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目的:建立高效液相系统肽图分析法,用于重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(rExendin-4)的质量控制。方法:应用高效液相系统摸索最佳胰蛋白酶切和色谱条件,并采用液质联用系统分析肽段的精确相对分子量和氨基酸序列。结果:根据酶切条件摸索,确定酶切条件为:rExendin-4原液与胰蛋白酶按照质量比为100:1混匀,37℃酶切4小时,根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量及对其碰撞诱导解离质谱的解析结果,归属出肽图中各肽段所在的色谱峰,与理论值完全一致。结论:本法精确度高、重复性好、自动化程度高,能够用于rExendin-4原液肽图分析。 相似文献
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应用胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)及其类似物治疗2型糖尿病是代谢性疾病研究领域近年来的热点,尤其是胰高血糖素样肽-1独特的作用机制倍受业界的关注。它能同时作用于2型糖尿病的多个发病环节,在有效降低血糖的同时,避免低血糖的发生并能减轻体重。但这类药物因其多肽性质而存在诸多的使用限制(如需反复注射)。简要介绍一类取代环丁烷结构的新型非肽类胰高血糖素样肽-1受体小分子激动剂的发现过程、基本药理学特征和体内抗糖尿病和抗肥胖症效应。 相似文献
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本文旨在观察胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)对高糖所致新生大鼠心室肌细胞氧化应激的影响,并探讨PI3K-Akt通路在其中所起的作用。将酶消化法分离的经α-肌动蛋白免疫荧光法鉴定的原代培养72~96h的新生大鼠心室肌细胞分为5组:正常对照组、高糖组、高糖+GLP-1组、高糖+GLP-1+LY294002(PI3K-Akt通路的抑制剂)组、高渗对照组。采用硫代巴比妥酸显色法测定细胞上清液中丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,用黄嘌呤氧化酶法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,运用PCR凝胶电泳检测NADPH P47phox亚基mRNA的变化,运用荧光显微镜及流式细胞术检测心室肌细胞内的ROS含量,运用流式细胞术及DNAladder法检测心室肌细胞的凋亡,Western blot检测各组心肌细胞Akt磷酸化水平。结果显示:(1)与正常对照组相比,高糖组细胞生长状态较差,搏动频率减慢甚至消失,细胞凋亡率显著增加,DNA ladder呈现凋亡独有的梯状图谱,胞浆MDA水平增高,上清液中SOD活性下降,心肌... 相似文献
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目的:研究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)注射胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对糖尿病早期大鼠胃排空的影响,并探讨其相关作用机制。方法:60只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病组(DM组),GLP-1干预组(GLP-1组),每组各20只,后两组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,分别于注射STZ2周、6周后每组随机取半数进行实验,实验前于无菌条件下大鼠一侧下丘脑PVN区埋置套管,GLP-1组经套管注入GLP-1,NC组及DM组注入等体积生理盐水。酚红灌胃法检测胃排空率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆GLP-1浓度,半定量RT-PCR法测定胃窦、胃底GLP-1RmRNA表达。结果:注射STZ 2周后,DM组较NC组胃排空率显著升高(P〈0.01)。GLP-1组胃排空率低于DM组(P〈0.01),血浆GLP-1浓度高于DM组及NC组(P均〈0.05),胃窦GLP-1RmRNA表达明显高于DM组、NC组(P均〈0.01)。注射STZ 6周后,DM组胃排空率高于NC组(P〈0.01)。GLP-1组较DM组胃排空率显著降低(P〈0.01),血浆GLP-1浓度、胃窦GLP-1RmRNA表达显著高于DM组、NC组(P均〈0.01)。结论:下丘脑PVN区注射GLP-1后,可减慢糖尿病大鼠初期加速的胃排空,原因可能与血浆GLP-1浓度及胃窦GLP-1RmRNA表达增加有关。 相似文献
