黄地老虎颖粒体病毒的研究I.颗粒体病毒的超微结构

通过病虫组织和提纯病毒包含体的超薄切片的电镜观察,研究了新疆黄地老虎颗粒体病毒 Agrotis segetum granulosis virus (简称AsGV—XJ),在组织细胞中的超徽结构以及它的装配过程。从被AsGV矗J侵染的脂肪体和皮层中,观察到大量的颗粒体病毒。在前肠、中肠、后肠、马氏管、气管的组织切片中未观察到颗粒体病毒o AsG'v一xJ的装配是在脂肪体细胞的胞质中进行的,从病毒粒子的核髓开始,形成病毒粒子,然后由包含体蛋白以类晶体方式包被,构成一个完整的颗粒体o AsGV—xJ的装配过程证明了核糖体、线粒体、内质网在其增殖中的重要作用,AsGV—xJ的基本形态与国外报道的AsGV大致相同。观察到包含体外围有一层透明膜,以及各种不同排列方式的双粒子所构成的包含体,这是AsGv—xJ的特点。     

黄地老虎颗粒体病毒的研究——Ⅲ.黄地老虎颗粒体病毒的酶联免疫分析

黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulosis virus简称AsGV)已在防治黄地老虎的危害上获得成功,其杀虫率达95％以上,具有无残毒、用药少、经济简便和长效等优点。我们已对AsGV在黄地老虎细胞中的超微结构,AsGV的包涵体,病毒粒子的分离提纯及其形态结构作了报道。酶联免疫法是近年来发展起来的一种新的血清学技术,具有特异     

杨尺蠖核型多角体病毒蛋白质的特性

本文研究了杨尺蠖核型多角体病毒(AciNPV)蛋白质特性,用反复调等电点法,从AciNPV的多角体蛋白中分离到A,B两种蛋白,Sepharose 6B柱层析和超离心沉降分析表明,两者均为一个峰纯,沉降系数(S20w)分别为4.9和8.9,对A蛋白进行了16种氨基酸组成分析,Glu、Asp和Leu含量高于其它氨基酸,不含Cys,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫双扩散法分析表明,用两倍体积饱和硫酸铵沉淀法制备的多角体蛋白,与提纯的多角体A、B蛋白之间无差异,多角体蛋白结构多肽由6种组成,分子量在12500—54000道尔顿范围内,其中32000是多角体蛋白的主要多肽,病毒粒子结构多肽和核衣壳蛋白分别由19和7个多肽组成,分子量范围分别在89000～13000和34000～13000之间,间接试验结果表明,在AciNPV中有碱性蛋白酶活性存在。     

油桐尺蠖核型多角体病毒结构多肽的分析

本文采用不连续系统的垂直板SDS—PAGE对油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria Guenee Nuclear Polyhedrosis Virus简称BsNPV)的多角体蛋白、病毒粒子的结构多肽进行了分析。结果表明,经EDTA和热处理的多角体蛋白仅有一条主带,其分子量为31×10~3±1000d;病毒粒子至少有23种结构多肽,其分子量的范围在13—107×10~3d之间。用PAS染色测定多角体蛋白、病毒粒子中的糖蛋白,结果呈阴性反应。     

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白聚集体特性及与其它包涵体蛋白的血清学关系

纯化的多角体碱解释放多角体蛋白,经等电点沉淀和柱层析对多角体蛋白进行分离纯化,结合SDS-PAGE、免疫双向扩散、免疫电镜等方法,证明棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)的多角体蛋白以聚集体形式存在。用ELISA法检测包涵体蛋白之间的血清学关系,结果表明,与黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)和粘虫颗粒体病毒(PsGV)颗粒体蛋白相比较,HaNPV多角体蛋白与葡萄天蛾核型多角体病毒(ArNPV)和黄地老虎核型多角体病毒(AsNPV)多角体蛋白之间的血清学关系更为密切。     

