硫化氢前体L-半胱氨酸对结肠动力的影响及机制

本文旨在研究硫化氢(hydrogen sulfide, H_2S)前体L-半胱氨酸对大鼠结肠动力的影响,以阐明其对结肠收缩的调节作用及机制。采用免疫组织化学染色和免疫印迹实验检测内源性H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase, CSE)和胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase, CBS)在大鼠近端结肠的表达情况;采用生理记录仪检测结肠平滑肌收缩活动的变化;利用膜片钳实验检测结肠平滑肌细胞离子通道电流。结果显示,CBS和CSE在大鼠近端结肠黏膜层、平滑肌层及肌间神经丛均有表达;L-半胱氨酸以浓度依赖的方式抑制近端结肠纵行平滑肌收缩,H_2S合成酶抑制剂氨基氧乙酸(aminooxyacetateacid,AOAA)和炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)孵育纵行平滑肌后,L-半胱氨酸半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect, EC50)相比对照组显著下降(P 0.05);而L-半胱氨酸对结肠环形肌收缩具有抑制和促进双重调节作用,AOAA和PAG预处理可阻断其对环形肌的兴奋作用;H_2S外源性供体Na HS在低浓度时促进平滑肌细胞L型钙通道开放(P 0.01),而在高浓度时抑制L型钙通道电流(ICa,L)(P 0.05);与Na HS不同,L-半胱氨酸浓度依赖性抑制ICa,L (P 0.01);Na HS抑制大电导钙激活钾电流(IBKCa),而L-半胱氨酸对IBKCa无明显作用。以上结果提示,L-半胱氨酸对大鼠结肠平滑肌收缩具有潜在双重调节作用,其中抑制作用由L型钙通道介导,而促进作用可能是由内源性生成的H_2S介导。     

瞬时感受器电位A1通道参与冷刺激引起的离体大鼠结肠平滑肌收缩(英文)

瞬时感受器电位A1(transient receptor potential A1,TRPA1)通道是一种可以被伤害性冷刺激激活的TRP家族离子通道。本研究的目的是探讨TRPA1通道是否参与冷刺激引起的大鼠结肠平滑肌收缩及其可能的机制。分离雄性Wistar大鼠升结肠和降结肠的平滑肌,制备成肌条,灌流不同温度Krebs液给予冷刺激,然后17°C冷刺激条件下用不同药物灌流,用张力换能器记录张力变化。逆转录PCR(RT-PCR)检测上述平滑肌中TRPA1、TRPM8和TRPV1的mRNA表达。结果显示,在大鼠升结肠和降结肠的平滑肌层有TRPA1的表达,但无TRPM8和TRPV1的表达。肌张力研究显示,不同温度(32、25、17、12°C)的冷刺激可以引起大鼠升结肠和降结肠纵行平滑肌的收缩,并且收缩张力随着温度降低而增强,17°C冷刺激可引起最大收缩(P0.01)。TRPA1的阻断剂钌红(30μmol/L)可以抑制冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.05)。TRPA1激动剂异硫氰酸烯丙酯(AITC,300μmol/L)和桂皮醛(CA,1mmol/L)预处理肌条后,可降低或几乎取消冷刺激引起的升结肠(P0.01,P0.05)和降结肠(均P0.001)平滑肌的收缩。去除细胞外Ca2+(EGTA,1mmol/L)、PLC阻断剂U73122(10μmol/L)、IP3受体阻断剂2-APB(30μmol/L)均可抑制17°C冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.001,P0.05,P0.001)。阿托品(1μmol/L)则对17oC冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩均无影响。L-型钙通道阻断剂硝苯地平(1μmol/L)和神经毒素河豚毒素(2μmol/L)可抑制降结肠平滑肌的收缩(P0.01,P0.05),而对升结肠没有作用。综上所述,TRPA1通道参与冷刺激引起的大鼠升结肠和降结肠平滑肌的收缩,其胞内信号转导机制可能涉及PLC/IP3/Ca2+途径的激活。另外,L-型钙通道和非M受体介导的神经机制部分参与冷刺激引起的降结肠平滑肌收缩,这可能是降结肠收缩张力大于升结肠的原因。     

