愈伤组织形成过程中钙离子与激素诱导效应的关系

实验研究了在胡萝卜、烟草愈伤组织形成过程中,激素诱导作用与钙离子的关系。结果表明:在含有正常浓度的激素和Ca~(2+)的培养基中,0.1—1mmol/L Ca~(2+)螯合剂EGTA抑制愈伤组织鲜重增长78.0%—88.4%; 10—50μmol/L尼群地平及10—60μmol/L异博定等细胞膜钙通道阻断剂分别抑制愈伤组织鲜重增长19.1%—81.9%及17.6%—70.3%。除去上述Ca~(2+)螯合剂及Ca~(2+)通道阻断剂后,受抑制的外植体基本上可恢复生长。在无激素培养基中,10—30μmol/L Ca~(2+)载体A_(23187)可使外植体膨大,使外植体脱分化细胞增多,并出现分生细胞团,初步说明A_(23187)诱导的Ca~(2+)内流可以部分地模拟激素的作用。以膜显示剂氯四环素探测胞内Ca~(2+)分布时发现分裂细胞、脱分化细胞、分生细胞团及愈伤组织区域的细胞荧光较强。以上事实说明在愈伤组织形成中激素诱导效应与细胞内Ca~(2+)有密切关系。     

高压静电场（HVEF）对苜蓿叶片愈伤组织诱导的影响

用一定强度的负高压静电场处理苜蓿叶片外值体,可显著促进外植体愈伤组织的发生和形成。处理组叶片愈伤化进程比对照组提前二天,愈伤组织诱导率平均提高了３６％,愈伤组织鲜重增长率提高了３３％,而且形成的愈伤组织质量较高。生理生化分析显示：静电场处理使愈伤组织诱导过程中培养物的可溶性蛋白质含量较对照高,且峰值来临较早;过氧化物酶（ＰＯＤ）,淀粉酶（Ａｍｙｌａｓｅ简称ＡＭＬ）,超氧物歧化酶（ＳＯＤ）活性和峰值也较对照组有不同程度的提高和提前,与观察结果一致。本文对其作用机理做了初步探讨。     

丹参愈伤组织培养中激素浓度的优化研究

目的:优化丹参愈伤组织继代培养中激素浓度的最佳组合。方法:以丹参种子为外植体,以无菌苗下胚轴诱导的初代愈伤组织为材料,以愈伤组织净增鲜重为指标,利用二次正交旋转组合设计方法进行数学模拟,建立数学模型,利用响应面法进行激素浓度组合寻优。结果:丹参愈伤组织继代培养中激素浓度的最佳组合为6-BA 1.514 mg/L+NAA 2.059 mg/L+2,4-D 2.137 mg/L;愈伤组织的净增殖鲜重为35.66 g。     

三氟啦嗪（TFP）、ABA处理对小麦幼苗及悬浮培养细胞中诱导蛋白的影响

水分胁迫及ABA处理能诱导丰抗8号小麦幼苗及其悬浮培养细胞中44.2kD蛋白亚基的产生或大量合成。不同浓度的CaM抑制剂三氟啦嗪（Trifluoperazine)处理,对丰抗8号小麦幼苗在水分胁迫时产生的44.2kD蛋白亚基没有明显抑制作用,对悬浮培养细胞中由ABA＋PEG所诱导的该蛋白含量的升高影响较小,但能抑制细胞中由ABA诱导的44.2kD蛋白亚基百分含量的增加。表明由单纯激素（ABA）引起的信号传递途径可能与CaM有关,且较为简单,而水分胁迫或水分胁迫＋ABA引起的信号传递途径可能比单纯激素引起的胞人信号传递过程更复杂。     

野葛毛状根离体培养与异黄酮生产

用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）R1601菌株感染野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）叶片外植体后获得的毛状根,经连续4次继代培养,鲜重增加到最初的6.2倍。PH为5.5的1/2SH液体培养基较适合野葛毛状根的生长。与自然根相比,毛状根在无激素的1/2SH液体培养基中离体培养20d后,鲜重增加22.6倍,释放入培养液中的异黄酮量增加10.6倍。毛状根生产异黄酮的量略高于自然根,且根中含量明显高于愈伤组织及茎中异黄酮的含量。培养液体积影响毛状根的离体生长及异黄酮的释放。     