分月扇舟蛾颗粒体病毒的结构多肽

采用垂直板不连续SDS-PAGE分析了分月扇舟蛾(Clostera anastomosis简称Cas)颗粒体病毒的结构多肽,结果表明,经Sepharose-6B柱层析的颗粒体蛋白仅有一条主肽,其分子量为32×10~3d;病毒粒子的结构多肽至少有23种其分子量范围在13—85×10~3d之间。采用PAS染色法测得Vp_(34)、Vp_(31)、Vp_(10)三条主带呈弱阳性反应,可认为有糖旦白有在的可能性。     

扁刺蛾核型多角体病毒的形态结构与某些生化特性的测定

扁刺蛾核型多角体病毒是一种单粒包埋型的杆状病毒,在扫描电镜下呈不规则多面体。病毒多角体大小不一致,平均直径为0.59μ。病毒粒子为340×85nm. 经SDS—PAGE分析,病毒的多角体蛋白主带分子量为29500道尔顿;病毒粒子的结构蛋白具有25条多肽,分子量为17.8～69.5×10~4道尔顿。病毒多角体蛋白氨基酸组成中富含Asp和Glu,而His、Cys、Met的含量却很低。病毒DNA的分子量为67.89×10~6道尔顿。     

两株蓖麻蚕核型多角体病毒的比较研究

本文描述来源不同的两株菌麻蚕多角体病毒的形态特征和理化特性。一株为较长期饲喂马桑叶的蓖麻蚕从自然罹死的幼虫和蛹中分离的多角体病毒（简称ArscsNPV);另一株为饲喂蓖麻叶的蓖麻蚕从幼虫分离的核型多角体病毒（简称ArscsNPV);另一株为饲喂蓖麻叶的蓖麻蚕从幼虫分离的核型多角体病毒（简称ArNPV)。两株核型多角体病ArNPV多角体大小约1．2－2．0μm最大的可达2．9μm。两株NPV病毒粒子均为杆状,ArscsNPV病毒粒子大小平均为310×50nm;ArNPV病毒粒子大小为350×50nm。两株NPV均为多粒包埋型。两株NPV的多角体蛋白均为单一组分,ArscsNPV多角体蛋白分子量为27．5kd;ArNPV多角体蛋白分子量为28kd。两株NPV的病毒粒子结构多肽均含有21条多肽,其中各多肽分子量有所差异。ArscsNPV的病毒粒子多肽分子量范围为11－130kd;ArNPV病毒粒子多肽分子量范围为11－96kd,其中有11种多肽了量彼此相同包括两种主要多肽（54kd和33kd）。用SDS－苯酚提取的病毒核酸,经实验证明均为双链DNA型使用几种内切酶酶解,求得两株NPV的核酸分子量,ArscsNPV为52．4×10^6d;ArNPV为73．5×10^6d。     

木毒蛾质型多角体病毒形态结构及理化特性的研究

木毒蛾质型多角体病毒呈不规则多面体,大小差异较大,大多数在０．８－２．１μｍ之间;病毒粒子在多角体内随机分布,病毒粒子为正二十面体结构,有１２个顶体,每个顶上均有一个球状结构,平均直径约为６０ｎｍ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,多角体蛋白由一条分子量为３１ｋＤ之间。多角体蛋白富含天冬氨酸,谷氨酸及酪氨酸,而半胱氨酸和甲硫氨酸含量较少,其碱性氨基酸与酸性氨基酸之比为１．４３。病毒核酸对ＲＮａｓｅ和ＤＮａｓ     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀柏毒蛾核型多角体病毒(Parocneria orienta Nuclear polyhedrovirus,简称PaorNPV)形态结构、结构多肽、限制性内切酶图谱等特性进行了研究.采用不连续系统垂直板SDS-PAGE分析了PaorNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽.应用5种限制性内切酶对PaorNPV基因组DNA进行了酶切分析.结果表明:经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为31.5 kD,不经热处理的多角体蛋白有三条带,分子量分别为31.5 kD、29.1 kD、28.6 kD;病毒粒子包含有25种结构多肽,分子量范围在17.6-114.6 kD之间.PaorNPV DNA经BamH I.EcoR I、HindⅢ、Pst I和Xho I酶切分别产生9、12、12、12和14条片段.基因组大小平均为124.6 kb.     

