糖胺聚糖降解菌株的筛选及鉴定

以土壤为材料,用透明质酸和硫酸软骨素为唯一碳源富集分离菌株,通过BSA-乙酸平板显色法及比色定糖法进行筛选。从80份土壤中筛选出13株糖胺聚糖降解活性的菌株并对其进行了16S rDNA测序鉴定。结果表明,筛选到13株糖胺聚糖降解菌株均具有透明质酸酶和硫酸软骨素酶活性;获得8株尚未报导过的产糖胺聚糖降解酶活性菌株。本研究为开发新型的糖胺聚糖降解酶提供参考。     

三种方法测定鲨鱼硫酸软骨素钠含量的比较

利用酶解高效液相色谱法、高效液相色谱法及氯化十六烷基吡啶电位滴定法对鲨鱼硫酸软骨素钠含量进行检测,并对检测结果进行对比分析,结果显示,酶解高效液相色谱法不适用于鲨鱼硫酸软骨素钠含量的测定;而氯化十六烷基吡啶电位滴定法检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量稍高于高效液相色谱法;相比之下,高效液相色谱法较适用于检测鲨鱼硫酸软骨素钠含量。     

鹿茸硫酸软骨素蛋白聚糖的分离纯化研究

报道了用DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析从鹿茸二杠中分离、纯化及鉴定硫酸软骨素的方法.首先用适量蒸馏水浸泡鹿茸二杠并将其捣碎,离心取沉淀用盐酸胍浸提,浸提液对尿素液透析后经DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析,吸附大量的硫酸软骨素;再用含盐尿素溶液梯度洗脱、分离后,经软骨素酶消化及琼脂糖凝胶电泳, 与硫酸软骨素标准品比较,证实得到的物质为纯的硫酸软骨素蛋白聚糖,其得率约为48.77%.该方法使硫酸软骨素分离纯化一步完成,大大简化了纯化步骤.     

基于工程化毕赤酵母一锅法合成硫酸软骨素A北大核心CSCD

硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是一种线性多糖,广泛应用于医疗和保健等领域。相比于传统动物组织提取法,微生物合成硫酸软骨素具有可控、易规模化放大等优势。为实现硫酸软骨素A(CSA)的高效合成,本研究首先通过整合软骨素合酶编码基因kfoC、kfoA以及UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD至毕赤酵母GS115基因组中,构建了以甘油为唯一碳源发酵生产软骨素的毕赤酵母工程菌株。通过进一步优化软骨素合成途径,软骨素分批补料发酵水平达到2.6 g/L。在进一步整合表达软骨素-4-O-磺基转移酶的基础上,本研究通过向生产软骨素毕赤酵母工程菌株破碎液中添加3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸和软骨素-4-O-磺基转移酶,成功建立了CSA的一锅法生物合成体系。通过优化,最终实现0-40%不同磺酸化水平CSA的可控合成。本研究中CSA的一锅法生物合成体系操作简便、易放大,更适用于工业化大规模生产。本研究结果也为肝素等其他糖胺聚糖的合成提供了思路。     

硫酸软骨素在癌症治疗领域的研究进展

硫酸软骨素是一种硫酸化的糖胺聚糖,其在恶性肿瘤组织中的含量、结构、硫酸化位点等与正常组织存在显著差异,在癌症的迁移,侵袭,血管生成过程中发挥重要调控作用,在癌症的临床研究中具有很大潜力。该文对硫酸软骨素的生物合成进行归类分析,对近几年硫酸软骨素与肿瘤入侵和转移的相关临床研究以及分子机制研究做出综述,以期为开发硫酸软骨素潜在的临床价值和肿瘤治疗靶点研究提供理论依据,为恶性肿瘤的早期诊断和预后评估提供思路。     

硫酸软骨素研究现状

硫酸软骨素是从动物软骨中提取的黏性多糖,在医药、化妆品和食品工业上有广泛的用途,市场前景广阔。本对硫酸软骨素的性质和用途做了简要的介绍,并阐述了近几年硫酸软骨素生产工艺的发展状况。     

