核酸内切酶在细胞凋亡中的作用

核酸内切酶在形成细胞凋亡的典型特征——DNA片段化中,发挥着直接的重要作用.介绍了已知的参与细胞凋亡的二价金属离子依赖性和非依赖性核酸内切酶种类,其中二价金属离子依赖性主要有nuc18、DNaseⅠ、Ca^2＋/Mg^2＋核酸内切酶、Ca^2＋/Mn^2＋核酸内切酶、DNaseγ、nuc58和nuc40;二价金属离子非依赖型主要有DNaseⅡ及类似核酸内切酶.此外,还初步探讨了核酸内切酶降解染色质DNA的过程及其作用机制.     

脱氧核糖核酸内切酶与细胞凋亡

哺乳动物细胞广泛存在细胞凋亡。脱氧核糖核酸内切酶(DNase)在细胞凋亡中发挥重要作用,染色质DNA降解、浓缩及细胞核结构的破坏都与DNase有关。目前已发现多种DNase参与不同类型细胞的凋亡。本重点对DNaseⅠ、DNaseⅡ、NUC18、NUC70、AN34、DFF(DFF40/DFF45)等内源性DNase与哺乳动物细胞凋亡的关系作系统的归纳和分析。     

活性氧水平决定白血病细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性

旨在探索三氧化二砷（As2O3)诱导白血病细胞株（NB4和U937）凋亡的敏感性与细胞活性氧（reactive oxy-gen species,ROS)水平的关系。以二甲萘醌（DMNQ）温育NB4和U937细胞,双氢罗丹明123（DHR）捕获ROS,流式细胞仪检测两种细胞ROS水平的差异。As2O3单独或联用DMNQ温育NB4和U937细胞,流式细胞仪及电镜检测凋亡并分析两种细胞凋亡敏感性的差异及其在用药前后的变化。结果显示,NB4的ROS水平明显高于U937,DMNQ可提高NB4和U937的ROS水平,诱发U937对As2O3的敏感性,增强As2O3促NB4细胞凋亡的效应,过氧化氢酶可逆转DMNQ的效应,结果提示,白血病细胞NB4和U937对As2O3促凋亡的敏感性决定于细胞固有的ROS水平。     

药物诱导乳腺癌细胞凋亡作用机理的研究

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,乳腺癌的诊断、治疗及预后与其细胞凋亡密切相关。本文对国内外有关药物诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制如药物对细胞周期、线粒体膜电位、细胞内钙离子浓度及caspase家族的影响等内容进行概述,试图为抗乳腺癌新药物的研发找到新的途径。     

天然药物中抗HIV活性成分研究进展

天然产物往往具有独特的化学结构,是发现新药或药物先导物的重要途径之一.目前,从天然药物中发现了多种结构类型的具有抗HIV活性的化合物,如多糖类、生物碱类、香豆素类、黄酮类、木脂素类、醌类、酚酸类、萜类等,并且其作用机制并不局限于抑制逆转录酶或蛋白酶,可在HIV复制周期的各个环节发挥作用,本文按天然产物的结构类型进行归纳,综述了近年来源自天然药物的抗HIV活性成分研究进展,总结了的151个具有抗HIV活性的天然产物结构及其活性测试数据,以期为从天然化学成分中寻找、发现并研究开发有效的抗艾滋病药物提供线索.     

细胞凋亡相关基因研究进展

细胞凋亡研究已成为当今国内外研究的新热点,本就近年来有关与细胞凋亡相关的基因或因子研究的进展做一综述,着重阐述了ｂｃ１－２、ｍｙｃ、ｐ５３和ＡＰＯ－１／ＦａｓＴＧＦβ１等对细胞凋亡的影响和作用,以期有助于进一步提示细胞凋亡的分子机理。     

药物诱导的玉米根尖凋亡细胞表面电特性研究

细胞凋亡过程中细胞表面膜的电位很可能会发生改变。本文首次报导：应用细胞电泳技术（cell electrophoresis)对细胞毒素类药物放线菌酮（cycloheximide)、放线菌素D（actinomycin D）和秋水仙碱（colchicine)等诱导的植物凋亡的细胞与正常细胞之间电泳迁移率（EPM）的差异进行了比较,对引起的膜电位变化进行了定量分析。实验以玉米根尖分生组织为材料,制备原生质体,经过适当剂量的药物处理（Fig.1-B),在尽量减少细胞膜被破坏的情况下（Fig.2),观察到：三种细胞毒素类药物的作用有所不同。被诱导的植物凋亡细胞的膜表面Zeta电位绝对值比正常细胞的高（Fig.1-A)。本研究提示细胞电泳可对凋亡细胞表面膜电位的变化进行定量分析,为细胞凋亡的检测在方法上提供了新思路。     

