首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
本文报告以CD2cDNA5’端的片段作探针,从人T淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆,经限制性内切酶降解和Southern杂交分析,证明其中一个阳性克隆的插入片段中含CD2基因5’侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及DNA序列分析,鉴定出一含转录起始点及其上游序列的4.0kb片段。将此片段中含转录起始点和两个DN(ase)Ⅰ高敏感位点的2.5kb片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体pMG3中,并用限制性内切酶对此2.5kb片段作不同程度缺失,构成一系列突变子。这些重组的表达质粒转染人JurkatT细胞后,以瞬时表达实验分析各突变子驱动虫萤光素酶基因的表达,结果发现在CD2基因5’上游具有很弱的启动子活性,初步测定该启动子位于-1.2kb~-98bp域。CD2基因具有弱启动子、强增强子的特点与T细胞表面其它抗原分子基因是相似的。  相似文献   

2.
根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒(CAV)环形基因组DNA(全长2.3kb)的EcoRI位点和BamHI位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用PCR技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的CAV感染的MDCCRP1细胞基因组DNA中,分别扩增出包含EcoRI和BamHI分割开的病毒基因组两部分(1.5kb和0.8kb)约1.5kb和约1.25kb的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进pUC18载体,获得包含CAV全基因组序列DNA片段的克隆质粒pCAV2.4。酶切分析表明,该质粒具有预期的BamHI位点、PstI位点、HindⅢ位点,而预期的EcoRI位点消失。重组质粒插入DNA片段的两端序列分析表明,质粒pCAV2.4是包含CAV全基因组序列的重组质粒,插入DNA片段序列中的EcoRI位点序列发生了一个碱基突变。  相似文献   

3.
经6.6×105个克隆筛选,从装在λ噬菌体载体Charon30中的人基因库中筛选到了一个含人分裂细胞核抗原(PCNA)基因的克隆。经Southern杂交分析插入基因长约14kb,有较长的5'上游区,但3'端缺少一部分。经亚克隆和测序已确定从5'上游1263bp到3'端与λ载体接点共4969bpPCNA基因片段的核苷酸序列。将PCNA基因启动子核苷酸序列与DNA聚合酶α,拓扑异构酶Ⅱα,胸苷酸激酶基因的启动子进行比较有30%以上同源性,具有“看家基因”特征。在转录起始点的5'上游几百bp的范围内都有与CAT,SP1,E2F,NFHB,Oct1和ATF等转录因子的结合位点相似的核苷酸序列。  相似文献   

4.
家蚕滞育激素基因的克隆   总被引:14,自引:1,他引:14  
利用放射性同位素32P-dCTP标记家蚕滞育激素cDNA作为探针,从家蚕基因库大约4×10~5个噬菌体斑中筛选得到30个阳性克隆,其中3个克隆具有相同的限制性内切酶图谱,并测知插入DNA约18kb,用限制性内切酶SalI、EcoRI切割,进行次克隆。用TaqDyeprimer序列测定法,得到部分核苷酸序列,经比较,鉴定了这3个克隆确属滞育激素基因。基因组Southern分析,推定家蚕滞育激素基因属单基因编码。  相似文献   

5.
崔丽微  李元 《遗传学报》1993,20(6):561-571
我们已往的工作已经确定在重组质粒pIJM9中,生米卡链霉菌来源的4.16kb插入DNA片段带有丙酰化酶基因,为了进一步确定该基因在4.16kb插入片段中的位置,我们以BamHI对pIJM9进行酶切,在此基础上进行缺失重组亚克隆,在所获得的转化子中,No.5转化子含重组质粒pIJM95,分子量为5.0kb,插入DNA片段为0.53kb,以No.5转化子对螺旋霉素进行生物转化实验,其转化产物经薄层层析  相似文献   

6.
水稻蜡质基因5‘端上游顺序中的核蛋白结合区   总被引:4,自引:0,他引:4  
通过wx基因转录起始点上游2120bp长的DNA序列的测定,用不同的限制性内切酶对此片段进行消化,获得15个大小不同的DNA片段并构建成不同的亚克隆。  相似文献   