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胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)是胰高血糖素原基因转录、翻译后处理加工的33氨基酸的多肽,GLP-2经二酰肽酶Ⅳ水解后,则失去生物学活性。GLP-2作为一种肠上皮特异性生长因子,能促进正常肠黏膜的生长及损伤肠上皮的修复。GLP-2通过作用于GLP-2受体(GLP-2R)来发挥生物学作用。GLP-2R在肠道的广泛分布(肠上皮细胞、肠内在神经元、肠内分泌细胞、肠黏膜下的肌纤维母细胞),提示GLP-2可能通过直接、间接等多条途径发挥生物学作用。本文概括介绍GLP-2的特性、生理作用及机制等方面的研究进展。 相似文献
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《生物技术通报》2016,(6)
糖尿病的成因非常复杂,迄今为止,人们仍没有找到根治糖尿病的有效方法。尽管市面上销售和治疗糖尿病的化药不断涌现,但这些化药在降糖的同时,不可避免带来许多毒副作用,同时也并不能延缓一些糖尿病并发症的发展。人体自身分泌的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种小分子的多肽,长度仅有30个氨基酸,它属于葡萄糖浓度依赖型的,既可以特异性有效降低血糖浓度,又不会产生任何不良反应,加上GLP-1多重功效的发挥,使其成为II型糖尿病治疗的一个研究热点。要将GLP-1应用于临床,亟待解决它在体内的半衰期非常短的难题。因此,综述国内外对GLP-1的研究探索与应用的最新进展情况,旨在为研究人员和医务工作者在GLP-1相关药物研发上提供借鉴。 相似文献
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近年来研究表明,胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对胰岛β细胞的分化、增殖均起重要作用,包括抑制β细胞凋亡、刺激β细胞增生、诱导干细胞分化为胰腺内分泌细胞,从而使被破坏的胰岛细胞恢复分泌胰岛素的功能,这些作用为其治疗Ⅰ型糖尿病提供了证据,使其成为Ⅰ型糖尿病治疗领域研究的热点。 相似文献
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胰高血糖素样肽1:阿尔茨海默病治疗新策略 总被引:3,自引:0,他引:3
2型糖尿病(type2diabetes mellitus,T2DM)与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理生理过程具有密切的相关性。人们正在逐步深入研究治疗T2DM的最新药物——胰高血糖素样肽1(glucagon-likepe ptide1,GLP-1)的神经保护作用,并大胆地提出了利用GLP-1治疗AD的设想。本文对T2DM与AD的发病相关性、GLP-1的合成与分泌、GLP-1受体的中枢分布及其生理效应,特别是GLP-1与AD治疗策略相关的研究进展作一综述。 相似文献
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胰高血糖素样肽1与干细胞定向分化 总被引:2,自引:0,他引:2
糖尿病已经成为21世纪严重威胁人类健康的疾病之一。胰岛移植被认为是治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的最有效方法。然而,供体组织来源的匮乏限制了其应用。随着细胞移植和组织工程的日益发展,干细胞研究为新型胰岛的来源开辟了新的途径。干细胞定向诱导分化的关键是筛选合适的诱导剂以及优化诱导微环境,使干细胞培养微环境尽可能接近体内正常细胞发育分化的微环境,从而有利于干细胞适宜生长及定向分化。最近研究证实,胰高血糖素样肽1(Glucagon- Like PeptideⅠ,GLP-1)在干细胞向胰岛样细胞诱导分化中具有显著作用。因此,为了更好地应用GLP-1在干细胞定向分化中的潜能、促进应用干细胞治疗糖尿病新疗法研究的进程及干细胞定向分化技术逐渐成熟,本文就胰高血糖素样肽-1及它诱导干细胞定向分化胰岛样细胞的研究进展作一阐述。 相似文献
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《中国生物化学与分子生物学报》2018,(12)
胰高血糖素样多肽-1(glucogen-like peptide-1,GLP-1)在胰岛素分泌过程中扮演重要角色,并在改善β细胞功能方面有着令人瞩目的效应,但有关其作用机制尚需更深入研究。本研究探讨GLP-1对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型胰岛细胞损伤的影响,观察GLP-1在T2DM大鼠胰岛细胞凋亡损伤机制中所发挥的作用。HE染色结果发现,糖尿病大鼠胰岛损伤。ELISA结果表明,糖尿病患者和糖尿病大鼠血清中GLP-1表达水平上调。放射免疫结果表明,GLP-1和谷氧还蛋白1(Grx1)促进HIT-T 15细胞分泌胰岛素,Cd抑制胰岛素的分泌。免疫组化结果表明,糖尿病大鼠GLP-1加药处理后,各组与糖尿病组相比,药物提高了Grx1和胰岛素表达水平,降低了胰高血糖素表达水平,同时降低了活性胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。本研究结果提示,GLP-1在肥胖T2DM大鼠胰岛细胞凋亡中起保护作用,同时可调节胰岛素和胰高血糖素水平,其机制可能与Grx1相关。 相似文献
