大鼠精核蛋白抗血清的制备

用大鼠精核蛋白（Ｒａｔ　Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ,ＲＰ）－核糖核酸（ＲＮＡ）复合物（ＲＰ－ＲＮＡ　Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）免疫大鼠,得到了特异的抗ＲＰ抗血清,并用Ｉｍｍｕｎｏｄｏｔｔｉｎｇ和Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ方法验证了其特异性。该抗血清和ＲＰ有特异的反应,并和哺乳动物小鼠和羊的精核蛋白有一定程度交叉反应,而与体细胞类型核蛋白（Ｈ１,Ｈ２ａ,Ｈ２ｂ,Ｈ３,Ｈ４）无交叉反应。并对制备该抗血清的意义予以讨论。     

草鱼催乳素抗血清的制备与鉴定

应用从草鱼垂体中分离纯化的催乳素免疫兔子制备了特异抗血清。用常规酶联免疫吸附测定法检测表明该抗血清与马哈鱼生长激素及促性腺激素完全没有交叉反应，而与草鱼生长湟级向弱交叉反应。免疫细胞化学染色表明该抗血清主要与草鱼垂体前叶催乳素细胞发生结合反应，与垂体间叶细胞有微弱染色反应，但与神经垂体琢垂体后叶细胞则完全没有免疫结合反应。     

棉铃虫核型多角体病毒的血清学研究

用提纯的棉铃虫核型多角体病毒(NPV)的多角体蛋白和病毒粒子免疫家兔制备抗血清,用免疫扩散和对流免疫电泳对四林棉铃虫NPV的多角体蛋白和病毒粒于进行了血清学比较研究。四株棉铃虫NPV分为两个包埋类型：单粒包埋型和多粒包埋型。soI．{3株和H．M株属前者,VHA 273株和XIA 10株属后者。同一株NPV的多角体蛋白或病毒粒子只与它们同源抗血清有反应。它们之间无交叉反应,表明同一株NPV的多角体蛋白和病毒粒子各具有特异的抗原。四株NPV的多角体蛋白不仅与同源的多角体蛋白抗血清有反应,而且也与异 源的多角体蛋白抗血清有交叉反应,说明四株NPV多角体蛋白具有共同的抗原。而四株病毒粒子与同源的病毒粒子抗血清有反应,在它们之间无交叉反应,表明四株NPv病毒粒子各具有自己特异的抗原。     

大鼠精核蛋白的纯化

用大鼠睾丸制备长形精子细胞核及用附睾制备的附睾精子核,用盐酸胍法提取总碱性蛋白（Ｔｏｔａｌ　ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ,ＴＢＰ）。通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－１００分子筛层析,其第三峰用５％ＴＣＡ沉淀,得到纯大鼠精核蛋白（Ｒａｔ　ｐｒｏｔａｍｉｎｅ,ＲＰ）。ＲＰ也可用ＴＢＰ通过ＨＰＬＣ反相柱得到纯化,ＲＰ位于２６％－２８％乙腈梯度。     

大鼠精核蛋白的纯化

用大鼠睾丸制备长形精子细胞核及用附睾制备的附睾精子核,用盐酸胍法提取总碱性蛋白。通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析,其第三峰用５％ＴＣＡ沉淀,得到纯大鼠精核蛋白。ＲＰ也可用ＴＢＰ通过ＨＰＬＣ反相柱得到纯化,ＲＰ位于２６％－２８％乙腈梯度。     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,发现只有抗ＣＧＲＰ－１的抗血清能够与ＣＧＲＰ很好地结合。因此,可以推测ＣＧＲＰ的羧端部分是其免疫活性部位。     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,     

大鼠血管壁上有高血糖素免疫反应物质

自从Sutherland于1948年提出血浆中的高血糖素可能有非胰腺的来源后,人们就一直在寻找究竟还有哪些器官和组织可能产生高血糖素。继在胃肠道和下颌腺发现高血糖素免疫反应性物质后,最近日本Osaka大学的Tanaka等又报告,在大鼠的血管壁有高血糖素的免疫反应物质。他们采用两种高血糖素的抗血清,用免疫组织化学和免疫化学方法进行观察。其中抗血清OAL-123,是用牛胰高血糖素C端19-29片段免疫兔得到的,它与肠高血糖素的交叉反应小于0.1%,与其它胃肠肽类如生长抑素、P物质、神经降压素、脑啡肽、胆囊收缩素等都无交叉反应。另一种抗血清30K,是被广泛应用的与胰高血糖素C端起反应的抗血清。     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