内源性硫化氢对慢性应激结肠高动力的影响

本文旨在探讨内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)与慢性应激大鼠结肠高动力的关系。大鼠随机分为慢性避水应激(water avoidance stress,WAS)组和假避水应激(sham water avoidance stress,SWAS)组,记录大鼠每日1 h应激期间大便粒数,连续10 d;分别制作结肠平滑肌条,使用生物机能实验系统记录两组肌条自发性收缩活性以及SWAS组H2S合成酶抑制剂预处理后收缩活性;测定结肠内源性H2S的产生浓度;采用免疫组化和Western blot等方法观察结肠内源性H2S合成酶分布及表达。结果显示,WAS组大鼠应激期间大便粒数、结肠肌条收缩的曲线下面积(area under the curve,AUC)均高于SWAS组(P0.05);WAS组结肠内源性H2S产生量明显低于SWAS组(P0.001);H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)在纵行肌条和环形肌条细胞浆、肌间神经元细胞核中强表达,胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)主要表达于肌间神经元胞浆;与SWAS组相比,WAS组大鼠结肠(去除粘膜及粘膜下层后)CBS和CSE的表达下调(P0.001);H2S合成酶抑制剂明显增加SWAS组肌条收缩的AUC(P0.001)。以上结果表明,内源性H2S合成酶表达下调、H2S合成减少是慢性应激结肠高动力的原因之一。     

嘌呤拟似物对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩及电活动的影响

为探讨非肾上腺素能非胆碱能神经递质对胃窦环行肌功能的调节作用,在离体胃平滑肌上观察了嘌呤拟似物对胃窦环行肌自发性收缩活动和电活动的影响。电活动用传统的细胞内微电极记录,并和收缩活动同步描记于多道生理记录仪。结果表明,嘌呤能P2Y受体激动剂,三磷酸腺苷(ATP)和2-methylthio ATP(2-MeSATP)均增强胃窦平滑肌的收缩活动,但不影响电活动,而且ATP和2-MeSATP对胃平滑肌收缩活动的增强作用可被嘌呤能P2Y受体阻断剂,reactive blue-2和苏拉明(suramin)所阻断。用100μmol／L α,β-MeATP引起的脱敏感使P2X受体被阻断,ATP增强胃窦平滑肌收缩活动的效应不受影响。嘌呤能P2X受体激动剂,α,β-MeATP明显抑制胃窦环行肌自发性收缩活动,同时使膜电位明显超极化。ATP对胃窦平滑肌的收缩作用不被L型钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)阻断,但细胞外用无钙液灌流时这种效应则完全被阻断。用前列腺素合成抑制剂消炎痛预先处理20min后,ATP和2-MeSATP仍能增强胃窦平滑肌的自发性收缩活动。以上结果提示：(1)ATP和2-MeSATP通过嘌呤能P2Y受体增强胃窦平滑肌的自发性收缩活动,而α,β-MeATP或β,γ-MeATP通过嘌呤能P2X受体使膜电位超极化,引起胃窦平滑肌的舒张;(2)ATP和2-MeSATP增强胃窦平滑肌自发性收缩活动的效应依赖于细胞外钙,但钙离子进入细胞的途径并不是电压依赖性钙通道;(3)ATP和2-MeSATP增强胃窦平滑肌自发性收缩活动的效应不通过前列腺素介导。     

自发性高血压大鼠和Wistar大鼠脑动脉平滑肌细胞膜电流的比较

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)和Wistar大鼠脑动脉(BA)平滑肌细胞膜电流的异同。方法:应用全细胞膜片钳技术研究SHR和Wistar大鼠BA平滑肌细胞在电流密度、电流组成以及自发性瞬时外向K+电流(STOCs)特性的异同。结果:①当指令电压为0、+20、+40和+60mV时,SHR与Wistar大鼠BA平滑肌细胞间电流密度存在统计学差异(P<0.01)。②SHR与Wistar大鼠BA平滑肌细胞膜电流都对1 mmol/L电压依赖的K+通道(Kv)阻断剂4AP和1 mmol/L大电导Ca2+激活K+通道(BKCa)阻断剂TEA敏感。③SHR的STOCs发放频率和电流幅度都远大于Wistar大鼠。1 mmol/LTEA基本完全阻断STOCs通道电流,而4-AP对STOCs没有影响。结论:SHR和Wistar大鼠脑动脉平滑肌细胞的电流密度存在差异,两种平滑肌细胞外向电流都由BKCa和Kv通道组成。SHR大鼠平滑肌细胞更易诱发由BKCa通道介导的STOCs。     

