大鼠和小鼠睾丸表皮生长因子表达的免疫组织化学定位观察

为了了解大鼠和小鼠睾丸是否产生ＥＧＦ及其细胞定位,本实验用ＥＧＦ单克隆抗体对大鼠和小鼠睾丸进行了免疫细胞化学定位研究,结果显示：（１）出生后,大鼠和小鼠睾丸即开始产生ＥＧＦ,分泌活动主要位于睾丸间质细胞。（２）至性成熟期,少数精原细胞、精母细胞及个别圆形精子细胞和管周肌样细胞也产生ＥＧＦ,使生精小管尤其是血睾屏障管腔小室侧的ＥＧＦ分泌增加。（３）在本实验中,睾丸支持细胞未见明显ＥＧＦ阳性染色。结果表明,大鼠和小鼠睾丸是可以产生ＥＧＦ的,间质细胞是其主要的ＥＧＦ分泌细胞。进入性成熟期后,少数精原细胞、精母细胞及个别圆形精子细胞和管周肌样细胞也产生ＥＧＦ。大鼠和小鼠睾丸在发育过程中ＥＧＦ分泌量呈上升趋势,至性成熟期达分泌高峰     

大鼠睾丸中S-100蛋白生后发育变化的免疫细胞化学研究

本文应用免疫细胞方法,研究大鼠生后４天、７天、１４天、３０天、２个月和３个月睾丸中Ｓ－１００蛋白的分布和变化规律。结果表明：Ｓ－１００蛋白染色反应位于睾丸间质细胞,直到生后３０天才出现阳性细胞,数量少,着色浅,而２月龄和３月龄大鼠睾丸Ｓ－１００蛋白阳性细胞数量多,着色深。提示Ｓ－１００蛋白可能参与间质细胞的合成和分泌睾酮过程。     

大鼠睾丸雄激素受体表达的增龄变化

应用免疫细胞化学及图像分析等方法,对出生到生后25月龄各发育阶段SD大鼠睾丸内雄激素受体(AR)的表达变化进行了系统的研究。发现(1)睾丸间质细胞：从出生到生后3周龄,AR阳性表达强度较弱;到生后1月龄,AR阳性表达强度显著增强,并达到峰值;在生后2月龄,AR阳性表达强度显著减弱,此后AR阳性表达又呈增强趋势。(2)肌样细胞：从出生到生后2周龄,AR阳性表达强度较弱;到生后3周龄,AR阳性表达强度显著增强,并一直维持到生后2月龄;从生后3月龄,AR阳性表达强度呈减弱趋势,到生后25月龄达到最低水平。(3)血管内皮细胞：从生后3周龄到生后2月龄AR阳性表达较强;生后3月龄,AR阳性表达强度明显减弱;生后25月龄,AR阳性表达强度与生后3月龄相比变化不明显。(4)支持细胞：在生后1月龄出现AR阳性表达,到性成熟后,支持细胞AR阳性表达随生精周期变化而变化,在生后25月龄未见AR阳性表达的支持细胞。(5)生精细胞：出生组,前精原细胞内有AR阳性表达;生后2周龄,精子细胞开始出现AR阳性表达;生后1月龄,精原细胞开始出现AR阳性表达;生后2月龄出现阳性表达的精子,生后25月龄未见阳性表达的生精细胞。     

大鼠视网膜中HAP1的免疫组织化学定位及不同光照条件对HAP1表达的影响

目的探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin associated protein 1, HAP1)是否存在于视网膜内及是否与视觉有关.方法对正常大鼠眼球壁用ABC法进行免疫组织化学染色,观察HAP1在视网膜中的定位;用半定量免疫印迹方法(Western blotting)检测不同光照条件对大鼠视网膜中HAP1表达的影响.结果 HAP1较广泛地分布在大鼠视网膜各层,但以内核层及外核层中免疫反应较强,阳性反应产物主要定位在节细胞层和内核层/外核层中部分细胞胞体内;其余各层中,HAP1免疫反应较弱,阳性产物呈弥散分布,未见明显的阳性胞体.在连续处于黑暗环境中72小时大鼠视网膜中,HAP1表达较常规光照动物明显减少,而连续光照72h大鼠视网膜内HAP1表达无明显变化.结论 HAP1在视网膜中的存在及不同光照条件对视网膜HAP1表达的影响表明,HAP1可能与视觉活动有关.     