草莓愈伤组织的超弱发光及活性氧代谢变化的研究

草莓外植体在不同激素组合的培养基上诱导产生3类愈伤组织。Ⅰ型愈伤组织的生长速率约是Ⅱ型和Ⅲ型的2倍,UBE强度是Ⅱ型和Ⅲ型的1．5倍和1．8倍,但Ⅱ型和Ⅲ型愈伤组织的活性氧代谢水平较强,Ⅲ型中H2O2和O2^--的水平分别是Ⅰ型的9倍和4倍。Ⅲ型愈伤组织的分化培养过程中,UBE强度不断增加,HQ的含量呈现出由弱到强再到弱的变化曲线,O2^--则表现出一直下降的趋势;而可溶性蛋白质含量、SOD及POD也呈现出一定的变化趋势。结果表明：愈伤组织中UBE与活性氧代谢之间无明确相关性,而都与愈伤组织形态建成过程密切相关。     

枸杞体细胞胚发生中外源Ca2+的作用

脱分化的枸杞叶片外植体愈伤组织转入含有2,4-D的MS培养基上分化培养后有大量胚性细胞的分化和体细胞胚发生;加入一定量的外源Ca2 或45Ca2 ,明显地提高了胚性愈伤组织中体细胞胚发生的频率;加入Ca2 的鳌合剂EGTA则显著降低了体细胞胚发生频率;胚性愈伤组织中CaM的水平在多细胞原胚期和球形胚期显著升高,加入外源Ca2 后CaM含量几乎成倍增加;胚性愈伤组织中蛋白质组分与活性都远远多于或高于非胚性愈伤组织,加Ca2 后蛋白质组分种类也增加.     

激素对银杏愈伤组织诱导及继代培养的影响

为了探讨激素对银杏愈伤组织诱导及继代培养的影响,以银杏优良品种"佛手"无菌苗的叶片和根段为材料,以MS为基本培养基,研究了5种不同激素配比和光照条件对愈伤组织诱导及长期继代培养的影响.结果表明,所有激素配比都能诱导两种外植体形成愈伤组织,完全黑暗培养条件不利于愈伤组织继代培养;NAA和KT及2,4-D和KT两种激素组合分别有利于叶片和根愈伤组织诱导.在激素配比为3.0 mg/L 2,4-D 5.0mg/L KT中生长的两种愈伤组织鲜重显著高于其它处理;NAA和KT组合适合愈伤组织长期继代保存,叶片诱导的愈伤组织最佳继代培养基为NAA 1.0 mg/L KT 1.0 mg/L,根段诱导的愈伤组织则为NAA 1.0 mg/L KT1.0 mg/L,分别在这两种激素组合下继代的愈伤组织始终为绿色,叶绿素含量变化不显著.     

钙调蛋白及其调节酶PDE在鸡脑胚胎发育过程中的变化

钙调蛋白(CaM)参与脑中多种细胞过程的调节,推测它与大脑的分化发育有关。本实验研究了鸡脑从胚胎早期(原基)至大脑成熟各发育阶段可溶部分的CaM及其调节酶——环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的含量或活力变化。未经孵育的鸡胚中检测不出CaM,在孵育3—14天的胚脑中CaM含量逐渐增加:总CaM增加了3倍,活性CaM增加了4倍;而且在鸡脑细胞分裂分化最活跃的期间(皮质和髓质形成期间,即孵育8—14天),活性CaM的增加尤为显著(增加近3倍)。提示CaM与脑细胞的分裂分化有关。PDE的活力出现晚于CaM5天,随着胚龄增加,不断上升,提示它与脑细胞的分裂分化无直接关系,可能与大脑的功能活动有关。本实验还研究了鸡脑发育期中可逆性钙结合蛋白的变化。     

梨果实愈伤组织褐腐病菌侵染过程cDNA-SRAP差异分析

梨果实褐腐病危害果实,可造成果实运输和储藏过程中严重的经济损失。本研究构建了褐腐病菌侵染梨果实愈伤组织离体系统,对梨褐腐病菌侵染其果实愈伤组织不同时期进行细胞学观察分析,基于cDNA-SRAP技术,分析该过程中差异基因表达,以期分离克隆与梨果实抗病反应过程相关的防卫基因。结果表明：与未侵染的梨果实愈伤组织相比,侵染12～60h过程中梨果实褐腐病菌从表面逐渐深入到内部细胞;30个SRAP引物组合共扩增出457条带,其中差异回收条带数为16条,差异比率为3.5%。最终获得5条差异基因表达条带。核酸序列同源性分析表明,其中1条差异基因片段未搜索到任何同源蛋白,2条差异基因片段经序列比对,序列相似度一致,与苹果属的肉桂醇乙酰脱氢酶（CAD）同源性为96%;其他2条差异基因片段分别与DNA结合蛋白（DBP）和寡肽转运蛋白（OPT）基因序列同源,其同源性为85%和78%,因此暂将这3个基因命名为PbCAD、PbDBP和PbOPT。荧光定量PCR结果表明,PbCAD基因在褐腐病菌侵染梨果实愈伤组织12和24h时相对表达量最高,为对照的2.94和2.66倍;PbOPT基因在褐腐病菌侵染梨果实愈伤组织12～36h时相对表达量明显升高,为对照的2.17～2.46倍,而其他时期表达量均与对照接近;PbDBP基因表达量在整个侵染时期均与对照接近。因此我们推测PbCAD和PbOPT基因可能为梨褐腐病菌侵染梨果实愈伤组织响应的相关防卫基因。     