大黄素对大鼠离体空肠平滑肌收缩的影响

目的：观察大黄素（emodin）对大鼠离体空肠平滑肌收缩功能的影响,并探讨其作用机制。方法：大鼠离体空肠标本随机分为7组（n=6）：对照组,大黄素剂量组（1,5,10,20μmol／L）,普萘洛尔（PRO）加大黄素组,格列苯脲（GLI）加大黄素组,NG-基-L厂精氨酸甲酯（1．NAME）加大黄素组,无钙K-H液对照组及无钙K-H液大黄素组。采用颈椎离断法处死大鼠并分离其空肠,将肠段标本与张力换能器相连并置于氧饱和的K-H液中。采用BL-420E＋生物信号采集处理系统记录大鼠空肠平滑肌的收缩张力（TE）,幅度（AM）和频率（FR）的影响。结果：①大黄素能使大鼠离体空肠平滑肌的收缩张力和幅度明显下降,且呈剂量依赖性（P〈0．05,P〈0．01）;对频率无明显影响。②普萘洛尔（P〈0．05）、格列苯脲（P〈0．01）可部分阻断大黄素对空肠平滑肌的抑制作用。③L．NAME对大黄素所引起的空肠平滑肌的抑制作用无影响。④氯化钙所引起的空肠平滑肌收缩可被大黄素所抑制（P〈0．01）。结论：大黄素能明显减弱大鼠离体空肠平滑肌的收缩张力和收缩幅度,对收缩频率无影响。这种作用可能是通过兴奋肾上腺素8受体、兴奋ATP敏感钾通道、阻断细胞膜上钙离子通道实现。     

膀胱平滑肌细胞自发性钙活动传递的在体观察和分析

目的:观察离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞自发性钙活动,并分析平滑肌细胞自发性钙活动的特征.方法:制作离体膀胱肌条铺片,Physiological saline生理液灌流保持肌条铺片活性.待肌条自发性收缩活动出现后,Fluo-4负载肌条铺片激光扫描共聚焦显微镜观察并高速扫描记录平滑肌细胞自发性钙活动,随后利用Fluoview软件分析平滑肌细胞自发性钙活动肌束内纵向、横向及肌束间的传递情况.结果:成功记录到离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞的节律性自发性钙活动.钙活动在肌束内纵向传递几乎无时间延迟,但在肌束内横向传递有一定的时间延迟;在相邻的膀胱平滑肌束间也记录到钙活动的传递.结论:平滑肌细胞的自发性钙活动起源于肌束的一侧,随后传导到肌束的另一侧;平滑肌细胞钙活动纵向传递和横向传递的途径和机制可能不同;膀胱平滑肌束之间的钙活动传递可能是通过ICCs细胞完成.     

白细胞介素-2对心肌负性肌力作用机制的探讨

为研究白细胞介素-2（IL-2）对心肌的负性肌力作用的可能机制,本采用酶解分离成年大鼠心室肌细胞,用细胞内双波长荧光系统和膜片钳全细胞记录检测细胞膜钙离子通道和细胞内酸碱度（pHi）及钙水平的变化,分别以fura-2/AM和BCECF/AM作为细胞内钙离子和氢离子荧光指示剂。结果：（1）IL-2(2.5-200U/ml）浓度依赖性地降低单个心室肌细胞电刺激诱导的钙瞬变幅度,使舒张末钙水平升高,选择性κ-阿片受体阻断剂nor-BNI(10nmol/L）可阻断IL-2对心肌细胞内钙的作用;（2）用200U/ml的IL-2灌流10min后,与对照组相比膜片钳全细胞记录的L-型钙电流无明显改变;（3）用200U/ml的IL-2灌流后,与对照组相比Mn^2 对fura-2/AM的淬灭率无明显改变。（4）IL-2(200U/ml）使大鼠心室肌细胞pHi降低,其作用可被选择性κ-阿片受体阻断剂nor-BNI(10nmol/L）所减弱。结论：IL-2引起的心室肌细胞pHi降低可能是其负性肌力作用机制之一,细胞膜上L-型钙离子通道可能不参与IL-2降低心肌收缩力的作用;细胞膜上的阿片受体可能介导IL-2对心肌的负性肌力作用。     

