应用原位逆转录PCR技术检测石蜡切片中HCVRNA

利用原位逆转录聚合酶链式反应（ＩＳＲｔＰＣＲ）技术检测了１５例肝细胞癌及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的定位及分布,并探讨影响实验结果的重要因素。结果表明ＨＣＶＲＮＡ阳性信号主要位于肝细胞和癌细胞胞浆,胞核几乎阴性。影响结果的主要因素包括所用蛋白酶Ｋ浓度,消化切片的时间,组织固定所用固定剂的选择及ＰＣＲ扩增的循环次数等     

抗水稻矮缩病毒的反义核酶及复制酶部分序列的合成,克隆及其水稻…

采用反转录－聚合酶链式反应方法（ＲＴ－ＰＣＲ）,在人工合成的引物引导下,扩增出水稻矮缩病毒基因组第一片段（Ｓ１）全长序列及第五片段的部分序列（Ｓ５Ⅲ）,将扩增的片段分别克隆到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）及ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位占上,并进行了序列测定,以此基础上,利用ＰＣＲ引入的方法将核酶序列引入到Ｓ５Ⅲ片段反义链上以构成反义核酶基因Ｓ５ⅢＲ,将Ｓ１片段５’端部分序列（Ｓ１－１）及Ｓ５ⅢＲ基因克隆的     

中国首例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)A亚型毒株的鉴定

中国首例人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）Ａ亚型毒株的鉴定苏玲邢辉羊海涛１罗小光２邵一鸣（中国预防医学科学院艾滋病参比实验室,北京１０００５０）关键词人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）,艾滋病（ＡＩＤＳ）,亚型,套式聚合酶链式反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）,序列分...     

人肾液泡型H~＋_－ATPase 58kD亚基基因的表达

在大肠杆菌中表达了人肾液泡型Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ５８ｋＤ亚基的基因,利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）得到了５８ｋＤ亚基的编码片段．直接将ＰＣＲ产物连接到ＰＥＴ载体上表达．ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析表明５８ｋＤ亚基的基因得到高效表达．表达产物可达细菌细胞质蛋白的５０％．     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC—PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ－ＰＣＲ）。ＨＳＶ－１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ－２的为３９９ｂｐ,两型病毒经ＡＣ－ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮ     

原位多聚酶链反应在人巨细胞病毒诊断中的应用

逝年来人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染率高,检测方法进展人,有巨细胞包涵体细胞（ＣＣＩＣ）检测、病毒分离、免疫检测、原位杂交（ＩＳＨ）、多聚酶链反应（ＰＣＲ）等法。目前有人把ＩＳＨ与ＰＣＲ结合创立了原位多聚酶链反应法（ＩＳＰＣＲ）,此法更准确、更敏感特异,更有地ＨＣＭＶ感染的早期快速诊断。本文就ＩＳＰＣＲ的原理、程序、特征主临床应用作一综述。     

聚合酶链式反应在老年肺结核病人诊断价值

鉴于老年肺结核病人误诊率、漏诊率高,且缺乏病原学诊断方法,我院用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测３０例老年肺结核病人痰中结核杆菌进行探讨,结果显示,ＰＣＲ阳性率远较培养、涂片高（Ｐ＜０．００５）,从而提高了诊断符合率,使病人得到早期治疗。     

超慢生大豆根瘤菌2062菌株的部分16SrRNA序列测定

采用ＰＣＲ（聚合酶链式反应）的方法扩增并克隆了超慢生大豆根瘤菌（ＥＳＧ,ｅｘｔｒａ－ｓｌｏｗｌｙ－ｇｒｏｗｉｎｇ ｓｏｙｂｅｎ ｒｈｉｚｏｂｉａ）２０６２菌株的１６Ｓ ｒＲＮＡ的部分区段,然后进行核苷酸序列测定和分析。比较了测定的２６４个碱基序列与已经发表的其他相关根瘤菌序列的差异,并通过计算机遗传距离进行聚类分析。结果表明,ＥＳＧ与Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｂ．ｅｌｋａｎ     

应用PCR技术检测细小病毒H－1DNA在人肝癌与裸鼠正常组织中复制的差异

应用ＰＣＲ技术检测细小病毒Ｈ－１ＤＮＡ在人肝癌与裸鼠正常组织中复制的差异黄青山,马承武,郭兰萍,陈献华,罗祖玉（上海复旦大学生理与生物物理学系,上海２００４３３）关键词：自主性细小病毒Ｈ－１及ＭＶＭ,聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,人肝癌模型,抑瘤作用,肿...     

