大熊猫精液超低温冷冻的比较

对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的9只雄性大熊猫电刺激采精,比较研究了稀释液中甘油含量、精液离心、不同稀释液和冷冻方法对大熊猫精液超低温冷冻保存后的活力、运动状态和顶体的影响。稀释液中甘油的含量为4％－5％较好,冻精解冻后的活力和顶体的正常率能保持鲜精的一半。离心和未离心的精液经超低温冷冻,解冻后的活力和运动状态都较接近。TEST和SFS两种稀释液的效果没有明显的差异。细管的冷冻过程较颗粒方便、快捷,时间容易控制,是一种较好的超低温冷冻精液的方法。     

秦岭大熊猫精液的细管冷冻保存

2008年3月1日至4月27日和2009年3月3日至5月1日,在陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心对处于繁殖期内的4只雄性秦岭大熊猫(Ailuropoda melanoleuca qinlingensis)精液进行了细管冻精实验。比较组成不同的4种稀释液:葡萄糖-果糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液1)、葡萄糖-蔗糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液2)、葡萄糖-柠檬酸三钠-卵黄-甘油-双抗(稀释液3)和美国进口的TEST(加入3.5%甘油),以及直接降温平衡法(方法 1)与逐级降温平衡法(方法 2)2种冷冻保存操作方法,对秦岭大熊猫精液进行细管冷冻保存后精子活力和顶体完整率的影响。结果表明:稀释液1的精子活力为46.25%±11.67%,顶体完整率为80.75%±7.89%,TEST的精子活力为48.75%±8.54%,顶体完整率为84.50%±7.59%,两者的精子活力和顶体完整率均无明显差异(P0.05),但是都明显高于稀释液2(P﹤0.01)和稀释液3(P﹤0.01);采用方法 1冷冻保存秦岭大熊猫精液,解冻后精子的活力和顶体完整率分别为45.67%±10.54%和81.37%±8.42%,都显著高于方法 2(P﹤0.01);方法 1解冻后畸形率为23.50%±3.51%,明显低于方法 2(P﹤0.01)。经比较确定,方法 1(用稀释液1)是一种较好的细管冷冻保存秦岭大熊猫精液的方法。     

猪精液冷冻影响因素的研究进展

由于在经济生产中的重要意义,猪精液冷冻保存技术已成为研究的焦点。文章综述了国内外猪精液冷冻技术的研究成果,主要阐述精液的冷冻保存原理,并从冷冻稀释液和冷冻保护剂、冷冻方法和解冻方法等方面阐述了猪精液冷冻的影响因素。     

猪精液冷冻损伤机理研究进展

阐明降温-升温过程精子损伤的原因是目前冷冻生物学的研究热点之一。借助分子生物学手段,猪精子冷冻损伤研究已深入到分子水平,对在冷冻过程中的损伤机理研究方面取得很大突破。在参考国内外文献的基础上,综述了猪精液冷冻损伤机理在近几年来的研究进展。     

白鹤冷冻精液人工授精实验

为了探索鹤类精液冷冻保存和使用技术,2003～2005年,进行了白鹤(Grus leucogeranus)的冷冻精液保存及人工授精实验。使用Beltsville家禽精液稀释液作为白鹤精液稀释液,12%的二甲基亚砜(DMSO)为冷冻液。精液样本冷冻经过三个阶段的降温,最后保存在液氮中。成功保存了编号93001雄性白鹤精液36 支（0.2 ml/支）。冷冻精液在0~4℃冰水中解冻3~5 min,解冻后白鹤精液精子活率为29.3%±15.5%（n=16）,2004和2005年分别为92101号雌鹤产的两窝卵进行人工授精实验,2年共产卵5枚,其中1枚卵受精并成功孵化。实验发现在雌鹤产卵前一周和产卵期间每天输精,并增加每次输精量,同时在产完1枚卵后4 h内完成一次输精,效果最佳。     

激光辐射奶牛冷冻精液对精子诱变效应的研究

为了探索激光辐射精子的诱变效应,本试验采用ＴＳＴ（Ｔｒｉｐｌｅ Ｓｔａｉｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ,即精子三重染色法）、ＳＰＡ（Ｓｐｅｒｍ Ｐｅｎｅｔｒａｉｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ,即精子穿透分析法和ＣＡＳ（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ,即精子单倍染色体制备技术）,三项有关精子的现代分析技术,对激光辐射精子的受精学、遗传学效应进行了研究。结果表明：Ｈｅ－Ｎｅ激     