大黄素增加BK_(Ca)通道β_1亚基表达介导自发性高血压大鼠脑基底动脉舒张

本文旨在研究大黄素干预后自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)脑基底动脉平滑肌细胞BKCa通道电生理特性和表达的变化。在使用大黄素干预处理前后,用尾动脉测压仪观察血压变化,用全细胞膜片钳记录技术观察SHR脑基底动脉平滑肌细胞BKCa通道电流的变化,用免疫组织化学染色和Western Blot观察平滑肌细胞BKCa通道表达变化。结果显示,大黄素干预后,SHR血压由(223±16)mmHg显著降低至(127±12)mmHg(P0.01),与Wistar大鼠相比没有统计学差异。大黄素显著增加SHR平滑肌细胞外向电流(P0.05),该增强作用可被BKCa通道特异性阻断剂IbTX所阻断。大黄素干预后SHR基底动脉平滑肌BKCa通道β1亚基表达明显上调(P0.01)。以上结果提示,大黄素可能通过增加BKCa通道β1亚基表达,增强BKCa通道介导的外向电流,从而发挥舒张SHR脑基底动脉的作用。     

钾通道在大鼠支气管平滑肌张力调控中作用的研究

目的：探讨延迟整流钾通道（Kv),高电导钙激活钾通道（BKCa)和ATP敏感钾通道（KATP)在大鼠支气管平滑肌张力调控中的作用。方法：以特异性钾通道阻断剂为工具,采用体外等长张力测定观察钾通道对静息和收缩状态下支气管张力的影响。结果：（1）KV阻断剂4－aminopyridine(4-AP)诱发大鼠支气管平滑肌产生浓度依赖性收缩反应,而BKCa阻断剂tetraethylammonium(TEA)和KATP阻断剂glibenclamide(Glib)对其无影响。（2）去除上皮对4－AP诱发大鼠支气管平滑肌收缩反应无影响,而钙通道阻断剂nifedipine对其有显著抑制效应。（3）在0.1mmol/L组胺或50mmol/L KCl诱发支气管平滑肌收缩之前或之后,加入TEA（1,5mmol/L)或0.1mmol/L 4-AP均显著增强二者诱发的收缩反应;而Glib(10μmol/L）对其无明显影响。结论：Kv参与大鼠支气管平滑肌静息张力的调控,而BKCa和KATP对其无影响。Kv和BKCa的关闭增强组胺及高浓度钾离子诱发大鼠离体支气管产生的收缩张力。     

辣椒素和厄贝沙坦对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

探讨辣椒素和厄贝沙坦对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响。体外构建自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞系,采用免疫荧光法鉴定后,分别用20μmol/L辣椒素(高剂量组)、10μmol/L辣椒素(中剂量组)、5μmol/L辣椒素(低剂量组)和1μmol/L厄沙贝坦直接处理细胞或特异性阻断CD36的表达后,再分别用20、10、5μmol/L辣椒素及1μmol/L厄贝沙坦处理,采用qRT-PCR和Western Blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)mRNA和蛋白水平变化,流式细胞术检测CD36的表达。与对照组相比,辣椒素组和厄贝沙坦组OPN和CD36表达均有所下调,α-SMA表达均有所上调;阻断CD36表达后,辣椒素组和厄贝沙坦组OPN表达均有所下调,α-SMA表达均有所上调;与阻断前相比,阻断后厄贝沙坦组和辣椒素组OPN表达均有所下调,α-SMA表达均有所上调。辣椒素和厄贝沙坦均能够通过上调α-SMA的表达,下调OPN的表达,抑制CD36的表达,来促进自发性高血压大鼠VSMCs由合成表型向收缩表型转化,从而促进其动脉管壁恢复正常的生理功能,有助于降低自发性高血压大鼠的血压。     