7.
环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆   总被引:4,自引:0,他引:4  
环状芽孢杆菌(Baciluscirculans)C2总DNA经PstI部分酶切后分离2~10kb的片段,插入质粒pUC19的PstI位点,转化大肠杆菌(Escherichiacoli),利用几丁质平板从约8000个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆(命名为pCHT1)。用12种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明,重组质粒中的插入片段长30kb,其中各有一个KpnI,SacI和SspI位点。把该克隆片段反向插入pUC19的PstI位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性,说明此片段含有一个完整的几丁酶基因,其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Southern杂交证实了该片段来自于B.circulansC2基因组,且以单拷贝形式存在,它不能与来自于其它7株几丁酶产生菌的总DNA杂交。  相似文献   

8.
对含有麦迪霉素4″-O-丙酰基转移酶(mpt)基因的BamHI-BamHI8.0kb的DNA片段进行限制性酶切分析,绘制出了含有21个酶切位点的限制性酶切图谱。以含有碳霉素异戊酰基转移酶基因(CarE)的2.4kb DNA片段为探针,经Southern blot分子杂交,将mpt定位于一个EcoRI-EcoRI-PstI3.0kb的DNA片段上,将该片段克隆至大肠杆菌/链霉菌穿梭质粒载体pWHM3  相似文献   

9.
泡桐丛枝病类菌原体DNA的分子克隆与序列分析   总被引:6,自引:0,他引:6  
以部分纯化的泡桐丛枝病类菌原体为材料,抽提DNA,进行EcoR Ⅰ-Hind Ⅲ双酶切,回收的DNA 片段插入到载体pGEM-3Zf(+ )中,转化E.coliDH 5α。经双重杂交初筛以及Dotblot和Southern blot杂交的回交确证,获得两个仅与患丛枝病泡桐总核酸有杂交而与健康对照无杂交的克隆(A4,1.69 kb;C42,2.08 kb)。部分测序的结果表明:A4 和C42插入片段中A+T含量分别为72.5% 和67.9% ,具有典型支原体属微生物的碱基组成特征  相似文献   

10.
绿色木霉纤维素酶CBHⅡ基因的结构研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
实验经限制性酶切和双向Southern杂交将重组质粒pCBHII-14的14kb外源片段上的绿色木霉纤维素酶CBHII基因定位于4.4kb的EcoRI片段上,将该片段克隆于质粒pUC19,获得重组质粒pCBHII。通过限制性分析构建了pCBHII上4.4kbEcoRI片段的物理图谱。在此基础上用质粒制作该片段的亚克隆,采用Sanger双脱氧链终止法测定了含绿色木霉纤维素酶CBHII基因的4074bp的DNA序列,由GT-AG规则和cDNA序列推知该结构基因由4个外显子和3个内含子组成,总长1613bp,5′端存在与一般真核基因类似的两个特征性调控序列,但3′端不存在真核基因通常具有的特征序列而存在功能未明的短重复序列和嘧啶富集区。并对纤维素酶基因间的同源性和可能的功能作了初步的探讨。  相似文献   

11.
CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
研究了CD3ε和PMA对细胞凋亡基因fas的转录调控作用.根据已知的人fas基因5'上游序列设计引物,用PCR法从人胸腺细胞基因组DNA中扩增出fas5'上游长为446bp的启动子片段.将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体pXP2中.经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒DNA的结构和序列正确.用此质粒(pXP2-fasup)瞬时转染人JurkatT淋巴细胞,分析报告基因的表达水平.结果表明fas基因上游-506到-60的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的1.5倍.抗CD3ε抗体和PMA处理均可增强fas启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的pXP2-fasup转染细胞的1.7倍和3.3倍,但二者没有协同作用.PKC的抑制剂staurosporine和PTK的抑制剂herbimycinA可抑制PMA诱导的fas基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用PMA处理的水平.但PTK的另一种抑制剂genistein可与PMA发挥协同作用,上调fas基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到5倍.这些结果为阐明CD3ε及PMA介导T淋巴细胞激活和凋亡的分子机制  相似文献   