固定化内切型肝素酶的研究

将提纯的一种内切型肝素酶固定于聚酯载体上 ,固定化效率达 78 8%。酶活力在pH为 7 5左右时表现最高 ,并且在此条件下固定化酶的稳定性最好。最适反应温度为 4 0℃。热稳定性试验表明 ,固定化酶的稳定性较差。固定化酶的使用半衰期比游离酶延长 4 4倍。固定化酶催化肝素底物反应的Km 值约为 95 4 μmol L而游离酶的Km 值约为 71 2 μmol L。固定化酶可以同时作用于肝素和硫酸乙酰肝素 ,而对硫酸软骨素没有催化能力。肝素经降解后 ,产生一定量的非硫酸化或低硫酸化的二糖和不同聚合度的寡糖混合物。     

硫酸软骨素提取工艺的研究

硫酸软骨素是生物界广泛存在的酸性粘多糖,广泛存在于动物的器官软骨。以猪器官软骨为原料,采用碱提取和酶解相结合的方法提取硫酸软骨素,利用正交实验对碱提取过程中的温度,碱浓度以及提取时间等三个关键因素进行优化,并对硫酸软骨素成品的相关指标进行检测。正交实验结果表明,最佳的碱提取条件为：温度40℃、提取时间8h、碱提取浓度为0．15g／mL。在此条件下获得的碱提取液,通过酶解、脱色、醇沉、干燥,得到白色硫酸软骨素成品,总得率为20％,各项指标均符合国家部颁标准,达到出口要求。     

硫酸软骨素对慢性酒精中毒大鼠脑损伤的保护作用

目的:探讨硫酸软骨素对慢性酒精中毒脑损伤的作用及可能机制.方法:雄性 Wistar 大鼠60只随机分为6组,酒精模型组以剂量为8ml·kg-1·d-150%的酒精每天灌胃一次,纳洛酮药物组给予乙醇半小时后腹腔注射纳洛酮0.08mg·k-1·d-1,硫酸软骨素低、中、高剂量干预组在酒精模型组的基础上分别给予硫酸软骨素50、100、150mg·kg-1·d-1,空白对照组给予等体积的蒸馏水,持续2周;第三周把50%的酒精的剂量递增为12mg·kg-1·d-1,持续灌胃6周.在第八周末实验结束后取血,分离血清,留取脑组织.HE染色观察各组大鼠神经细胞的变化.生化测定各组大鼠血清及脑组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及脂质过氧物终未产物丙二醛(MDA);并测定脑皮质中β-内啡肽含量(β-EP).结果:模型组大鼠大脑皮质和海马区神经元数量明显减少,神经细胞排列紊乱.硫酸软骨素中剂量组大鼠大脑皮质和海马区神经细胞排列层次较清晰.与酒精组相比较,硫酸软骨素中剂量组大鼠血清和脑组织匀浆中MDA含量明显降低(P<0.01),脑皮质中β-内啡肽含量明显降低(P<0.01);GSH-PX含量及SOD活性显著升高(P<0.01).结论:硫酸软骨素对大鼠慢性酒精中毒脑损伤具有保护作用.     

微生物降解石油烃的功能基因研究进展

微生物对石油烃的降解在自然衰减去除土壤和地下水石油烃污染的过程中发挥了重要作用。微生物通过其产生的一系列酶来利用和降解这类有机污染物,其中,编码关键降解酶的基因称为功能基因。功能基因可作为生物标志物用于分析环境中石油烃降解基因的多样性。因此,研究石油降解功能基因是分析土著微生物群落多样性、评价自然衰减潜力与构建基因工程菌的重要基础。本文主要介绍了烷烃和芳香烃在有氧和无氧条件下的微生物降解途径,重点总结了烷烃和芳香烃降解的主要功能基因及其作用,包括参与羟化作用的单加氧酶和双加氧酶基因、延胡索酸加成反应的琥珀酸合酶基因以及中心中间产物的降解酶基因等。     