IgG型浆细胞在溃疡性结肠炎小鼠蛋白C系统变化中的作用

本文旨在探讨IgG型浆细胞在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠蛋白C系统(protein C system,PCS)变化中的作用。利用4%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)模拟小鼠UC,免疫荧光法观察结肠组织黏膜固有层浆细胞及免疫复合物IgA/M/G的类型,分离小鼠结肠组织黏膜固有层细胞,用抗CD38~+、CD54~+抗体双标、流式细胞术检测浆细胞数量,以抗IgA/M/G抗体标记,流式细胞术检测浆细胞类型;模拟IgG型免疫复合物刺激分离培养的巨噬细胞,ELISA法检测上清中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的变化;流式细胞术检测TNF-α、IL-6对结肠黏膜微血管内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)、血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达的影响,发色底物法检测TNF-α、IL-6对微血管内皮细胞激活的蛋白C(activated protein C,APC)活性的影响。结果显示:与对照组相比,DSS组小鼠结肠组织大量IgG型浆细胞浸润(P0.05),黏膜固有层IgG型免疫复合物水平显著升高;分离培养的巨噬细胞与模拟IgG型免疫复合物共孵育后,上清中炎性细胞因子TNF-α和IL-6明显增高(P0.01);同时TNF-α或IL-6与小鼠结肠黏膜微血管内皮细胞共孵育后,内皮细胞表达EPCR、TM的能力均有所降低(P0.05或P0.01),其APC活性明显降低(P0.05或P0.01)。以上结果提示,UC时IgG型浆细胞数量增加,并通过形成免疫复合物,从而影响巨噬细胞分泌促炎细胞因子,进而影响血管内皮细胞功能,抑制PCS。浆细胞有望成为治疗UC的新靶点。     

库容性Ca2+内流参与ACh诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩

应用生物换能技术和Ca^2＋通道特异性阻断剂观察并记录大鼠离体远端结肠平滑肌收缩张力的变化,分析库容性Ca^2＋内流（capacitative Ca^2＋ entry,CCE）是否与ACh诱导的离体远端结肠平滑肌收缩反应有关。结果表明,以无钙的Krebs液灌流或应用EGTA螯合细胞外Ca^2＋后,高K^＋及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩几乎完全消失。电压操纵性Ca^2＋通道阻断剂verapamil也能减弱高K^＋及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩,其减弱的程度分别为74％和41％。在无钙的Krebs液中,5μmol／LACh可引起离体肠管瞬时性收缩,这是由肌质网（sarcoplasmic reticulum,SR）释放钙所致：然后加入10μmol／L阿托品（atropine）,并在此基础上恢复细胞外Ca^2＋（2．5mmol／L）,结肠平滑肌则出现持续性收缩,待收缩反应达峰值时,加入5μmol／L verapamil,收缩无明显变化,且该收缩反应对钙库操纵性通道（store-operated Ca^2＋ channel,socc）阻断剂La^3＋敏感,20,50和100μmol／L的La^3＋使上述收缩张力分别降低15％,23％和36％,且呈浓度依赖性,但对Cd^2＋不敏感。研究结果提示,细胞外Ca^2＋内流对高K^＋及ACh介导的离体远端结肠平滑肌持续性收缩是必需的,由ACh诱导的远端结肠平滑肌收缩至少包括SR释放钙引起的短暂性收缩及受体操纵性Ca^2＋通道（receptor-operated Ca^2＋ channel,ROCC）、电压操纵性Ca^2＋通道（voltage-operated Ca^2＋ channel,VOCC）和CCE介导的胞外Ca^2＋ 内流等途径。这将从通道水平进一步分析消化管平滑肌收缩的机制和特征,亦将为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病寻求有针对性的药物干预和治疗提供理论依据。     

钙激活性氯离子通道的电生理研究

目的:研究大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道的电流、电压电流关系等电生理特性.方法:采用急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶)分离出单个肺动脉平滑肌细胞,应用膜片钳技术,测定各组大鼠肺动脉平滑肌细胞上钙激活性氯离子通道电流和电压电流.结果:急性酶分离法能成功分离出适用于膜片钳记录的单个大鼠肺动脉平滑肌细胞,并测到稳定的钙激活性氯离子通道电流,该电流表现出时间、电压及钙离子依赖性,并呈外向整流特征.结论:大鼠肺动脉平滑肌细胞的钙激活氯离子通道具有时间依赖性、钙离子依赖性和电压依赖性,并具有外向整流特征.     

β3肾上腺素受体介导多巴胺对大鼠远端结肠运动的抑制作用

目的研究多巴胺（DA）对大鼠结肠运动影响的机制。方法采用离体组织灌流方法记录大鼠远端结肠自发性节律运动,观察DA的作用以及阻断剂的影响,再用反转录实时多聚酶链反应（real time RT-PCR）检测受体基因的表达。结果DA（≥1.0×10-5mol/L）对结肠远端（紧接肛门淋巴结近端）离体纵行肌条（2.0 mm×10 mm）的运动具有抑制作用,多巴胺受体阻断剂（D1受体阻断剂SCH23390,1.0×10-7mol/L,D2受体阻断剂Sulpide,1.0×10-7mol/L）不能阻断多巴胺的抑制效应,但加入β3受体抑制剂cyanopindolol（7.5×10-7mol/L）,DA的抑制作用显著减弱。real time RT-PCR检测发现β1、β2、β3受体mRNA在远端结肠均有表达。结论DA可通过β3受体发挥对远端结肠运动的抑制作用。     