Smad4蛋白在不同龄大鼠睾丸的定位研究

探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad4蛋白在发育不同阶段大鼠睾丸的表达与分布。分别选用出生后3、7、14、28天以及成年大鼠,应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术及蛋白质免疫印迹技术,检测Smad4蛋白在大鼠睾丸的表达、定位和发育变化,并通过图像分析技术对免疫组织化学结果进行统计学分析。结果显示,发育各个阶段的间质细胞中都有较强的表达,免疫阳性产物位于细胞质内,而各级生精细胞则无阳性反应,且随着大鼠睾丸发育阶段的变化而蛋白表达量逐渐增多,为TGF－β超家族成员在精子发生和发育过程中的分子机理提供了直接证据。     

Smads蛋白在大鼠睾丸发育不同阶段的表达和定位

探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smads蛋白在发育不同阶段大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理。分别选用出生后3、7、14和28d以及成年大鼠,应用蛋白质免疫印迹杂交技术及免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术,检测Smad1、Smad2、Smad4和Smad5蛋白在大鼠睾丸的表达、定位和发育变化,并通过图像分析技术对免疫组织化学结果进行统计学分析。免疫印迹杂交发现,Samd1、Smad2和Smad4在3、7、14和28d以及成年大鼠睾丸的生精细胞中即可见免疫阳性反应;Smad2和从7d起开始表达,免疫阳性产物位于各级生精细胞的胞质内;Smad4在发育的各个阶段的间质细胞中均有较强的表达;Smad5仅在28d和成年大鼠的间质细胞中有弱的表达。结果提示：Smads蛋白在睾丸中的分布不同,表达量存在差异,为揭示TGF－β超家族在粗子发生和发育过程中的分子机制提供了直接证据。     

PTA1在大鼠淋巴器官中定位分布的免疫组织化学和原位杂交研究

采用免疫组织化学方法和地高辛－碱酸酶标记原位杂交组织化学方法观察PTA1在大鼠胸腺、脾脏和淋巴结等淋巴器官中的定位分布。首次证实PTA1和PTA1 mRNA散在分布于大鼠脾脏和胸腺中,但在淋巴结中未见分布。本研究结果为全面了解PTA1在体内的分布及功能提供重要的实验依据。     

促甲状腺激素释放激素受体-1(TRH-R1)蛋白在大鼠出生后睾丸不同发育阶段的表达和定位

目的研究促甲状腺激素释放激素受体-1(thyrotrophin-releasing hormone receptor type-1, TRH-R1)在大鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达,探讨其在生殖发育调节中的作用.方法应用蛋白质免疫印迹杂交技术以及免疫组织化学ABC法检测TRH-R1在8d、15d、20d、35d、60d和90d大鼠睾丸中的表达和定位,并结合图像分析技术对免疫组化结果进行统计学分析观察其在发育过程中的变化.结果免疫印迹杂交发现TRH-R1蛋白表达于15d以后各阶段的大鼠睾丸;而运用免疫组化在第8d即检测到TRH-R1的表达,以后发育过程中的各个阶段均有阳性反应细胞, TRH-R1定位于大鼠睾丸的间质细胞;免疫反应阳性物均位于胞膜和胞质,胞核区为阴性;图像分析结果表明,随着大鼠睾丸的发育,TRH-R1表达量呈增多趋势,且具有统计学差异(P＜0.01).结论本实验证明TRH-R1在出生后8d大鼠的睾丸内即有表达,并持续表达于其后各个发育阶段;TRH-R1定位于睾丸的间质细胞,其表达量随着增龄变化呈增多趋势,即同发育过程相关.     