12.
限制性内切酶BamHI水解中国野生葡萄葛lei的叶绿体DNA(cpDNA),电泳分离为34条带,最大为11.7kb,最小为0.23kb,分别为pUC和pBR322质粒克隆所得片段,转化大肠杆菌,并从转化菌中提取质粒DNA,经酶切电泳分析证明含有葛lei cpDNA经BamHI水解的不同片段,从而构建了葛lei cpDNA的BamHI质粒文库。  相似文献   

13.
大蒜花叶病毒外壳蛋白基因cDNA的克隆和序列分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
我们从自然发病的大蒜中分离得到了大蒜花叶病毒。以其基因组RNA为模板合成了3'末端部分cDNA。从中选出一批插入片段在2.0kb以上的重组克隆,经Northern点杂交分析证实了所选克隆与基因组RNA同源。通过对若干个克隆的插入片段两端部分序列的测定,选出一个克隆pGM495,其插入片段的长度约为2.4kb,3′末端存有一个Poly(A)结构,它应包含了编码该病毒外壳蛋白全部序列。序列测定的结果表明,这个cDNA片段全长为2379bp,其中含有与酶切图谱分析结果相符的EeoRI、PstI及BamHI酶切位点。第一个终止密码子TAA与3′g末端相距264bp,我们根据碱基序列推定的氨基酸序列与其它已发表的Potyvirus的外壳蛋白氨基酸序列以及外壳蛋白翻译后加工的蛋白酶专一切点相比较后推测,编码该病毒外壳蛋白序列可能起始于3′末端上游的1170bp处,共编码302个氨基酸,其分子量为36kD,略大于SDS-PAGE所测定的33kD,非编码区域长264bp,富含AT,并有多个终止密码子的存在。趾3′末端32~27bp处有一个AATAA序列。  相似文献   

14.
限制性内切酶BamHI水解中国野生葡萄葛(VitisflexuosaThunb)的叶绿体DNA(cpDNA),电泳分离为34条带,最大为11.7kb,最小为0.23kb,分别用pUC和pBR322质粒克隆所得片段,转化大肠杆菌,并从转化菌中提取质粒DNA,经酶切电泳分析证明含有葛cpDNA经BamHI水解的不同片段,从而构建了葛cpDNA的BamHI质粒文库。  相似文献   

15.
用富集文库克隆人胰岛素基因组基因   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库,克隆了人胰岛素基因组基因.首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组DNA,用EcoRⅠ和BglⅡ对基因组DNA进行全酶切,经0.4%琼脂糖凝胶电泳,特异回收9.5kb左右的DNA片段.将该片段与λEMBL3/BamHⅠ臂连接,构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库(富集文库),效价为2×104.同时采用PCR方法及用引物Ⅰ:5′GGACAGGCTACATCAGGAAGAGG3′,引物Ⅱ:5′CTGCGTCTAATTGCAGTAGTTC3′,从人基因组DNA中扩增出一段含胰岛素基因的1.36kbDNA片段,做为放射性标记探针,对文库进行了噬菌斑原位杂交筛选,从1×104个噬菌斑中筛选到一个含人胰岛素基因组基因的阳性克隆,并进一步完成了亚克隆和该基因1732bpDNA序列的测定.结果该基因的1732bpDNA序列包括部分5′端和3′端与国外发表的人胰岛素α型等位基因的序列相同  相似文献   

16.
由小麦×玉米获得的普通小麦加倍单倍体后代的RFLP变异   总被引:3,自引:0,他引:3  
用小麦(Triticum aestivumL.)的rDNA克隆pTa71和与小麦基因组有部分同源性的玉米(ZeamaysL.)DNA克隆作探针,对由小麦x玉米获得的普通小麦加倍单倍体(DH)后代群体进行RFLP分析。结果发现,不但用pTa71在这些DH后代中检测到rDNA所发生的明显的减少和扩增及非转录间隔区的限制性片段长度的变化,而且用与小麦基因组部分同源的玉米克隆MR13和MR50在一些DH后代中检测到缺失变异,特别是用MR13在普通小麦DH系的18号株的基因组中检测到大幅度的限制性片段长度的变化,即原来的4.3kb的强信号带消失,取而代之的是40.0kb、2.5kb和2.0kb三条杂交带。这可能与小麦基因组DNA较大的重排事件有关,也可能是由外源的玉米DNA插入造成的。  相似文献   