生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测

用生物素标了己了花椰菜ＣａＭ。生物素标记的ＣａＭ具有与天然ＣａＭ相似的Ｃａ２＋依赖电泳特性,可激活ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶,能够检测出５０ｎｇ的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物ＣａＭ结合蛋白的生物素－覆盖法（Ｂｉｏｔｉｎ－ｏｖｅｒｌａｙ）并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内６４ｋＤ蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素－覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的ＣａＭ结合蛋白时可检出２,４－Ｄ诱导的ＣａＭ结合蛋白。     

虎杖愈伤组织的诱导及高产白藜芦醇材料的筛选

将虎杖(Polygonum cuspidatum)不同外植体经不同消毒时间处理后,接种在添加不同激素种类和水平的相同基本培养基上或相同激素种类和水平基本培养基上进行诱导实验,同时对根、根茎芽、叶、韧皮诱导的愈伤组织进行白藜芦醇的含量测定实验,其结果表明:基本培养基以MS较好,外植体叶对激素种类较为敏感,其中适当浓度的NAA诱导愈伤组织比2,4-D的效果要好,KT比BA要好,在有KT存在的培养基上诱导愈伤组织比较紧密,有利于分化;在MS NAA2m g/L KT0.1mg/L培养基上诱导愈伤组织较好,根茎芽的诱导率最高,为73%.愈伤组织的生长趋势从接种的第3d开始生长,到21d时生长达到最高峰,干重为0.461g,以后生长速度减慢.不同材料诱导的愈伤组织中白藜芦醇的含量以根茎部芽的愈伤组织含白藜芦醇最高,其次是叶和根,最低的为韧皮.     

Constancy of rDNA Content during Dedifferentiation of Carrot and Jerusalem Artichoke Explants

When carrot explants were cultured with phytohormones, DNA synthesistook place synchronously in the explants and a satellite DNAwith a heavier density in CsCl than the bulk DNA replicatedin the earliest phase of the first replication period. The earlyreplicating carrot satellite consisted of a component havingan identical density to carrot rDNA and another component havinga density between the p-value of carrot rDNA and that of thebulk DNA. DNA-rRNA hybridization was used to explore the possibilitythat this early replication of the satellites leads to amplificationof rDNA in the explant cells, in which massive ribosome synthesisis known to occur. The results showed that there was neitheramplification nor underreplication of rRNA genes during callusformation and its growth. Experiments with explants of Jerusalem artichoke tuber, whichare well known as a synchronous replication system, showed thata component slightly heavier than the bulk DNA was synthesizedat the early phases of the first replication period. However,the density of this early replicating satellite differed fromthat of artichoke rDNA. DNA-rRNA hybridization experiments againshowed no gross changes of rDNA content during dedifferentiationof this plant system. (Received September 30, 1981; Accepted January 5, 1982)     

不同激素及其不同配比对绞股兰愈伤组织诱导的统计学分析

绞股兰的茎段和叶碎片外植体可在合适的激素调节诱导下形成愈伤组织．通过含有不同水平激素的MS培养基对绞股兰愈伤组织诱导试验,经统计学分析,可以找出对绞股兰脱分化形成愈伤组织细胞影响显著的激素及其适宜的激素水平．     

光叶楮扦插生根的吲哚乙酸氧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶活性变化研究

对光叶楮扦插生根过程中吲哚乙酸氧化酶（IAAO）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）3种酶进行了动态跟踪分析。结果表明：IAAO活性在扦插初期逐渐上升,第10d上升到高峰,之后下降再上升,第30d达到新高峰,然后迅速下降;前25d POD活性变化规律与IAAO相似,但30d以后活性一直上升;PPO活性在扦插前期缓慢上升,第20d上升到了最高点,此后变化不大。还研究了IAAO、PPO、POD与不定根的发生和发展关系,认为光叶楮扦插生根可分为愈伤组织形成期、根诱导期和根的伸长期3个阶段,愈伤组织形成期3种酶活性都呈上升趋势,根诱导期IAAO和POD的活性达到高峰;而根伸长期IAAO和POD活性下降,PPO活性上升。     

Untersuchungen über Beziehungen zwischen Zellteilung und Morphogenese bei Gewebekulturen von Daucus carota

Relationship between cell division and morphogenesis of tissue cultures of Daucus carota. I. Observations on rhizogenesis and formation of whole plants.—By using a chemically defined medium the conditions for formation of roots and embryos in callus of various tap root parts of domestic Daucus carota forms were investigated and compared. Whole carrot plants capable of generative reproduction were produced from callus as well as from cell and tissue suspensions. The influence of various phytohormones on differentiation and cell division activity of explants was studied. A close relationship between cell division activity and differential stains was established and explained as a result of the phytohormone action on the cell division rate.     