牛IgA、IgM、IgG_1、IgG_2、重链特异性抗血清的制备

<正>通过选择对类和亚类具有选择性反应的特异性决定簇种类(而不是交叉反应决定族),可有效地制备免疫球蛋白类和亚类的特异性抗血清。牛IgG_1和IgG_2的完整分子在其重链和轻链上有共同抗原,用兔制备牛IgG_1和IgG_2抗血清,二者有交叉反应。同样,用兔制备的牛IgA、IgM和IgG抗血     

酪氨酸蛋白激酶底物的 ELISA 测定及应用

用合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白(P-tyr-BSA)免疫家兔得抗血清,此抗血清与3种磷蛋白均有交叉反应.将 IgG 纯化并与辣根过氧化物酶偶联,经 Sephadex G-200纯化得酶标结合物.纯化的 IgG 只与载体牛血清白蛋白和磷酸酪氨酸蛋白有交叉反应.ELISA (酶联免疫吸附测定法)的最小检出量为2—4ng,与被检磷酸酪氨酸蛋白均有交叉反应,但与磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸蛋白及其他含磷酸物质无交叉反应.样品变异系数,批间和批内均小于5%.血清磷酸酪氨酸蛋白检测结果:20例正常人均阴性,20例急性淋巴细胞性白血病18例阳性,14例非急性淋巴细胞性白血病均阳性.     

抗血管紧张素原多克隆抗血清的制备及鉴定

为深入研究血管紧张素原（angiotensinogen,AGT)的表达和组织分布特征,我们以原核表达的AGT蛋白C末端片段为免疫原免疫家兔,制备了针对AGT的多克隆抗血清,并对其进行了ELISA、Western印迹分析及免疫组化鉴定。结果发现,经多次免疫后获得的多克隆抗血清不仅效价高（1：25600）,而且能特异性地针对组织内源性及原核表达的AGT蛋白,同时在人和大鼠组织AGT之间会发生交叉反应。以此抗血清进行免疫组化染色,观察到人胰腺的胰岛细胞及杆内胆管上皮细胞胞浆均有AGT蛋白表达。以上结果提示,利用大鼠杆菌融合表达的AGT蛋白可有效刺激家兔产生AGT抗体。本工作为进一步研究AGT乃至局部RAS的生理、病理意义提供了重要的实验工具。     

六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白抗原性初步研究

初步研究六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白(Nucleocapsid protein,NP)抗原的抗原性,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据。利用原核表达系统表达纯化六种致病性白蛉病毒核蛋白,并分别免疫新西兰白兔。通过间接ELISA方法及Western-blotting方法对所获得的兔免疫血清进行交叉反应检测,确定其抗体ELISA滴度。此外,分别用上述六种致病性白蛉病毒NP抗原包被ELISA反应板并对发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)病人血清进行间接ELISA检测,确定其血清学交叉反应及IgG抗体滴度。通过原核表达系统表达并纯化的六种白蛉病毒NP抗原浓度及纯度均达到免疫和检测要求。ELISA及Western-blotting检测结果显示六种病毒NP抗原兔免疫血清中的每种血清与其余五种病毒NP抗原可能存在血清学交叉反应。SFTSV病人血清与除SFTSV-NP以外的五种NP抗原亦可能存在部分交叉反应。本研究初步评价了原核表达的六种致病性白蛉病毒核蛋白的抗原性和免疫反应性,为相应诊断试剂的研制奠定了基础。     

黄瓜花叶病毒CP基因原核表达及抗血清的制备

把黄瓜花叶病毒 (CMV)西番莲分离物的外壳蛋白 (CP)基因 ,通过BamHI SacI位点定向插入pET 2 2b( )载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,经IPTG诱导下 37℃培养 6h ,SDS PAGE电泳示表达蛋白分子质量为 31 8kDa ,表达量占菌体总蛋白的 2 8 9%,表明该蛋白得到了高效表达。用冰冷的氯化钾溶液显色 ,用表达的特异蛋白质条带制备抗原 ,免疫家兔制备出病毒特异抗血清。采用ID ELISA测定抗血清效价为 1 0 -6;抗血清和CMV几个分离物均有特异反应 ,和TMV、菌体蛋白不发生非特异性反应 ;检测病毒灵敏度达 30ng ml,能够从稀释 31 2 5倍的感病植物汁液中检测出病毒     

