天花粉中三个同工凝集素的分离纯化及其生物学性质研究

运用阴离子交换层析从亲和纯的天花粉凝集囊中分离得到三个同工形式的凝集素,它们都具有结合半乳糖的能力,都能与天花粉凝集大的抗血清形成免疫沉淀线,并且其它各方面的性质如疏水结合能力也相仿。对它们生物学性质的检测,发现它们都能杀伤黑色素瘤细胞,但缺乏抑制无细胞蛋白质生物合成的能力。另外,对植物中同工形式凝集大的存在进行了讨论。     

天花粉同工凝集素—1双链的拆分和鉴定

天花粉同工凝集素－１经巯基乙醇还原,碘代乙酰胺保护,其链间二硫键被打开,但仍非共价结合在一起。我们利用尿素变性的Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析分离了此凝集素的两条链。氨基酸组成测定与其他３种肽链作一比较,它们都含有较多的酸性和羟基氨基酸。蛋白质印迹显示ＴＫＬ的抗血清不仅能与ＴＫＬ－１的两条链分别分应,也能与天花粉毒蛋白及蓖麻毒蛋白的Ａ链起作用。溴化氰裂解的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ肽谱表明天花粉凝集素的     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉同工凝集素－1双链的拆分和鉴定

天花粉同工凝集素－１经巯基乙醇还原,碘代乙酰胺保护,其链间二硫键被打开,但仍非共价结合在一起。我们利用尿素变性的Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层忻分离了此凝集素的两条链。氨基酸组成测定与其他３种肽链作一比较,它们都含有较多的酸性和羟基氨基酸。蛋白质印迹显示ＴＫＬ的抗血清不仅能与ＴＫＬ－１的两条链分别反应,也能与天花粉毒蛋白及蓖麻毒蛋白的Ａ链起作用。溴化氰裂解的ＳＤＳ－ＰＡＧＥＲ肽谱表明天花粉凝集素的两条链与天花粉毒蛋白含有类似的裂解片段,在分子量１６ｋｄ左右有相同的电泳条带。ＴＫＬ－１两亚基的Ｎ末端序列已经测定,同源性比较发现其３３ｋｄ亚基的Ｎ末端序列与天花粉毒蛋白、蓖麻毒蛋白的一些肽段类似。迄今已有的证据表明ＴＫＬ与ＴＣＳ等是一些非常相关的蛋白质。     

中性红染色后细胞对凝集素的反应性

中性红染色后的小鼠胸腺细胞。肝、脾和肾细胞,人扁桃体细胞,以及体外培养的不同肿瘤细胞(HL60,K562,Molt-4,MLA和L1210)都能够被凝集素凝集。除小鼠肝细胞和肾细胞外,它们的凝集特征都与红细胞的凝集特征相同。不同来源的细胞,其对凝集素的反应性不同,其中,以肿瘤细胞对凝集素的反应最敏感。结果说明,中性红染色法可以作为用凝集素初步检测一些无色细胞表面凝集素受体变化的一种简便方法。     

凝集素和毒素

总的说来,凝集素并不很毒,但是在凝集素和毒素之间却存在一些关系。ＥＢＡ类毒素可以分为两个主要部分。其中一个部分呈现糖结合活性,负责靶向。另一部分则具有不同的酶活性,决定了其毒性。从天花粉中分离得到凝集素分享了ＤＥＡ类毒素（例如蓖麻毒素）的一些特性。还有一些毒素可以在细胞膜上造成孔,形成离子通道。半夏凝集素似乎可归属于这类毒素。从蛇毒中分离得到了一此凝集素,它们和蛇毒中的其它一些成员在氨基酸序列上有     

天花粉凝集素的晶体学研究

天花粉凝集素是从中药天花粉瓜蒌块根中分离出的一种能专一结合糖类的新蛋白质。用悬滴汽相扩散法培养出了该蛋白质的晶体,最大线度尺寸达１．１ｍｍ。该晶体属正交晶系,空间群为Ｐ２１２１２１,晶胞参数ａ＝４４．７,ｂ＝６９．５,ｃ＝１８０．９,晶胞内每个不对称单位含１个天花粉凝集素分子。收集了３．０分辨率的衍射数据,并以具有某些相似性能的已知蛋白质结构为模型,做了分子置换研究。本文报导天花粉凝集素的晶体培养及Ｘ射线晶体学研究的初步结果。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉凝集素的固定化及其应用

制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱,用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物,发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ,４０ｋＤ等糖蛋白,这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础。从人及骆驼、绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的、分子量不等的糖蛋白,进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α＿１－抗胰蛋白酶等,为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法。在寻找天花粉植物体内此凝集素的内源受体时,探讨了它可能的生理功能。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

植物凝集素研究进展

植物凝集素广泛分布于植物界,它可以根据不同性质进行分类,按进化及结构相关性可以分为七个家族;豆科凝集素,单子叶植物甘露糖结构凝集素,含橡胶素结构域的几丁质结合凝集素,2型核糖体失活蛋白,葫芦科韧皮部凝集素,木菠萝素相关凝集素和苋科凝集素,在长期的进化过程中,它们形成几种不同的结合模体来识别一些外源多糖,在植物中未发现合适的内源性多糖受体。植物凝集素在生物学研究,农业和医学上有广泛的应用。     