黄地老虎颗粒体病毒DNA的基因文库和物理图谱

利用EMBL 4——携带多切点连接序列的λ取代载体,建成了黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)DNA基因文库,并绘制出AsGV DNA基因组的物理图谱。当体外包装效率达3 x 104pFU／μg DNA时,Sal和BamHI烈酶完全酶切的EMBL 4和BamHI部分酶切的AsGV DNA,按2：1的接头克分子比,用T4连接酶连接后,在BHB2688与2690体系中进行体外包装,再经在L95和ED 8654中的转染和转导,获得1．5×103噬菌斑。根据Clarke和Carbon公式,筛选概率达到复盖99％的AsGV基因组只需35个重组噬菌斑。我们随机挑取了35个重组噬菌斑,经快速琼脂糖凝胶电泳分析得到13个不同类型的重组噬菌斑,以32P标记的AsGV DNA为探针进行分子杂交,确定了BamHI在AsGV DNA基因组上位点的相邻位置。     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑制作用

SDS-PAG电泳分析表明粘虫核型多角体病毒(Leucaia separata Nuclear Polyhedrosis Virus,简称LsNPV)的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为32kD的主带为多角体的主要结构多肽。经Sephaceyl S-200柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵体蛋白是一种以疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现32kD蛋白对Hela、HLAMP、HICAM等三种肿瘤细胞的生长有不同程度的抑制,用~3H-TdR标记核酸合成代谢的Hela细胞的放射活性证实了这种观察。     

黄褐天幕毛虫核型多角体病毒的形态结构与某些生化特性的研究

黄褐天幕毛虫核型多角体病毒是一种多粒包埋型病毒。在扫描电镜下观察,多角体呈不规则多面体,大小不一致,平均直径为1.30μm。病毒粒子为杆状,大小为366×90nm。病毒核酸为一环状DNA,长度约为37.2μm。经限制性内切酶酶解分析,DNA总分子量为77.1×10~6D。病毒多角体蛋白宫含ASP和Glu,而His、Cys、Met含量较少。经SDS-PAGE分析,多角体蛋白主带的分子量为30.2KD;病毒粒子含21条多肽,分子量范围在16.5—107KD之间。     

棉铃虫质型多角体病毒的某些生物物理和生物化学特性

本文对棉铃虫质型多角体病毒中国江苏分离株的生物物理和生物化学特性进行了研究,棉铃虫CPV通过其寄主幼虫大量增殖,经蔗糖梯度超离心纯化,CPV粒子由碱液溶解多角体释出,其沉降系数为403.9S,分子量为41.9×10~6,CPV多角体蛋白的主要组份为一种,分子量为27,000;CPV粒子结构蛋白则由六种多肽组成,经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,CPV多角体蛋白和CPV粒子均包含10种以上的多肽组份,经双向电泳,(PV粒子结构蛋白包含15种以上的多肽组份,CPV多角体蛋白氨基酸组成中不含半胱氨酸,其碱性氨基酸与酸性氨基酸比值为1.005,用SDS-热酚法提取所得CPV核酸,其解链温度为83侧;其碱基组成,A=U,G=C,说明CPV核酸是双链RNA,其G+C％为43％,在1％琼脂糖凝胶和3％聚丙烯酰胺凝胶中电泳,CPV RNA分别可分得11和13条基因片段,各片段大小为0.51～2.45×10~6,总分子量为17.94×10~6,电镜研究显示了CPV RNA在0.3μ,0.6μ1.0μ处有3个分布峰。     

昆虫病毒gp37/fusolin基因研究进展

昆虫病毒gp37fusolin基因属病毒复制非必需基因,其编码的蛋白能形成一种纺锤形包涵体(spindlebodies,SBs),该包涵体内不含有病毒粒子。Fusolin蛋白形成的SBs与纯化的Fusolin蛋白均能提高靶昆虫对杆状病毒的敏感性,推测GP37蛋白也具有类似的功能。对gp37fusolin基因的深入研究,有可能开发出新型病毒增效剂 。     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑…

ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳分析表明粘虫核型多角体病毒的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为３２ｋＤ的主带为多角体的主要结构多钛,经Ｓｅｐｈａｃｅｙｌ Ｓ－２０柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵全蛋白是一种疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现３２ｋＤ蛋白对Ｈｅｌａ,ＨＬＡＭＰ、ＨＩＣＡＭ等三种肿瘤细胞的生长有不同程序的抑制,用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记核酸合成代谢的Ｈｅｌａ细胞的放射活性证实了这种观     

棉铃虫核型多角体病毒的血清学研究

用提纯的棉铃虫核型多角体病毒(NPV)的多角体蛋白和病毒粒子免疫家兔制备抗血清,用免疫扩散和对流免疫电泳对四林棉铃虫NPV的多角体蛋白和病毒粒于进行了血清学比较研究。四株棉铃虫NPV分为两个包埋类型：单粒包埋型和多粒包埋型。soI．{3株和H．M株属前者,VHA 273株和XIA 10株属后者。同一株NPV的多角体蛋白或病毒粒子只与它们同源抗血清有反应。它们之间无交叉反应,表明同一株NPV的多角体蛋白和病毒粒子各具有特异的抗原。四株NPV的多角体蛋白不仅与同源的多角体蛋白抗血清有反应,而且也与异 源的多角体蛋白抗血清有交叉反应,说明四株NPV多角体蛋白具有共同的抗原。而四株病毒粒子与同源的病毒粒子抗血清有反应,在它们之间无交叉反应,表明四株NPv病毒粒子各具有自己特异的抗原。     

兔出血症病毒四个分离株的病毒多肽和血清学关系研究

使用PEG-DS两相系统和超离心提纯的兔出血症病毒(RHDV)四个分离株病毒,再经Sepharose 4B柱层析进一步提纯后,得到较纯的病毒粒子,回收率可达70％以上。应用常规双向免疫扩散试验,交叉血凝抑制试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)对四个不同地区分离株间的血清学关系进行了比较研究。结果表明实验中的四个分离株病毒均属同一血清型。SDS-PAGE结果表明,这四个分离株病毒均含有四条多肽,分子量为28—64KD。各株病毒多肽的分子量和各多肽在病毒粒子总蛋白中所占比例略有差异。因此四个分离株的RHDV在蛋白结构上可能存在地区差异。     

文山松毛虫质型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

对文山松毛虫质型多角体病毒的形态结构及理化特性进行了研究,多角体大部分为六边形,少数为四边形及近园形,其大小在0.47～2.45μ之间,平均为1.1μ。病毒粒子呈球形,无囊膜,致密的核芯区由一层外壳包裹,直径为60nm。病毒粒子表面有12个刺突,放大图象可见其亚单位排列。多角体蛋白的主要成分为一种,分子量为26200道尔顿,多角体蛋白氨基酸组成中不含半胱氨酸;其碱性氨基酸与酸性氨基酸之比为1:2.16。病毒粒子结构蛋白含五条多肽组分。用SDS-热酚法提取所得核酸,其热变性紫外吸收OD_(260)值增加51.6％。抗核酸酶S_1。Tm值为86℃。在1％琼脂糖凝胶电泳中可分为9个片段,而在5％PAGE中,则可分为10个片段。各片段大小在0.66×10~6～2.85×10~6道尔顿之间,总分子量为15.35×10~6。电镜分析研究显示了CPV RNA在0.4μ、0.8μ和1.2μ处有三个分布峰。     

家蚕核型多角体病毒结构多肽的双向电泳分析

用等电聚焦-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳的双向电泳法和银染色方法,分析了家蚕核型多角体病毒粒子和核衣壳的结构多肽。该病毒单粒包埋型病毒粒子含约96种多肽,核衣壳含约72种多肽。病毒粒子制剂和核衣壳制剂中含有较多量的分子量为31K的多肽,用蔗糖梯度离心、离心洗涤、碱处理甚至蛋白酶酶解和去污剂处理,都不能将其除去。向病毒制剂中加入纯化的多角体蛋白后作双向电泳,发现外加多角体蛋白改变原等电点面与上述31K多肽重合。对31K多肽的来源进行了讨论。