17.
利用含红霉素抗生基因和缺启动子-信号肽序列的氨苄青霉素抗性基因的双功能质粒pGPB14为探针载体,克隆了枯草杆菌的启动子-信号肽序列并对克隆的片段进行序列分析。枯草杆菌染色体DNA经Sau3A酶解后与BanHI酶切的质粒pGPB14连接,转化大肠杆菌C600,筛选抗氨苄青霉素及抗红霉素的转化子,从双抗性转化子中提取重组质粒并经酶切分析,显示克隆的DNA片段在0.27-1.5kb之间。用Sanger  相似文献   

18.
黑曲霉T21是由黑曲霉3.795经诱变育种获得的糖化酶高产菌株,为阐明其高产的分子机制,由黑曲霉3.795克隆了糖化酶结构基因及其5′旁侧序列,并与黑曲霉T21的相应序列进行了比较.由黑曲霉3.795菌丝体分离染色体DNA,Southern杂交分析表明,糖化酶结构基因位于~2.5kb的EcoRⅠ-EcoRⅤ染色体DNA片段上,在此EcoRⅠ位点上游约1.0kb处有一SalⅠ位点.为构建糖化酶结构基因及其5′旁侧序列的基因组文库,该染色体DNA分别用EcoRⅠ+EcoRⅤ和EcoR+SalⅠ消化,琼脂糖凝胶电泳分离并回收长度在1.0kb左右和2.5kb左右的DNA片段,分别与pUC19载体连接后转化入E.coliDH5.用原位杂交方法筛选到了携带糖化酶基因编码区及其1505bp5′旁侧序列的阳性克隆.对克隆片段的DNA序列进行了测定并与黑曲霉T21的相应序列进行了比较,结果表明,在糖化酶基因编码区及其150bp3′非编码区内,未发现碱基差异,但在-340~-1505的5′上游区内发生了9个位置的碱基变化,包括缺失、插入和替换.这些结果表明,黑曲霉T21与3.795的糖化酶产量的差异与其结构基因无关,但可能与其  相似文献   

19.
紫云英根瘤菌107菌株exo基因簇非连锁突变位点的克隆   总被引:1,自引:0,他引:1  
用鸟枪法从3株紫云英根瘤菌107菌株的胞外多糖合成缺陷变种NA-05、NA-07和NA-08中克隆获得含有107菌株exo基因及Tn5的exo:Tn5片段。以pRK415为载体构建107菌株EcoRI酶切后DNA片段的部分库,用exo:Tn5做探针原位杂交得到一个阳性克隆。该克隆的外源片段4.2kb能恢复3个变种的多糖表型及结瘤固氮能力。酶切分析和Southern杂交表明,3株变种中Tn5插入位点  相似文献   

20.
利用含红霉素抗性基因和缺启动子-信号肽序列的氨苄青霉素抗性基因的双功能质粒pGPB14为探针载体,克隆了枯草杆菌的启动子-信号肽序列并对克隆的片段进行序列分析。枯草杆菌染色体DNA经Sau3A酶解后与BomHI酶切的质粒pGPB14连接,转化大肠杆菌C600,筛选抗氨苄青霉素及抗红霉素的转化子,从双抗性转化子中提取重组质粒并经酶切分析,显示克隆的DNA片段在0.27-1.5kb之间。用Sanger的双脱氧链终止法测定了10个克隆片段的DNA顺序,结果表明,克隆的片段都含有启动子、核糖体结合优点及信号肽序列。克隆片段可以在大肠杆菌和枯草杆菌中恢复氨苄青霉素抗性的表型。β-内酰胺酶活力测定结果证明:大肠杆菌的酶活力主要积累在周质空间内而枯草杆菌的酶活力主要分泌到胞外。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号