钙离子激动钾通道在大鼠逼尿肌不稳定膀胱中的表达及变化

目的:探讨钙离子激动钾通道与逼尿肌功能变化之间的关系.方法:根据膀胱压力容积测定结果将动物分为稳定组(29只)和不稳定组(9只),其中稳定组分为BOO(11只)、SCI模型(9只)和时照组(9只),通过RT-PCR技术测定逼尿肌中各型钙离子激动钾通道表达及变化.结果:正常大鼠中逼尿肌不稳定发生率为24.3%.钙离子激动钾通道BKCa和SKCa亚型在各组模型大鼠逼尿肌中均有表达.钙离子激动钾通道BKCa亚型在IDI组、BOO和SCI组逼尿肌中的表达低于正常对照组.结论:钙离子激动钾通道的表达异常引起平滑肌细胞静息电位降低、兴奋性增高可能是引起逼尿肌不稳定的原因之一.     

重症急性胰腺炎患者血清IL-6水平与内毒素移位及肠黏膜紧密连接蛋白表达关系的研究(英文)

目的:大量研究表明重症急性胰腺炎(SAP)患者血清中高浓度IL-6和肠黏膜低表达的紧密连接蛋白可促进内毒素移位的发生。本文主要研究重症胰腺炎患者血清IL-6水平对内毒素移位和肠黏膜紧密连接蛋白表达的影响。方法:50例重症胰腺炎患者,其中12例在患病早期因结肠受累合并腹胀,对12例结肠受累患者应用结肠镜行结肠灌洗进行腹腔减压,同时取结肠黏膜进行活组织检查。所有病人在治疗的第3天,第7天,第10天,第14天抽取外周静脉血。40例健康志愿者作为对照组。应用ELISA方法检测血清IL-6水平,鲎试验(LAL)方法检测血清内毒素含量,应用免疫荧光和Western blotting方法检测肠黏膜紧密连接蛋白表达水平。结果:SAP患者血清IL-6和内毒素含量明显高于健康对照组,而结肠黏膜紧密连接蛋白表达低于对照组;在临床治疗过程中,早期SAP患者血清IL-6和内毒素水平高于晚期(P值均0.05)。SAP早期血清高浓度的IL-6与结肠黏膜紧密连接蛋白的低表达具有相关性,差异有统计学意义(r=0.735,P0.05)。结论:血清IL-6水平可作为早期评价重症急性胰腺炎严重程度的一项指标,IL-6水平与重症急性胰腺炎临床病程有相关性,可能导致肠道内毒素移位。     

铁对血管收缩活动的影响及其机制

动脉粥样硬化的发生和铁引起的氧化应激密切相关。铁对血管的直接效应及其对血管收缩功能的影响尚不明确。本文采用血管环灌流装置 ,观察铁对离体SD大鼠去内皮胸主动脉环的直接效应 ,及对去内皮主动脉环KCl和苯肾上腺素 (PE)引发的收缩效应的影响。结果显示 :( 1) 10 0 μmol/L枸橼酸铁 (FAC)引起大鼠血管环发生相位性收缩 ,最大收缩幅度可达KCl诱发的最大收缩的 2 4 0 2± 2 3 7%。当 [Ca2 +]o 增加 1倍时 ,铁所致的血管环收缩幅度明显增加 (P <0 0 1)。阻断L 型钙通道后 ,铁所致的血管环收缩幅度明显降低 (P <0 0 1)。在无钙液中 ,用佛波酯收缩血管环 ,待收缩稳定后给予FAC ,此时收缩幅度增加 49 18± 3 75 %。 ( 2 )铁孵育 3 0min后 ,KCl引起血管环收缩的幅度显著降低 (P <0 0 1)。铁孵育可使PE引起的收缩量 -效曲线右移 (P <0 0 5 )。 ( 3 )二甲基亚砜、过氧化氢酶和谷胱甘肽可明显降低铁对PE血管收缩反应的抑制作用 (P <0 0 5 )。从这些结果可得到以下结论 :铁可引起胸主动脉发生相位性收缩 ,其机制可能与L 型钙通道短暂开放导致钙离子内流 ,及平滑肌对钙的敏感性增加有关 ;较长时间与铁孵育后 ,可对血管收缩功能产生损伤 ,氧自由基的生成增加和细胞内GSH的水平降低可能参与铁对收缩功能的     