内源凝集素与细胞分化和细胞恶化

动物细胞中的凝集素叫内源凝集素,介导蛋白和糖的相互作用,是细胞-细胞识别、细胞粘附和细胞分化中的重要因素。在胚胎形成和器官发育过程中内源凝集素有发育调节作用。近年来又发现内源凝集素和细胞恶化、肿瘤恶性程度以及肿瘤转移都有关,是个值得研究的问题。     

半乳糖凝集素1的免疫功能

半乳糖凝集素为S型凝集素,因其可特异性识别β-半乳糖苷键而得名。半乳糖凝集素1是最早发现的半乳糖凝集素家族成员,它在固有免疫与适应性免疫中均发挥着重要的作用。在固有免疫中,半乳糖凝集素1调节中性粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞的功能,进而调节免疫反应;在适应性免疫中,半乳糖凝集素1对T细胞有重要的免疫调节功能,在T细胞存活、T细胞免疫调节、T细胞免疫疾病、炎症、肿瘤发生发展及免疫逃逸中都扮演着重要的角色。     

天花粉凝集素的固定化及其应用

制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱,用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物,发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ,４０ｋＤ等糖蛋白,这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础,从人及骆驼,绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的,分子量不等的糖蛋白,进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α１－抗胰蛋白酶等,为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法,在寻找天     

坛紫菜凝集素的糖结合专一性和细胞凝集作用

坛紫菜的磷酸盐缓冲液浸取液,经硫酸铵沉淀和DEAE－Sepharose,SephadexG-100二步层析纯化,获得纯化的坛紫菜凝集素（PHL）。该凝集素能与3种单糖（阿拉伯糖,半乳糖,木糖）及麦芽糖专一性结合,其中与麦芽糖结合最强。细胞凝集实验结果显示,PHL能凝集兔,绵羊及鸡红细胞而不能凝集鸭,鸽子及人血红细胞,PHL还能凝集海洋微藻－绿色巴夫藻和淡水微藻－蛋白核小球藻,它们的凝集活性与藻细胞密度有关。不同状态的细菌和酵母细胞对PHL反应不同,表明随着细胞状态的改变,细胞表面的凝集素受体也随之发生变化。     

三种菜豆凝集素的分离纯化及其与黑皮扁豆凝集素抗血清的免疫交叉反应

利用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、离子交换和分子筛层析,分别从白花菜豆(Phaseolus albiflora L.var)、紫花菜豆(Phaseolus purpurea L.var)、红花菜豆(Phaseolus coccineus L.var)种子中纯化得到3种菜豆凝集素(PAL,白花菜豆凝集素;PPL,紫花菜豆凝集素;PCL,红花菜豆凝集素).纯化的3种菜豆凝集素经SDS-PAGE电泳检测都只有一个分子量约为32 kD的亚基,它们都能与黑皮扁豆凝集素抗血清发生免疫交叉反应.     

香樟树种子中两种Ⅱ型核糖体失活蛋白凝集素活性的研究

从香樟树成熟的种子分离到两种新的Ⅱ型核糖体失活蛋白：新丰毒蛋白和辛纳毒蛋白. 两者A链的分子质量虽然相差近一倍,但B链的分子质量相同. Ⅱ型核糖体失活蛋白的A链是RNA N-糖苷酶,B链是凝集素,A链进入细胞表现毒性在很大程度上依赖于B链的糖结合活性和特异性.对辛纳毒蛋白和新丰毒蛋白B链的凝集素活性进行了测定和比较. 红细胞凝集实验显示辛纳毒蛋白和新丰毒蛋白具有相同的细胞凝集活性,半抗原抑制实验发现它们都属于半乳糖型核糖体失活蛋白,荧光光谱法显示它们的糖结合常数也相同.     

人胃癌结合β半乳糖苷凝集素对不同细胞的凝集作用

本文使用去唾液酸胎球蛋白柱从人溃疡型胃癌中分离纯化出一种对β半乳糖苷键有高亲和力的凝集素(LBP)。乳糖是其有效抑制剂。研究结果表明,LBP既能促进正常细胞间的凝集,又能促进或介导人胃癌细胞与正常细胞间的粘附;共价结合LBP的琼脂糖颗粒对红细胞的吸附能力增强。而这些作用都可以被乳糖完全或部分抑制。结果提示,LBP可能是在人胃癌细胞定向转移中起作用的一种重要分子。     

病毒感染和免疫清除中的C型凝集素

树突状细胞和朗罕氏细胞是人体防御病毒入侵的第一道屏障,这些细胞表达的C型凝集素对于细胞发挥抗原免疫清除和细胞之间的黏附有重要作用。其中DC—SIGN和DC—SIGNR在HIV等多种病毒的感染中发挥重要作用。随着基因组学的发展鉴定了许多新的C型凝集素,它们在免疫清除和病毒感染中都可能发挥重要作用。