藏酋猴精液深低温冻存的研究──不同的冷冻程序、冷冻稀释保存液冻存效果的比较

以存活率（ＳＲ）、复苏运动度（ＲＭ）、ＳＰＡ为精子活力检测指标，对四种冷冻程序ＰＳＦ、Ｈ３Ｐ、ＬＰ、ＭＤＰ和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴（Ｍａｃａｃａ ｔｈｉｂｅｔａｎａ）精液冻存比较研究。 ＰＳＦ的ＳＲ为９０．１±１．９％，ＲＭ为６３．８±２．８％，显著高于其他三种冷冻程序（Ｐ＜０．０１）。卵黄冷冻稀释保存液（ＭＤＭ）的ＳＲ（９５． ４±１．３％）和ＲＭ（８８．０±１０．２％）显著高于无卵黄防冻液（ＦＣＳ－Ｇ／ＴＨ）的ＳＲ（９０．１±１．９％）和ＲＭ（６３．６±２．８％），但前者在复苏一小时后，ＲＭ（１２．５±１．６％）明显低于后者的ＲＭ（５４． ７±２． ２％）。用 ＦＣＳ～Ｇ／ＴＨ冻存的精液经 ＳＰＡ检测，其穿透率为新鲜精子的 ５１． ９％。结果提示：１）慢速降温冷冻程序适于藏酋猴精液冻存；２）卵黄冷冻稀释保存液能较好地保存藏酋猴精液的活动度；而无卵黄防冻液则有利于延长其冷冻精子的运动寿命。这可能与两者的稀释液及所含的脂蛋白不同有关。     

圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用

在过去34年的圈养大熊猫种群保护工作中,我们成功建立了全球最大的大熊猫精子库,目前已保存50只大熊猫个体总计7 000余支细管冷冻精液(冻精)。冷冻精液一方面可以使物种的遗传资源得到长久保存,另一方面可以通过人工授精的方式促进种群繁育。但是,圈养大熊猫冷冻精液对其种群遗传多样性的作用尚未有明确报道。本研究首先根据成都大熊猫繁育研究基地2000—2014年冷冻精液人工授精数据,对比分析了冻精人工授精个体和圈养种群的遗传多样性。结果显示,冻精人工授精个体遗传多样性均高于同年圈养种群的平均遗传多样性,表明在繁殖年份中冻精人工授精可以显著提高圈养大熊猫种群的遗传多样性。统计精子库中所有冻精个体的平均血缘系数并与圈养种群进行对比分析,探究冷冻精液对圈养种群遗传多样性的潜在作用。结果显示,精子库中有21只已死亡个体的精液,其中有66.67%的个体平均血缘系数低于圈养种群;有14只20岁以上个体的精液,其中有50.00%的个体平均血缘系数低于圈养种群;另有15只20岁以下个体的精液,其中有53.33%的个体平均血缘系数低于圈养种群,表明冷冻精液对圈养种群遗传多样性的保护具有重要价值。综上所述,冷冻精液不但有效保存了大熊猫遗传资源,而且在保护圈养种群遗传多样性方面具有积极的促进作用。     

平衡时间、冷冻方法及解冻程序对马精液冷冻效果的影响

精液平衡、冷冻及解冻是冻精制作过程中三个必不可少的环节,对精液冷冻效果起着决定性作用。在马(Equus caballus)精子冷冻中针对这三个过程的研究较少,为进一步优化马精液冷冻方法,提高精液冻后质量,本研究比较不同平衡时间、冷冻方法及解冻程序对冻融后精子运动参数、质膜完整性及线粒体膜电势的影响。平衡120 min、180 min和240 min组冻融后精液活力及质膜完整性明显高于平衡0 min、45 min、90 min及8 h平衡组;距离液氮面2 cm和4 cm高度熏蒸冷冻获得了与程序冷冻仪冷冻法相似的冷冻效果;采用高温瞬时解冻法(75℃7 s和46℃20 s)比常规方法(37℃30 s)获得了更高的冻后精液活力(P0.05)。综合上述结果,在马精液冷冻过程中综合采用120~240 min平衡,距离液氮面2~4 cm熏蒸法和高温瞬时解冻法(75℃7s和46℃20 s)可获得更好的精液冷冻效果。     

应用生殖免疫方法制作性别化冷冻精液对奶牛性别控制的研究

本实验在种公牛站精液生产过程中应用生殖免疫技术方法 ,制作性别化冷冻精液 ,结合人工授精技术进行奶牛性别控制的研究实验。根据精子DNA含量存在的差异 ,利用荧光染料与精子DNA结合 ,通过蔗糖溶液密度梯度离心法 ,分离出和鉴别出牛精液中的X与Y精子作为抗原。经与小鼠免疫后 ,制成H Y抗血清IgG ,再经酶联免疫吸附法 (ELISA)析测表明 ,获得了具有一定纯度和工作效价的阳性抗Y精子的H Y抗血清IgG ,H Y抗血清对性别化精液冷冻前 ,解冻后活力的影响与对照组无显著差异。配种受胎试验结果表明 ,性别化冷冻精液在获得与正常冷冻精液相似的情期受胎率的同时 ,对后代性别比率有显著影响 ,奶牛产母犊率可达 60 7% ,比自然产母犊性比率理论值提高 1 0 7个百分点 (P <0 0 5 )。     