植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

PCR方法检测水稻中存在G蛋白基因家族

ＰＣＲ方法检测水稻中存在Ｇ蛋白基因家族陈忠英,王钧（中国科学院上海植物生理研究所,２００００３２）关键词Ｇ蛋白;聚合酶链式反应（ＰＣＲ）;水稻苗;ＤＮＡ序列分析植物细胞对各种外源和内源的刺激,如光、重力、病原、激素等都有灵敏复杂的反应,但对植物信息传...     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC－PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ羊克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被即Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ─１／ＨＳＶ─２型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ─ＰＣＲ）。ＨＳＶ─１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ─２的为３９９ｂｐ两型病毒经ＡＣ─ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮＡ片段,致使ＡＣ─ＰＣＲ能直接分型检测ＨＳＶ。ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２扩增产物的克隆和序列分析表明,本方法特异性好。用本法检测Ｂａｌｂ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本,进一步证实本方法不仅敏感、特异,而且分型准确。     

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框,该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液,４种ｄＮＴＰ底物,逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作,实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用,这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可     

视黄酸对胰岛素受体表达的影响

ＳＭＭＣ－７７２１细胞经１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）处理１－５天后,完整细胞或纯化胰岛素受体（Ｉｎｓ－Ｒ）对胰岛素（Ｉｎｓ）的结合容量逐日降低。＾％３５Ｓ－甲硫氨酸参人Ｉｎｓ－Ｒ明显减少,特别是β亚基。部分纯化Ｉｎｓ－Ｒ的酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活力也随ＲＡ处理时间延长而逐步降低。结果表明ＲＡ降低Ｉｎｓ－Ｒ的表达。但ＲＡ并不改变Ｉｎｓ－Ｒ与Ｉｎｓ结合的亲和力和它的负协同效应。     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

点突变的基因诊断方法的进展

本概述了近年来有关点突变用于疾病诊断的方法的原理和应用，着重介绍有关等位基因特异性扩增（ＡＳＡ）、连接酶链式反应（ＬＣＲ）、ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法、直接测序法（ＤＳ）等的有关进展，并对各方法之优缺点进行了综合评价分析，以指导合理选用。     

应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的１６ＳｒＤＮＡ基因。６０例临床标本中,２０例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型：１８例为结核分枝杆菌,２例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。２０例阴性标本中,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ又检查出５例阳性。２０例对照标本中,３种传统方法与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法均检测为阴性。全部试验３ｄ报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳图谱均有差异。所以,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术快速     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素—1诱导的心肌细胞原癌基因c—fo …

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨一氧化氮（ＮＯ）对血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）和内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的心肌细胞肥大和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定心肌细胞总蛋白含量（作为心肌细胞肥大的指标）;用基因特异性引物和ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ一步法进行逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测大鼠心肌细胞原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达（以ＧＡＰＤＨ为内标）。结果显示,ＡⅡ和ＥＴ－１分别作     

利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究

设计一对ＰＣＲ引物,其中上游引物的５’端除目的基因外,还加Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列,以质粒（ｐＳＶＬＤ３）为模板,通过ＰＣＲ扩增出带有Ｔ７ＲＮＡ聚合酶启动子序列的１３９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该ｃＤＮＡ有２个碱基变异,以此ＰＣＲ产物为模板,通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其     

PCR产物的RFLP分析在黄芪亚族（豆科）系统学研究中的应用初探

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）将豆科黄芪亚族７属９种及甘草亚族１属１种植物叶绿体基因组中ｎｄｈＦ和ｐｓｂＡ基因中一段约３．１ｋｂ的ＤＮＡ扩增出来,并摸索出一最佳的ＰＣＲ条件,使得此条带得以特异性扩增,可直接用于限制性内切酶水解。通过对此扩增片段的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）的初步分析,认为利用ＰＣＲ扩增出的ＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析来探讨植物的系统进化问题在中国现行条件下大有潜力,其方法简单易行,结果