤(P＜0.05),ERβ的高表达阳性率显著低于正常甲状腺和甲状腺腺瘤(P＜0.05);两者表达呈轻度负相关(r=-0.312,P＜0.01);甲状腺癌VEGF-C表达与淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.01).用D2-40标记的LVD值在甲状腺癌、甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织之间有显著性差异(P＜0.001).甲状腺癌中淋巴结转移组LVD显著高于无淋巴结转移组(P＜0.0001).VEGF-C表达与D2-40呈正相关(r=0.515,P＜0.01).结论:ERβ表达下调可能通过促进VEGF-C的表达,进而影响淋巴管增生,促进肿瘤淋巴道转移.     

一氧化氮对小鼠胚胎围植入期子宫VEGF及其受体表达的调节

为研究NO在胚胎植入中的作用机理 ,本文采用子宫角注射、原位杂交及Westernblot方法研究了一氧化氮 (NO)在小鼠胚胎植入过程中对血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体表达的调节。受试小鼠于妊娠第三天 (D3 )在一侧子宫角内注射一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)或者L NAME与NO的供体硝普钠 (SNP)合用 ,另一侧子宫角为对照侧 ;收集并分别检测了D5,D6和D7天小鼠子宫中VEGF及其受体mRNA和蛋白的表达情况。结果显示 :与对照侧相比 ,L NAME处理后小鼠胚胎围植入期子宫中VEGF及其受体mRNA的表达有不同程度的下降 ;对VEGF及其受体蛋白表达水平检测表明 ,抑制的NO产生也使VEGF及其受体蛋白在小鼠围植入期子宫中的表达有不同程度的降低。当NOS抑制剂和NO的供体SNP同时注射小鼠时 ,VEGF及其受体mRNA和蛋白表达都恢复到正常水平。以上结果表明 ,在小鼠胚胎植入中NO可通过调节VEGF及其受体的表达参与血管新生 ,从而对胚胎植入起到调节作用     

华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞株增殖及VEGF及其受体KDR表达的影响

目的:探讨华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞的生长抑制作用及其对VEGF及KDR表达水平的影响。方法:体外培养前列腺癌PC3细胞株,采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测不同浓度华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞增殖的影响;采用FCM法分析该药对PC3细胞周期分布的影响;蛋白印迹法检测药物处理PC3细胞后,细胞中VEGF及KDR蛋白表达的变化。结果:不同浓度浓度的华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞具有抑制作用(P<0.05),并呈一定的时间剂量依赖性;流式细胞仪检测显示,华蟾素可阻滞细胞进程于S期(P<0.05);蛋白印迹法检测结果显示,华蟾素注射液能使VEGF及KDR蛋白表达下降,并呈浓度依赖性。结论:华蟾素注射液能抑制PC3细胞的增殖作用,其机制可能与下调VEGF及KDR表达有关。     

KDR靶向RNA干扰对MCF一7细胞凋亡的影响

目的：研究KDR靶向RNA干扰对MCF-7细胞凋亡的影响,探讨其可能的机制。方法：采用阳离子脂质体Lipofecta．mine2000TM作为转染试剂将人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱RNAi,采用Hoechst33258染色和半定量RT—PCR检测Caspase-3、survivin的mRNA表达及细胞凋亡变化;比色法检测Caspase．3的活性;利用免疫组织化学方法检测survivin的表达,并用图像分析仪分析蛋白表达强度。结果：靶向KDR的siRNA转染MCF-7后,Caspase-3的mRNA表达上调,survivin基因mRNA及蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论：KDRsiRNA通过减少乳腺癌细胞survivin的表达,增加Caspase．3表达来促进肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

MMP-2、MMP-9及VEGF在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)表达在子宫内膜异位症发生发展中的作用.方法:应用免疫组化二步法检测EMs患者异位内膜36例、在位内膜36例及正常内膜中的MMP-2、MMP-9、VEGF的表达情况.结果:MMP-2、MMP-9、VEGF在异位内膜组中阳性表达率分别为94.4%、91.7%和91.7%,显著高于在位内膜组、正常内膜组(P＜0.05);而在位内膜组和正常内膜组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:检测MMP-2、MMP-9、VEGF的表达可用于判断子宫内膜异位症的侵袭转移和评估预后.     

VEGF与其受体2在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(Flk-1)在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响.方法 SD大鼠18只,随机分为对照组,哮喘模型组和地塞米松干预组各6只.以腹腔注射1%卵蛋白致敏和2%卵蛋白雾化吸入激发复制哮喘模型,干预组在每次激发前给予地塞米松干预.用免疫组织化学技术检测气道平滑肌α-actin以及VEGF和Flk-1蛋白质在不同组大鼠肺组织的表达程度;用RT-PCR方法检测VEGF和Flk-1mRNA在不同组大鼠肺组织的表达程度;采用HMIAS-2000型高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析.结果 (1)哮喘模型组气道壁平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(2)哮喘模型组VEGF及Flk-1蛋白质在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(3)哮喘模型组VEGF144,VEGF188 mRNA和VEGF205 mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05或P<0.01).哮喘模型组Flk-1mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).直线相关性分析显示,气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF205,188,144及Flk-1mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.739,0.747,0.744,0.682;P<0.05);气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF及Flk-1蛋白质表达水平也呈正相关(r分别为0.693,0.672;P<0.05).结论哮喘模型大鼠肺组织中VEGF及其受体Flk-1表达上调,并与气道平滑肌增殖有密切关系.该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中气道平滑肌增殖的过程.     