有氧运动通过AMPKα调控高血压肠系膜动脉平滑肌Ca_L通道功能

腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)被称为细胞能量代谢调节器,其α亚基主要起催化作用,同时也是大鼠血管壁细胞的主要激酶形式。除能量代谢外,AMPKα还可参与调控高血压的发生和发展,但其具体的作用机制尚不完全清楚。本研究拟以自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)肠系膜动脉为研究对象,探究AMPKα对肠系膜动脉舒张功能的影响,并阐述其作用机制。选取12周龄雄性正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)和SHR,将其随机分为安静对照组(WKY-SED,SHR-SED)和有氧运动组(WKY-EX,SHR-EX)。有氧运动组进行为期12周的中等强度跑台运动。测定各组大鼠实验前后体重、血压,随后通过微血管张力技术、膜片钳技术、Western印迹分别测定AMPKα对血管张力的影响,AMPKα与L型电压依赖性钙离子通道(voltage-dependent L-type Ca~(2+) channel,Ca_L)的关系,以及p-AMPKα和AMPKα的表达水平。结果显示,有氧运动后,高血压大鼠体重、血压均显著降低(P0.05);微血管张力技术测定结果表明,AMPKα特异性激动剂PT1可诱使各组血管舒张。其中,SHR-SED组舒张程度显著高于WKY-SED(P0.05)。与SHR-SED组相比,SHR-EX组血管舒张程度显著降低(P0.05),与WKY-SED组相比,WKY-EX组舒张程度显著增加(P0.05)。进一步对AMPKα的作用机制进行探究发现:PT1可抑制Ca_L通道电流,其中,SHR-SED组Ca_L通道电流降低幅度显著高于WKY-SED组(P0.05),12周有氧运动后,SHR-EX组电流幅值降低幅度显著减小(P0.05),WKY-SED组与WKY-EX间无显著性差异(P0.05);Western印迹结果显示,SHR-SED组p-AMPKα表达显著减少(P0.05)。12周干预后,WKY-EX、SHR-EX组p-AMPKα表达均显著增加(P0.05),但各组间AMPKα表达无显著差异(P0.05)。其总的结果表明,有氧运动通过激活AMPKα抑制高血压肠系膜动脉平滑肌细胞Ca_L通道功能,从而改善高血压阻力动脉的舒张功能,降低血压。     

口服sST2质粒DNA在炎症性肠病小鼠中的免疫水平

目的制备口服可溶性ST2(Soluble ST2,sST2)质粒,观察其对于小鼠炎症性结肠黏膜免疫应答水平。方法提取小鼠脾脏总RNA,扩增sST2基因,并克隆至pcDNA3.1/myc-His A载体,构建pcDNA3.1-sST2-myc-His A质粒,借此转染COS-7细胞,使之表达sST2-myc-His A融合蛋白。利用脂质体LipofectamineTM2000包裹,制备口服sST2质粒,经灌胃给予用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱生溃疡性结肠炎的C57BL/6实验小鼠,并用组织病理学方法观察结肠黏膜组织形态变化。用Real-time PCR检测sST2基因表达,用免疫印迹检测sST2质粒融合蛋白的表达;用ELISA检测小鼠肠固有层淋巴细胞培养上清中细胞因子(IL-4、IL-5和IL-13)的分泌水平。结果Real-time PCR检测到sST2基因的正确表达,经双酶切及测序鉴定,证明质粒pcDNA3.1-sST2-myc-His A构建成功,免疫印迹试验在转染的COS-7细胞检测到sST2-myc-His A融合蛋白的表达,其相对分子质量与预期的相符;观察到结肠黏膜组织形态发生的变化;Real-time PCR结果显示,sST2质粒组在结肠黏膜组织内sST2的表达水平明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P0.01);ELISA结果显示sST2质粒组结肠固有层淋巴细胞培养上清中IL-4、IL-5和IL-13的分泌水平高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P0.05)。结论实验成功制备口服sST2质粒;该质粒可抑制小鼠炎症性结肠黏膜组织内Th2型免疫应答。