高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达及意义

目的 观察高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达的变化.方法雄性 S D大鼠 20只,随机分为 2组,对照组(C组)给予全价颗粒饲料喂养;高脂饮食组(H组)给予高脂饮食 (饲料成分为胆固醇 2%、猪油10%、基础饲料 88% )连续喂养2个月,各组动物均不限制饮水.2个月成模后,取血检测血脂;取大鼠下颌下腺组织,进行免疫组织化学染色(SP法) 和计算机图像分析.结果 ①血脂检测结果:C组TG与H组TG比较有显著性差异(P<0.05);C组TC和H组TC比较有显著性差异(P<0.05).②免疫组化结果:C组大鼠下颌下腺AQP1平均光密度值与 H组AQP1平均光密度值比较有差异性(P<0.05);C组大鼠下颌下腺AQP5平均光密度值与 H组AQP5平均光密度值比较有差异性(P<0.05).结论 高脂血症大鼠下颌下腺导管上皮细胞内AQP1和AQP5的表达减少,为探讨高脂血症导致下颌下腺分泌功能降低的病理机制提供了形态学依据.     

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞项体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和／或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。     

大鼠胰腺嗜铬颗粒素A分布的免疫组织化学研究

本研究用ＡＢＣ免疫组织化学方法,在Ｂｏｕｉｎ液固定的常规石蜡切片上,观察了啥铬颗粒素Ａ在大鼠胰腺内分泌细胞内的定位和分布,并用相邻切片双标记法,观察了它与胰高血糖素、胰岛素、生长抑素的共存关系。结果发现,大鼠胰腺嗜铬颗粒素Ａ样免疫反应细胞主要分布于胰岛的周边部,胰腺外分泌部的导管和腺泡等处均未见ＣｇＡ祥物质存在。用相邻薄切片免疫显色技术证明,大鼠胰腺中ＣｇＡ样物质与胰高血糖素共存。结果提示,ＣｇＡ可能是胰腺内分泌细胞的一个新的标志物,在胰腺功能调节上发挥着重要作用。     

大鼠肝脏水通道蛋白7的表达

目的研究水通道蛋白7(AQP7)在大鼠肝脏中的表达和分布。方法选用成年健康SD大鼠,采用免疫组织化学的方法对肝脏中AQP7蛋白的表达进行定位检测。结果AQP7阳性免疫反应产物集中位于大鼠肝脏毛细胆管面的肝细胞质膜上,肝细胞的基膜面和血窦面未见阳性免疫反应产物。结论AQP7在肝脏中的表达及其空间上的分布提示其可能参与胆汁的分泌。     

雌激素Beta受体在大鼠脑内表达的免疫组化定位研究

为了探讨雌激素作用于神经系统的机理,采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了新的雌激素受体(ER-β)在成年雌雄大鼠脑内的分布。研究证实ER-β免疫阳性物质主要位于神经元的细胞核内,但在个别脑区也可在胞浆甚至突起内检测到。最强的ER-β免疫阳性信号见于前嗅核、大脑皮质、小脑浦肯野细胞、斜角带垂直部、蓝斑和三叉神经运动核等部位;中等强度的染色见于隔内侧核、杏仁外侧核、黑质、中央灰质等部位;较弱的阳性反应见于下丘脑与杏仁复合体的部分核团。在一些部位还存在表达水平甚至细胞内定位模式的性别差异,如前庭上核内的表达只见于雌性;雄性大鼠三叉神经运动核内ER-β蛋白主要表达于胞浆内,细胞核为阴性;而在雌性大鼠该部位ER-β蛋白主要位于细胞核等。以上结果表明ER-β蛋白在大鼠脑内分布广泛并具有一定的性别差异,在与学习记忆有关的脑区如大脑皮质和基底前脑内有很高的表达,提示在脑组织内雌激素可能通过ER-β这一新的信号途径发挥多种重要的调控作用,如学习记忆等。     