阻断VEGF旁分泌通路抑制乳腺癌血管生成与肿瘤生长

以人乳腺癌细胞株MCF 7为研究对象 ,通过构建有义与反义血管内皮生长因子 (VEGF)基因表达质粒 ,并转染MCF 7细胞 ,建立了高与低水平表达VEGF的细胞克隆。稳定转染反义VEGF表达质粒的细胞产生和分泌VEGF的能力明显下降 ,尽管在体外培养条件下细胞的增殖速度与未经转染的对照相比不是减慢而是略有增快 ,但在体内的成瘤能力、生长速度和转移能力等却明显低于未经转染的对照细胞或稳定转染有义VEGF表达质粒高水平表达VEGF的细胞克隆。通过体内电穿孔技术介导反义VEGF12 1及可溶性VEGF受体sFlk 1表达质粒转移至荷瘤鼠肿瘤组织内 ,反义VEGF12 1及sFlk 1的表达能显著抑制肿瘤的生长。研究结果证实了VEGF旁分泌通路在诱导乳腺癌肿瘤血管生成、促进肿瘤生长和转移方面起重要作用 ,阻断VEGF旁分泌通路能有效抑制乳腺癌的生长     

匹伐他汀对Klotho基因敲除杂合子小鼠血管新生的促进作用

目的：探讨匹伐他汀对Klotho基因敲除杂合子小鼠血管新生的促进作用及其作用机制。方法：建立Klotho基因敲除杂合子小鼠（hetero kl＋／-）和同窝出生野生型小鼠（wild kl＋／＋）下肢缺血模型并分为4组：①hetero正常组;②hetero匹伐他汀组;③wild正常组;④wild匹伐他汀组。使用激光多普勒血流测定仪测定klotho（kl＋／-,kl＋／＋）小鼠投药前、下肢缺血手术后双下肢血流。免疫荧光组化SP法计数Klotho（kl＋／-,kl＋／＋）小鼠缺血肢毛细血管数。免疫酶组化直接法计数Klotho（kl＋／-,kl＋／＋）小鼠缺血肢磷酸化Akt阳性细胞数。蛋白印迹杂交方法检测Klotho（kl＋／-）小鼠缺血肢VEGF蛋白表达。结果：匹伐他汀使Klotho（kl＋／-,kl＋／＋）小鼠术后缺血肢血流恢复明显,缺血肢与非缺血肢血流面积比明显增加;匹伐他汀使Klotho（kl＋／-、kl＋／＋）小鼠缺血肢毛细血管密度增加、p-Akt阳性细胞数明显增加;匹伐他汀使Klotho（kl＋／-）缺血肢VEGF蛋白表达增强。结论：匹伐他汀有促进Klotho基因敲除杂合子小鼠血管新生的作用。其作用机制可能是通过VEGF—p—Akt—NO径路实现的。     

Cold-induced expression of the VEGF gene in brown adipose tissue is independent of thermogenic oxygen consumption

To examine whether cold-induced vascular endothelial growth factor (VEGF) gene expression in brown adipose tissue involved generation of hypoxic oxygen levels by thermogenic processes, we cold-exposed wild-type mice, as well as uncoupling protein-1 (UCP1)-ablated mice in which no thermogenesis in brown adipocytes can be induced. Cold exposure stimulated VEGF expression in both wild-type and UCP1-ablated mice. Unexpectedly, the effect was 3-fold higher in UCP1-ablated animals, whereas cultured brown adipocytes from both genotypes responded identically to norepinephrine stimulation. These results demonstrate that generation of low oxygen levels does not contribute to cold-induced VEGF expression in brown adipose tissue, but the results are consistent with an adrenergic regulation of expression.     

Differential expression of the two VEGF receptors flt and KDR in placenta and vascular endothelial cells

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a newly identified growth and permeability factor with a unique specificity for endothelial cells. Recently the flt-encoded tyrosine kinase was characterized as a receptor for VEGF. A novel tyrosine kinase receptor encoded by the KDR gene was also found to bind VEGF with high affinity when expressed in CMT-3 cells. Screening for flt and KDR expression in a variety of species and tissue-derived endothelial cells demonstrates that flt is predominantly expressed in human placenta and human vascular endothelial cells. Placenta growth factor (PIGF), a growth factor significantly related to VEGF, is coexpressed with flt in placenta and human vascular endothelial cells. KDR is more widely distributed and expressed in all vessel-derived endothelial cells. These data demonstrate that cultured human endothelial cells isolated from different tissues express both VEGF receptors in relative high levels and, additionally, that all investigated nonhuman endothelial cells in culture are also positive for KDR gene expression.     