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胰高血糖素样肽-1在胰腺中作用机制的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是胰高血糖素原基因编码的一种激素,主要由肠道L细胞产生并分泌进入血液。GLP-1能激活胰腺、肾脏、肺、胃、心脏和脑等组织中存在的特异性G蛋白偶联受体(GPCR)。通过GLP-1受体(GLP-1R)的激活,活化腺苷酸环化酶,产生3',5'-环腺苷酸,随后通过cAMP依赖性第二信使途径激活蛋白激酶A和鸟苷酸交换因子。大量围绕胰岛素产生细胞——β细胞开展的研究证明,GLP-1短期作用能够加强葡萄糖依赖性的胰岛素分泌作用,持续的GLP-1R激活也能增加胰岛素的合成,促进β细胞的增殖和新生,抑制β细胞凋亡。GLP-1在胰岛素和胰高血糖素分泌方面的独特作用引发了大量针对GLP-1受体激动剂的研究。我们对胰腺中GLP-1R激活所产生作用的机制进行简要综述。 相似文献
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人胰高血糖素样肽-1突变体基因的克隆及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:克隆人胰高血糖素样肽-1突变体(^2Gly-hGLP-1)基因,高效表达GST-^2Gly-hGLP-1融合蛋白.方法:在获得重组hGLP-1基因工程菌基础上,利用定点突变技术改造其第2位丙氨酸为甘氨酸,经酶切克隆于pGEM-7z( )载体中,构建pGEM-4T-3/^2Gly-hGLP-1融合表达规模.SDS-PAGE和凝胶扫描分析,融合蛋白以可溶形式存在,其表达量占菌体总蛋白的29.7%。表达产物经亲和层析纯化后纯度在95%以上,免疫印迹证实,该融合蛋白可被异性hGLP-1(7-37)抗体所识别。结论:为产业化规模制备hGLP-1突变体提供技术线路。 相似文献
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利用转基因烟草表达人胰高血糖素样肽1的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
人胰高血糖素样肽1(hGLP1)是一种短肽激素,是近年来备受关注的治疗糖尿病最有前景的候选药物。在设计合成hGLP1基因并构建植物表达载体的基础上,通过农杆菌介导将hGLP1基因导入烟草基因组中,获得转化再生植株,经过PCR扩增和Southern blot分析,证实hGLP1基因已整合进入6个株系的烟草基因组中。GUS组织化学染色表明,与目的基因融合的报告基因在转基因烟草中获得表达。Western blot检测表明,其中2个株系转基因烟草叶片中能够检测到hGLP1融合蛋白的表达。初步的动物试验表明该融合蛋白具有一定的降血糖生物活性。 相似文献
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《生物技术》2020,(4)
[目的]构建点突变的GLP-1Gly8,并与人血清白蛋白(HSA)结构域Ⅰ融合,延长GLP-1的半衰期。[方法]采用常规PCR扩增白蛋白结构域Ⅰ片段,利用SOE-PCR扩GLP-1Gly8基因并将两个基因拼接,得到的HSA-GLP-1Gly8融合基因经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到p ET30a表达载体,重组质粒p ET30a-HSA-GLP-1Gly8转入E.coli BL21(DE3)宿主菌中进行IPTG诱导表达。[结果]PCR扩增分别获得140 bp的GLP-1Gly8基因499 bp的HSA的片段及经融合后的HSA-GLP-1Gly8基因。表达载体p ET30a-HSA-GLP-1Gly8在E.coli BL21(DE3)宿主菌中经IPTG诱导,过表达了分子量约为22 k Da的融合蛋白。[结论]成功构建了p ET30a-HSA-GLP-1Gly8原核表达载体,融合蛋白在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式过表达。 相似文献
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胰高血糖素样肽-1及其类似物与Ⅱ型糖尿病治疗 总被引:2,自引:0,他引:2
胰高血糖素样肽-1(GIP-1)是人体内强有力的促胰岛素分泌的肽类激素,对Ⅱ型糖尿病有潜在的治疗作用。但是GIP-1在体内很快被二肽酰基肽酶Ⅳ降解,血浆半寿期很短,因而限制了其临床应用。目前人们已开发了多种GIP-1的衍生物,希望能将其用于临床对Ⅱ型糖尿病进行治疗。 相似文献