Effect of Timing of Frozen Semen Insemination on Pregnancy Rate in Mares

Thirty-four mares were inseminated with frozen semen from one stallion during 2 oestrous cycles, every 48 h until ovulation took place and within 12 h after ovulation. Semen was frozen using the Colorado method. The insemination dose was from 200 to 400×106 progressively motile spermatozoa. Ovaries were examined every 12 h to determine time of ovulation. Examination for pregnancy was carried out using ultrasonography, 15 days after ovulation. Thirty-five per cent of mares inseminated < 24 h and 23% of mares inseminated between 24 - 48 h before ovulation were pregnant (p = 0.388). The pregnancy rate in all mares inseminated before ovulation was 30%. In the mares inseminated within 12 h of ovulation, it was 18% (p = 0.253). Younger mares (aged 4-10 yr) had a higher pregnancy rate (59%) than older mares (aged 11-15 yr) (23%), but the difference was not statistically significant (p = 0.057).     

一种简单实用的猪颗粒冻精制作技术

本实验以年龄在2.5岁左右的长白种公猪的精液为材料,在比较了常用的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号猪精液冷冻稀释液和Ⅰ号、Ⅱ号解冻液及冷冻———解冻程序对猪精液的冷冻效果后,依据解冻后精子的活力、质膜完整性等指标,发现:1、Ⅱ号冷冻稀释液的稀释效果(精子活力42.5±5.2精子弯尾率44.7±3.5)和Ⅱ号解冻液的解冻效果(精子活力43.8±2.6精子弯尾率36.2±4.3)明显较好;2、根据制作经验总结,发现了一种与以往资料上介绍的完全不同的猪精液冷冻颗粒制作方法,从而筛选出了一种简单实用的猪颗粒冻精制作技术。     

Assessment of Sperm Viability by Measurement of ATP,Membrane Integrity and Motility in Frozen/Thawed Bull Semen

Control of sperm quality after commercial freezing/thawing of bull semen is still restricted to the subjective assessment of sperm motility, despite its low correlation to fertility (Söderquist et al. 1991, Kjaestad et al. 1993). Although no single in vitro method has yet been designed to predict the fertilizing ability of a given semen sample, the quantitation of viable spermatozoa (with intact plasma and acrosome membranes, and metabolically active) seems to be most promising (Woelders et al. 1991). The present report describes the use of a bioluminiscence technique to determine ATP-levels and a novel supravital stain (using fluorescent dyes) to assess the amount of viable spermatozoa in frozen/thawed semen from 3 A.I. dairy bulls with significantly different motility after thawing.     

Evaluation of Spermatological Parameters Used to Predict the Fertility of Frozen Bull Semen

Post-thaw motility, velocity and acrosome integrity of frozen semen were determined in 18 bulls with varying fertility (average non-return rates: 71.3 (± 2.8) - range: 65.2-75.7). Five semen straws were investigated from each bull. The average values for sperm motility (percentage motile spermatozoa), sperm velocity (graded from 0-3) and acrosome integrity (proportion of spermatozoa with intact acrosome) were 67.5%, 2.5 and 79.3%, respectively. Significant correlations were found between sperm motility and velocity, but not between sperm motility and acrosome integrity. Both sperm motility and velocity were significantly related to bull fertility. It was concluded that of the post-thaw semen characteristics investigated in this study these 2 parameters provided a reliable basis for prediction of bull fertility.     

菟丝子黄酮体外清除自由基活性的研究

采用DPPH体系、羟基自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系、超氧阴离子自由基体系对菟丝子黄酮的抗氧化活性进行研究,并同Vc、BHT进行了比较。结果表明:在试验质量浓度范围内(0.008 mg/mL~1 mg/mL),菟丝子黄酮对DPPH.、.OH自由基、O2-.自由基的清除率可达91.56%、89.39%和87.65%;其对烷基自由基的抑制率为84.22%,且其抗氧化活性强于Vc和BHT,表明菟丝子黄酮是一种天然有效的自由基清除剂。     

猪胚胎开放式拉长细管玻璃化冷冻保存研究

从20头供体母猪获得的291枚可用胚胎(囊胚/桑葚胚),采用二步法开放式拉长细管(OPS,openpulledstraw)玻璃化冷冻技术进行保存,即胚胎首先在冷冻液I(TCM199 20?S 10%EG 10%DMSO)中平衡3min,然后立即转入冷冻液II(TCM199 20?S 20%EG 20%DMSO 0.4mol/LSUC)中并在1min内装管,直接投入液氮保存;3个月后解冻移植给8头受体母猪,其中1头怀孕产仔(8头活仔),在我国首次获得猪胚胎超低温(-196℃)冷冻后代。