蛋白聚糖在维持牙本质胶原空间形貌和水合性能方面的作用

目的:评价牙本质蛋白聚糖对脱矿牙本质胶原纤维形貌和水合性能的影响。方法:新鲜拔除无龋坏人磨牙牙本质酸蚀后分别用胰蛋白酶和硫酸软骨素酶ABC孵育去除牙本质蛋白聚糖和糖胺聚糖侧链,对照组与实验组处理方法相同,但孵育液中不添加酶。然后在牙本质表面不同润湿状态下用场发射扫描电镜和激光共聚焦扫描电镜分别观察牙本质的微观形貌并评价脱矿牙本质的水合性能。结果:硫酸软骨素酶ABC和TRY酶处理改变了牙本质的微观形貌,使胶原纤维间距增大。酶处理、牙本质表面润湿性及两者的交互作用均会显著影响脱矿牙本质的厚度(P0.0001)。结论:牙本质蛋白聚糖和糖胺聚糖侧链在维持牙本质胶原纤维网的空间结构和水合作用方面均发挥着重要作用。蛋白聚糖、胶原纤维-蛋白聚糖以及蛋白聚糖-蛋白聚糖间的的亲水性是影响脱矿牙本质围观形貌和厚度的重要因素。     

发酵法生产硫酸软骨素的研究进展

硫酸软骨素是一种典型的硫酸化糖胺聚糖,具有多种药物活性,广泛应用于药品、保健品及化妆品行业。硫酸软骨素是动物软骨中蛋白聚糖的主要成分和少数几种细菌的荚膜多糖,因此可利用动物提取法和发酵法进行生产。以下综述了硫酸软骨素的发酵生产及其合成机制的研究进展,并对其发展趋势进行了展望。     

海洋微生物多糖降解酶的研究进展

多糖降解酶是一类能够催化多糖分子内糖苷键断裂,使聚合度不断降低,最终产生寡糖的水解酶。地球上微生物数量庞大,其产多糖降解酶种类丰富,尤其是海洋微生物多糖降解酶因其特异性的催化活性,在工业生产中具有重要的应用前景。随着海洋生物技术的快速发展,海洋微生物多糖降解酶的开发和利用已逐渐引起研究者的关注。综述了海洋微生物多糖降解酶的主要类型及研究现状,并讨论了未来应用及发展趋势,以期为海洋微生物多糖降解酶的研究与开发提供参考。     

硫酸软骨素对慢性酒精中毒氧化损伤的保护作用(英文)

目的:研究硫酸软骨素对慢性酒精中毒氧化损伤的保护作用。方法:60只Wistar大鼠随机分成六个组:空白组给予蒸馏水,酒精模型组给予50%的酒精8ml·kg-1·d-1灌胃,纳洛酮组在给予酒精三十分钟后腹腔注射纳洛酮0.08mgkg-1·d-1,硫酸软骨素低、中、高剂量组在酒精模型组的基础上分别给予硫酸软骨素50,100和150mg·kg-·1d-1。两周后酒精的剂量增加到12mg·kg-1d-1。在第八周末,分离大鼠脑组织,观察大鼠神经细胞。用生物方法测定大鼠脑组织中GSH-PX、SOD、MDA以及Ache的活性。结果:模型组大鼠大脑皮质和海马区神经细胞的数量明显减少并且排列紊乱;和酒精模型组相比较,硫酸软骨素中剂量组大脑皮质和海马区神经细胞排列较整齐,酒精+Chondroitin组脑组织中MDA的含量和Ache降低(P<0.01),GSH-PX的含量和SOD的活力均明显增加(P<0.01)。结论:硫酸软骨素对慢性酒精中毒氧化损伤具有保护作用。     

硫酸软骨素对慢性酒精中毒氧化损伤的保护作用

目的:研究硫酸软骨素时慢性酒精中毒氧化损伤的保护作用.方法:60只Wistar大鼠随机分成六个组:空白组给予蒸馏水,酒精模型组给予50%的酒精8 ml·kg-1·d-1灌胃,纳洛酮组在给予酒精三十分钟后腹腔注射纳洛酮0.08mgkg-1·d-1,硫酸软骨素低、中、高剂量组在酒精模型组的基础上分别给予硫酸软骨素50,100和150mg·kg-1·d-1.两周后酒精的剂量增加到12mg·kg-1d-1.在第八周末,分离大鼠脑组织,观察大鼠神经细胞.用生物方法测定大鼠脑组织中GSH-PX、SOD、MDA以及Ache的活性.结果:模型组大鼠大脑皮质和海马区神经细胞的数量明显减少并且排列紊乱;和酒精模型组相比较,硫酸软骨素中剂量组大脑皮质和海马区神经细胞排列较整齐,酒精+Chondroitin组脑组织中MDA的含量和Ache降低(P＜0.01),GSH-PX的含量和SOD的活力均明显增加(P＜0.01).结论:硫酸软骨素时慢性酒精中毒氧化损伤具有保护作用.     