亨廷顿蛋白相关蛋白1在成年大鼠脊髓中的分布

目的观察亨廷顿蛋白相关蛋白1(huntingtin-associated protein 1, HAP1)在成年大鼠脊髓中的分布特点.方法采用免疫组织化学ABC法和免疫印迹(Western blotting)方法.结果免疫组织化学结果显示,在成年大鼠脊髓中,以背角灰质浅层(Rexed Ⅰ,Ⅱ层)的HAP1免疫反应性最强,阳性细胞最密集,免疫反应产物除分布在胞体外,还大量弥散分布于胞体间的神经毡内;背角深层有部分HAP1免疫反应阳性细胞呈散在分布,中央管周围灰质(Rexed X)内阳性胞体密度和免疫反应性强度仅次于后角浅层,而在脊髓腹角,偶见HAP1免疫反应阳性神经元.此外, Western blotting分析显示,脊髓背角内HAP1表达水平明显高于脊髓前角.结论 HAP1主要分布于大鼠脊髓背角灰质浅层和中央管周围灰质神经元内,提示其可能与痛觉信息一级传入和/或调控有关.     

体外培养的小梁细胞表达水通道蛋白-1

目的观察体外培养条件下的牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)是否表达水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP-1)。方法采用免疫组织化学方法检测AQP-1在BTMC上的表达,并进行半定量分析。结果正常BTMC可见AQP-1蛋白表达,其灰度值为:167.94±1.18;阴性对照为:195.64±1.62,统计学分析其差异具有显著性(P<0.05)。结论在体外培养条件下,BTMC表达AQP-1,这有助于在体外条件下研究房水流出阻力、并探讨青光眼的药物治疗。     

正常大鼠肺内表皮生长因子受体(EGFR)的免疫组化定位

作者以免疫组织化学技术对大鼠肺组织内表皮生长因子受体(EGFR)进行了定位研究.结果显示 EGFR 广泛分布于支气管粘膜上皮细胞、肺泡细胞、血管内皮下结缔组织和血管平滑肌细胞上。其提示 EGF 通过作用于肺组织内的特异性 EGFR 而发挥其生理和/或病理学功能。     

大鼠脑内代谢型谷氨酸受体5亚型(mGluR5)定位分布的免疫细胞化学研究

本研究用免疫细胞化学技术观察了大鼠脑内参与兴奋性突触传递的代谢型谷氨酸受体5亚型(mGluR5)的精确定位分布.mGluR5阳性浓染的神经元胞体和纤维密集地分布于大脑皮质浅层、嗅球、伏核、尾壳核、前脑基底部、隔区、苍白球、腹侧苍白球、海马CA1和CA2区、下丘中央核、被盖背侧核和三叉神经脊束核尾侧亚核浅层;淡染而稀疏的mGluR5阳性神经元胞体和纤维见于屏状核、终纹床核、杏仁中央核、丘脑部分核团、上丘浅灰质层、外侧丘系背侧核和延髓中央灰质.     

大鼠泪腺睾酮受体直空负压ABC法光镜观察与免疫金探针超微结构定位

动物实验发现睾酮能改善干眼病动物模型干眼症状,促进泪腺分泌,但作用机理不明,本研究探讨泪腺细胞中是否存在睾酮受体。雌雄各8只大鼠的泪腺分别制成石蜡切片和超薄切片,睾酮分别采用ABC法及免疫金标记,通过真空负压ABC法光镜观察及免疫金探针超微结构定位进行细胞睾酮受体检查。结果：光镜下泪腺导管上皮细胞的胞浆及胞核中出现免疫染色阳性,泪腺上皮细胞则很少见到;电镜下泪腺细胞胞浆及核中可见金颗粒,对照组则染色阴性。结论 泪腺细胞存在着睾酮受体,睾酮通过受体对泪腺发生作用。