天然提取物诱导人HepG2 细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是机体维持内环境稳定,更好的适应生存环境采取的一种死亡过程。细胞凋亡异常与肿瘤的发生、发展存在密切的关系。细胞凋亡的信号途径主要有死亡受体介导的外源性通路、线粒体介导内源性通路、内质网信号通路及MAPK信号通路。通过作用于凋亡信号通路上一些关键基因,诱导肿瘤细胞凋亡被认为是临床抗肿瘤治疗最有成效的治疗方法之一。研究已证实多种天然提取物作用于凋亡信号途径中一些重要因子可诱导细胞凋亡,并取得较好的抑制肿瘤增殖的效果。本文是关于细胞凋亡机制及各种天然提取物作用于凋亡通路上主要基因进行抗肿瘤治疗研究进展的综述。     

药物诱导的玉米根尖细胞凋亡

同时应用ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒｉｎｇ、ＤＮＡ Ｇｅｌ Ｂｌｏｔ以及基于染色体涂片 原位末端标记技术,从染色体、细胞核和ＤＮＡ不同水平对细胞毒素类药和的放线菌Ｄ、放线菌酮和秋水仙碱诱导的玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）根尖分生组织细胞死亡作了检测。结果表明：同动物中一样,这些药物诱导的玉米根尖分生组织细胞死亡也具有ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ、染色质和细胞核浓缩等典型的调亡特征,说明这些细胞毒素类药物能够诱导植     

羟自由基诱导烟草细胞凋亡

用适当浓度组合的硫酸亚铁和过氧化氢反应以产生羟自由基来处理烟草悬浮细胞,首次观察了细胞中染色质凝缩、边缘化、细胞核解体等典型的细胞凋亡的形态学特征;在ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到因核ＤＮＡ有规则地在核小体间被降解而产生的阶梯条带;末端脱氧核糖核酸转移酶介导的３’－ＯＨ末端标记法（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＴｄＴ）－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰ ｎ     

休克淋巴液诱导大鼠肠系膜微淋巴管内皮细胞凋亡

无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型,引流肠系膜淋巴液或收集门静脉血,同时,另取动物引流正常淋巴液、正常门静脉血。以不同处理因素与第3代原代培养的肠系膜微淋巴管内皮细胞(MMLEC)共同孵育,MTT法检测不同终浓度的休克淋巴液及正常淋巴液对MMLEC增殖的影响;流式细胞仪检测MMIEC增殖周期变化、并进行细胞核DNA电泳分析;RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及fas、fas L的表达。结果表明,随着休克淋巴液终浓度增加,MMLEC的增殖活力逐渐降低,显著低于正常淋巴液组;4%终浓度的休克淋巴液作用MMLEC 4h后,MMLEC凋亡率为(35.4±1.6)%,C_0-G_1期细胞比值增大,S G_2-M期细胞比值下降,其它处理因素无明显变化,同时细胞核DNA电泳形成典型的阶梯状电泳图谱(DNA ladder)。4%终浓度的休克淋巴液作用4h后,显著高于其它各组(P<0.01);4%终浓度的休克淋巴液作用6h后,MMLEC的fas、fas L、bax mR- NA表达高于其它组、bcl-2 mRNA表达低于其它组(P<0.01)。结果提示,休克淋巴液可抑制MM- LEC增殖、干扰细胞周期、上调凋亡促进基因表达.从而诱导细胞凋亡。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ＰＡ对人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２细胞的生长调控、诱导调亡作用。结果表明：４－ＰＡ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖抑制的ＩＣ５０为４－９ｍｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０增加。作用效果迅速,在０．５小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ＰＡ浓度的增加和作用时间的处长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞调亡的分析发现：４     

天花粉蛋白诱发白血病细胞K562凋亡的研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS),是一种从栝楼块根内提取的核糖体失活蛋白,具有流产、抗肿瘤和抗HIV等多种生物活性。本文利用FACS检测到天花粉蛋白可使K562白血病细胞产生明显的凋亡小峰、DNA区带电泳成典型的“梯状”条带,电镜检测可观察到明显的细胞凋亡形态。这些结果表明天花粉蛋白可以诱发K562白血病细胞产生凋亡。     