Vascular endothelial growth factor (VEGF) stimulates monocyte migration through endothelial monolayers via increased integrin expression

Monocytes play an important role in collateral vessel formation (arteriogenesis) by attaching to activated endothelium and by invading the walls of innate collateral vessels where they produce growth factors. Previous studies have demonstrated that this process can be promoted by several chemokines and growth factors. In this study we examined the interaction between monocytes and endothelium under stimulation of the angiogenic agent vascular endothelial growth factor (VEGF). We report here the novel finding that VEGF stimulates the expression of the alphaL-, alphaM- and beta2-integrin monomers. In functional assays and by using neutralizing antibodies it was shown that VEGF stimulates adhesion of monocytes to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), and increased transmigration through endothelial monolayers is dependent on interaction of monocyte beta2-integrins with its endothelial counter ligand ICAM-1. Based on these in vitro data we hypothesize that the positive effect of VEGF on arteriogenesis may involve monocyte activation.     

Coptis japonica Makino extract suppresses angiogenesis through regulation of cell cycle-related proteins

Angiogenesis, neovascularization from pre-existing vessels, is a key step in tumor growth and metastasis, and anti-angiogenic agents that can interfere with these essential steps of cancer development are a promising strategy for human cancer treatment. In this study, we characterized the anti-angiogenic effects of Coptis japonica Makino extract (CJME) and its mechanism of action. CJME significantly inhibited the proliferation, migration, and invasion of vascular endothelial growth factor (VEGF)-stimulated HUVECs. Furthermore, CJME suppressed VEGF-induced tube formation in vitro and VEGF-induced microvessel sprouting ex vivo. According to our study, CJME blocked VEGF-induced cell cycle transition in G1. CJME decreased expression of cell cycle-regulated proteins, including Cyclin D, Cyclin E, Cdk2, and Cdk4 in response to VEGF. Taken together, the results of our study indicate that CJME suppresses VEGF-induced angiogenic events such as proliferation, migration, and tube formation via cell cycle arrest in G1.     

Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its cognate receptors in human pheochromocytomas

Pheochromocytomas are well-vascularized tumors, suggesting that a potent angiogenic factor may be involved in the mechanism of their formation. As vascular endothelial growth factor (VEGF) is a potent mitogen for vascular endothelial cells, here we have investigated the mRNA and protein expression of VEGF and the mRNA expression of its two receptors (Flt-1 and Flk-1/KDR) in pheochromocytomas tissue. An increase in VEGF mRNA (mainly isoforms VEGF(121) and VEGF(165)) and in VEGF protein expression were observed by semi-quantitative RT-PCR and Western blot, respectively, compared to normal adrenomedullary tissue. Flk-1/KDR, and Flt-1 levels of mRNA were also increased markedly in tumors and correlated with levels of VEGF mRNA. Therefore, we speculate that upregulation of VEGF expression and its receptors might be important in the pathogenesis of pheochromocytomas.     

低氧脑水肿大鼠脑组织VEGF和AQPs基因及蛋白表达的变化

目的：探讨低氧脑水肿时血管内皮细胞生长因子（VEGF）、水通道蛋白（AQP1和AQP4）基因和蛋白表达变化,为阐明急性低氧对脑组织的损伤及低氧脑水肿的发病机制提供实验依据。方法：Wistar大鼠随机分为4个组：常氧对照组（Control）、低氧暴露4 000 m组（4 000 m）、低氧暴露6 000 m组（6 000 m）和低氧暴露8 000 m组（8 000 m）,低氧组于低压舱中模拟相应海拔高度持续暴露8 h建立低氧脑水肿模型。用干-湿重法测定脑组织水含量,常规光镜观察脑组织形态学的改变;用RT-PCR法和免疫组化法检测低氧脑水肿时大鼠脑组织VEGF、AQP1和AQP4mRNA和蛋白表达的变化。结果：①干-湿重法测定表明,低氧（≥6 000 m）暴露后,大鼠脑组织水含量明显增加（P〈0.01）。②常规光镜检测结果表明,低氧暴露4 000 m时大鼠脑神经细胞、血管内皮细胞和星形胶质细胞足突轻度肿胀,组织中出现漏出液;低氧暴露6 000 m时脑血管内皮细胞和星形胶质细胞足突肿胀加重,血管与组织间隙扩大,组织中漏出液增多;低氧暴露8 000m时脑血管内皮细胞和星形胶质细胞足突重度肿胀,血管与组织间隙进一步扩大,组织中漏出液明显增多。③低氧脑水肿时,VEGF、AQP1、AQP4mRNA表达水平增高,AQP1在内皮细胞异常表达,内皮细胞VEGF和AQP1、星形胶质细胞足突AQP4蛋白质表达水平增高。结论：低氧脑水肿时,VEGF、AQP1和AQP4表达和分布的变化可能是引起血脑屏障损伤、导致低氧脑水肿的发病机制之一。