降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA在大鼠淋巴细胞中的表达

最近,我们研究发现大鼠胸腺和淋巴结淋巴细胞中存在降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）样免疫反应活性。应用人工合成的可特异扩增降钙素／降钙素基因相关肽基因部分片断的寡核苷酸引物,通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测在大鼠脊髓背根神经节、胸腺细胞及肠系膜淋巴结淋巴细胞中是否存在ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ,进一步研究大鼠淋巴细胞能否合成ＣＧＲＰ。结果显示,通过ＲＴ－ＰＣＲ从脊髓背根神经节（阳性对照）、胸腺和淋     

家鱼下丘脑中LRH含量的一种放射免疫测定方法

以一种新的佐剂葡聚糖硫酸钠为LRH 的载体,加福氏全佐剂和百日咳疫苗免疫动物可以得到与鲤鱼下丘脑LRH 抽提液有交叉反应的抗血清,并以此建立了放射免疫测定方法。鲤鱼二月份和十月份采集的下丘脑LRH 含量有明显的差别。     

单克隆抗体亲和层析技术

亲和层析技术中用常规抗血清作配体时,由于抗血清成份复杂、亲和力多样化,特异性强的制剂又不易得,因而此层析技术的应用受到限制.单克隆抗体(McAb)技术的建立,为亲和层析技术的应用带来了突破.因为McAb作为亲和层析技术中的配体有以下几个优点:(1)可以利用粗制抗原制备分泌单一抗体的杂交瘤细胞株,在体外或体内大量生产McAb;(2)由于McAb是针对单一抗原决定簇的,该决定簇是某一抗原物质所特有或是多种抗原物质所共有时,可没有任何交叉反应或有完全的交叉反应.     

分泌抗马铃薯Y病毒单克隆抗体的大鼠杂交瘤细胞系的建立及抗体稳定性测定

用大鼠的骨髓瘤细胞系(1R983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU／c)脾细胞融合,建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克降抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对 PVYn具有特异性反应,其二对PVYo。具有特异性反应;其三对PVY n和PVYn。均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELlsA间接法检测,上述(McAb)同TMv、CMV、TEV,AMV、 TuMV、PLRV,PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘸纲胞系和McAb的生 物学特性及理化特性进行了鉴定。     

体外培养大鼠海马细胞白细胞介素—1的表达及缺氧的影响

采用免疫组化方法,观察了体外培养大鼠海马细胞对人重组白细胞介素1β（rhIL-βH）抗血清的免疫反应以及缺氧的影响,结果可见,体外培养的大鼠海马神经元和神经胶质细胞对抗rhIL-1β抗血清均呈弱性免疫染色反应,缺氧后免疫染色反应明显增强,经图像分析表明,缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度均较缺氧前增加,尤以缺氧2h增加最明显,继续缺氧4－12h,神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱,以上结果表明,大鼠海马脑区存在抗rhIL-1β抗血清的免疫反应细胞;缺氧使对抗rhIL-1β抗血清的免疫染色反应增强,提示IL－1β与脑缺氧损伤的调控有关。     

水稻条纹病毒病害特异蛋白的提纯及血清学特性

应用差别ｐ Ｈ 值沉淀蛋白质的原理,建立了水稻条纹病毒病特异蛋白（ Ｓ Ｐ） 的两种提纯方法。这两种方法都可以从病叶中提纯到大量的 Ｓ Ｐ,其粗提纯量分别为０ ．８ 和２ ．０ ｍｇ／ｇ 病叶。通过 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 分离后得到了精提纯的蛋白,其分子量为２０ ．１ ｋ Ｄａ 。将粗提纯和精提纯的 Ｓ Ｐ 分别免疫兔子,制备出效价为５１ ２００ 和６ ４００ 的抗血清。将效价为６ ４００ 的高度特异性的抗血清用于研究 Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 与 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 及同属的水稻草状矮化病毒（ Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ） Ｓ Ｐ、 Ｃ Ｐ 之间的血清学关系,结果表明, Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 的抗血清与 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ、 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 之间无反应,但可与 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 微弱反应;而 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ、 Ｃ Ｐ 及 Ｒ Ｓ Ｖ Ｃ Ｐ 的抗血清与 Ｒ Ｓ Ｖ Ｓ Ｐ 之间都无血清学反应。结果证实了 Ｒ Ｓ Ｖ 和 Ｒ Ｇ Ｓ Ｖ 之间存在着进化上的亲缘关系