固定植物细胞生产天然产物研究概况

本文综述了十多年来通过固定植物细胞培养技术生产天然产物的研究概况。     

活性氧诱导线粒体损伤导致晶体上皮细胞凋亡

目的探讨线粒体损伤在活性氧诱导晶体上皮细胞凋亡中的作用。方法以过氧化氢为处理因素,MTT方法测定过氧化氢对晶体上皮细胞的半数致死浓度(IC50),使用确定的IC50处理培养的人晶体上皮细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化降解,流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)变化、透射电镜观察细胞线粒体形态,定量免疫印迹检测胞质溶胶中细胞色素c含量的变化及caspase-3的活化。结果过氧化氢对晶体上皮细胞的IC50是32.24μmol/L。32.24μmol/L的过氧化氢处理12h可以检测到晶体上皮细胞染色体DNA发生片段化降解;6h可以检测到线粒体跨膜电位去极化,且随时间延长逐渐加强;18h透射电镜观察可见明显的线粒体膜损伤。定量免疫印迹分析显示细胞色素c在胞质溶胶中的表达逐渐提高及caspase-3活化加强。结论活性氧可能是通过诱导线粒体结构和功能损伤导致晶体上皮细胞凋亡。     

木黄酮对人催乳素瘤细胞增殖及其凋亡影响的实验研究

目的：观察木黄酮（genistein,GST)对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将CST、β-雌二醇（E2）作用于体外培养的人催乳素瘤细胞,测定MTT值及^3H-TdR掺入量,流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果：不同浓度的GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖,并存在着剂量效应,10^-5mol.L^-1GST可使G1期的细胞比例从对照组的55.3%上升为90.3%;不同浓度的E2以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖,并使G2期的细胞比例从对照组的15.6%上升为41.8%,GST和E2的共同作用仍可抑制催乳素瘤细胞的增殖,但抑制程度降低,不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡,E2对GST的促凋亡作用无明显影响。结论：GST在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,E2可部分拮抗GST的抑制增殖作用,但对其促凋亡作用无明显影响。     

去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

体外实验证明１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,可诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。提取加药组细胞ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的ＤＮＡ“梯子”,同时加药组细胞出现核固缩、碎裂及胞浆浓缩等形态学变化。流式细胞测试结合形态学观察,特别是细胞超微结构观察,证明去甲斑蝥素诱导的Ｋ５６２细胞凋亡大部分发生在细胞周期的Ｍ期,也有部分发生在间期。免疫细胞化学结果表明,１０μｇ．ｍｌ－１去甲斑蝥素作用于人红白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ,与对照组相比,加药组细胞中ｂｃｌ┐２蛋白表达增强,而Ｂａｘ蛋白表达减弱,两组间有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。     

迷迭香抗氧化剂的提取方法研究

本文介绍了一种两步法从迷迭香植物中提取天然抗氧化剂的方法。先用低沸点有机溶剂进行粗提 ,然后经真空蒸馏去除敏感的色泽和风味物质 ;或用硅胶柱层析分离得到较高纯度的抗氧化剂。将硅胶柱液相色谱层析与真空蒸馏分离得到的抗氧化剂进行抗氧化性能的比较 ,发现后者能获得更高纯度的抗氧化剂。纯化的抗氧化剂组份对植物油和动物油具有显著的抗氧化效能     

小儿急性白血病细胞DNA、蛋白质含量及其临床意义

用流式细胞术（ＦＣＭ）测定了４５例不同病期急性白血病患儿和１３例非白血病患儿骨髓细胞ＤＮＡ及蛋白质含量,结果显示：１．急性白血病患儿的ＤＮＡ非整倍体检出率为４１．２％,其中ＡＬＬ为３３．３％,ＡＮＬＬ为６０％;２．ＡＬＬ组和ＡＮＬＬ组的ＤＮＡ合成期细胞百分数（Ｓ％）显著低于非白血病组,而ＣＲ组与非白血病组之间的Ｓ％差异无显著性;３．ＡＮＬＬ组的ＰｒＩ显著高于ＡＬＬ组、非白血病组及ＣＲ组,ＡＬＬ的ＰｒＩ显著低于ＣＲ组和非白血病组,而非白血病组与ＣＲ组的ＰｒＩ差异无显著性。四组之间ＬＰＣ－Ｆ差异无显著性;４．在对１１例ＣＲ病人进行的连续观察过程中,５例病人检出ＤＮＡ非整信体,其中４例于检出ＤＮＡ非整倍体后３３～７４天复发。