青叶胆愈伤组织的诱导与液体继代培养

以青叶胆(Swertia mileensis)幼叶为外植体,在添加不同生长调节剂组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导。结果表明,最有效的生长调节剂组合为IAA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L和NAA 4.0 mg/L+KT 2.0 mg/L+GA₃ 1.0 mg/L,其诱导率分别为96.6%和96.0%。使用以上两种生长调节剂组合进行愈伤组织的液体继代培养,10 d可使愈伤组织增殖率分别达257.3%和310.2%。     

A HISTOCHEMICAL STUDY OF CALLUS INITIATION FROM CARROT TAPROOT PHLOEM CULTIVATED IN VITRO

Cylinders of carrot taproot secondary phloem were cultured on one of four media: 1) 2% sucrose + 1% agar (SA); 2) Heller's basal medium (NA); 3) NA + 10^-5 g/liter 2,4-D (H4); and 4) NA + H4 + 15% coconut milk (HW). Samples were taken from the cultured explants at 3-day intervals. A morphological study of the cultured explants revealed no differences between callus-initiating explants (cultured on HW medium) and noncallus-initiating explants (cultured on SA, NA, and H4 media) within the first 3 days of culture. All explants exhibited a typical wound response. Cell division ceased in the NA and SA explants after the sixth day in culture. Extensive cell division occurred in the subsurface layer of dividing cells in the HW explants and resulted in the formation of callus by the ninth day in culture. Histochemical staining revealed that the activity of NAD diaphorase, succinic dehydrogenase, and cytochrome oxidase were closely correlated with the wound response and with callus initiation in the cultured explants. The activity of these enzymes was high in the layer of dividing cells of all explants after 3 days of culture, but with longer periods of culture the activity of these enzymes was closely correlated with the extent of cell division. Acid phosphatase activity was associated with the dividing cell layers of all explants, but comparatively little acid phosphatase activity was observed in the NA, SA, and H4 explants as compared to the HW explants, and acid phosphatase was strongly correlated with callus initiation by the HW explants. Using the nitroso reaction, “catechol tannins” were found in the surface layers of the NA, SA, and H4 explants, while no nitroso-reaction-positive substances were detected in the HW explants during the period of callus initiation.     

蝴蝶兰胚性愈伤组织诱导的氧化还原动态

离体培养蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）类原球茎切块诱导胚性愈伤组织,在培养第11～18 d时出现胚性细胞,第25～32 d观察到幼嫩的球形胚。在培养第0～11 d,外植体.OH相对含量波动不大,O2.生成速率持续提高并达到高峰,H2O2水平明显提高,抗氧化能力在低位波动,推测外植体可能经受较强的氧化胁迫,以利细胞脱分化和获得胚性潜能。此外,此期间SOD活性持续提高,POD和CAT活性达到一个高峰。在愈伤组织诱导全过程中,总抗氧化能力、DPPH自由基清除率、H2O2水平基本上都持续提高,与SOD活性均极显著正相关,SOD是影响培养物清除自由基能力和提高抗氧化水平的主要因素。综合分析实验结果表明,在蝴蝶兰胚性愈伤组织诱导过程中,SOD、O2.和H2O2起到关键的作用。     

影响魔芋愈伤组织形成的几个因素

研究了魔芋不同外植体类型、激素种类和激素组合、光暗培养条件、不同生理时期取材等因素对愈伤组织诱导能力的影响以及不同处理所得愈伤组织的分化能力。结果表明 ,不同外植体类型诱导愈伤组织能力顺序为 :顶花芽 >幼嫩芽鞘 >子芋 >根状芋 ;经过 4℃低温预处理的子芋和根状芋比未经预处理的外植体更易诱导出愈伤组织 ;MS +BA1 .0～ 2 .0 +NAA1 .0～ 2 .0培养基均能诱导外植体产生愈伤组织 ,愈伤组织诱导率大多在 5 0 %以上 ,最高达 87.5 % ;在魔芋生长期取材比在休眠期取材更易诱导出愈伤组织 ;不同处理所得愈伤组织在分化能力上具有较明显的差异。