马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST11基因的分子特征与表达分析

硫酸软骨素(CS)具有抗炎、抗病毒和软骨保护功能等免疫学功能。硫酸软骨素磺基转移酶CHST11(carbohydrate sulfotransferase 11,chondroitin 4)催化磺酸基从供体PAPS(3'-磷酸腺苷酰-5'-磷酸硫酸盐)转移到软骨素N-乙酰半乳糖胺的4位碳上,实现磺酸化反应,是合成硫酸软骨素的关键酶。本研究通过对马氏珠母贝磺基转移酶基因Pm CHST11(Pinctada martensii carbohydrate sulfotransferase 11)的全长克隆及组织表达分析,探究Pm CHST11在马氏珠母贝免疫调节中的作用。结果表明:Pm CHST11序列全长为1 418 bp,编码426个氨基酸;Pm CHST11序列含有信号肽结构区域,跨膜结构域和磺基转移酶-2结构域,为高尔基体膜偶联磺基转移酶;多序列比对结果显示,Pm CHST11与其它物种的CHST11同源性较低;实时荧光定量结果表明,Pm CHST11基因在多个组织中均有表达,其中在外套膜边缘区显著高表达(p0.05)。本研究为分析Pm CHST11在马氏珠母贝中的免疫调节中的作用积累基础资料。     

人血清脂蛋白与糖胺聚糖及人主动脉蛋白聚糖的相互作用

本文报道了在[Ca~(2+)]=30mmol/L时,人血清或人血清脂蛋白与各种糖胺聚糖(GAG)及人主动脉两种蛋白聚糖(PG)的相互作用。GAG与血清的作用能力为6—硫酸软骨素(C6—S)>肝素(Hep)>4—硫酸软骨素(C4—S)>透明质酸(HA)>硫酸皮肤素(DS)。极低密度脂蛋白(VLDL)及低密度脂蛋白(LDL)可与肝素作用形成不溶性复合物,而高密度脂蛋白(HDL)则不能。人主动脉硫酸软骨素—PG(CS—PG)、硫酸皮肤素—硫酸软骨素—PG(DS—CS—PG)与血清形成不溶性复合物的曲线类型不同,后者的类型似有利于DS—CS—PG与血清脂蛋白结合从而使之在动脉壁沉积。     

海洋微生物来源的岩藻多糖降解酶

近年来研究发现,岩藻多糖及其降解产物具有多种重要的生物学活性,对岩藻多糖降解酶的关注日益增多。本文概述了海洋微生物来源的岩藻多糖降解酶的发现、活性检测方法、性质、应用等方面的研究进展。同时展望了现代组学及结构生物学技术快速发展对海洋微生物来源的新型岩藻多糖降解酶研究的推动作用。     

植物细胞壁多糖合成酶系及真菌降解酶系

秸秆类植物细胞壁多糖高效降解转化对我国农业经济的绿色可持续发展具有重要意义,然而植物细胞壁在长期进化过程中形成了复杂结构限制了工业化酶解转化的过程。一方面从植物细胞壁多糖合成酶系的多样性、细胞壁多糖成分的复杂性、超分子结构的异质性等方面综述了形成植物细胞壁抗降解屏障的原因;另一方面从真菌降解植物细胞壁酶系的多样性、不同菌株降解酶组成差异性等分析降解转化植物细胞壁时发挥的不同作用,从而为工业转化合理复配真菌降解酶系,提高秸秆生物质的利用效率提供理论支持。     

植物细胞壁多糖合成酶系及真菌降解酶系北大核心CSCD

秸秆类植物细胞壁多糖高效降解转化对我国农业经济的绿色可持续发展具有重要意义,然而植物细胞壁在长期进化过程中形成了复杂结构限制了工业化酶解转化的过程。一方面从植物细胞壁多糖合成酶系的多样性、细胞壁多糖成分的复杂性、超分子结构的异质性等方面综述了形成植物细胞壁抗降解屏障的原因;另一方面从真菌降解植物细胞壁酶系的多样性、不同菌株降解酶组成差异性等分析降解转化植物细胞壁时发挥的不同作用,从而为工业转化合理复配真菌降解酶系,提高秸秆生物质的利用效率提供理论支持。