猪血小板外廓蛋白（profilin）的分离纯化和鉴定

本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量１４ｋＤ;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。     

韭菜线粒体锰超氧化物歧化酶纯化及性质研究

经硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤,将韭菜线粒体ＳＯＤ纯化到均一程度。从６０００ｇ韭菜叶片线粒体中纯化得到２．５ｍｇ酶,酶比活力达１２００Ｕ／ｍｇ蛋白。该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２都不敏感,热稳定性弱 外光区吸收峰在２８０ｎｍ,凝胶过滤法测得其分子量为８２００Ｄ,ＳＯＳ－ＰＡＧＥ法测定其亚基分子量的２２０００Ｄ,ＤＮＳ法测得其Ｎ－末端氨基酸为缬氨酸。上述结     

蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶纯化及性质

采用硫酸铵沉淀,离子交换层析和离子交换凝胶过滤法,从蓖麻蚕卵母细胞中纯化出一种蛋白酸疼。该蛋白酶活性能被天冬氨酸蛋白酶特性异性抑制剂胃肽抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶,经ＳＤＳ－聚丙烯配角安凝胶电泳测得电泳测得分子量为９０ｋＤ,由凝胶过滤估计分子量在３６０ｋＤ,推测该酶由四亚基组成。     

白及块茎铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质

白及（Ｂｌｅｉｌｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ．）的ＳＯＤ同工酶只有一条较宽的谱带,确认为Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ。其块茎ＳＯＤ总活性和比活性都高,且含有丰富的白及胶;经丙酮分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析分离纯化,获得对ＣＮ￣－敏感的淡兰色Ｃｕ·ＺｎＳｏＤ粉末。在凝胶电泳染色图谱上,纯化后的酶与粗酶液的ＳＯＤ区带相对应,且其酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,表明已纯化到均一程度。该酶分子量约３３ＫＤ,亚基分子量约为１６．４ＫＤ;紫外光区的吸收峰在２６４．６ｎｍ,等电聚焦电泳呈现一条蛋白区带,ｐＨ值在４．３５左右;该酶在ｐＨ６．０～１０．０,温度在５０℃范围内具稳定性。纯化后的酶为４５６３．２ｕ／ｍｇ·蛋白,纯化了５１倍,活力回收为２２．３％。上述酶没有过氧化氢酶活性。提取过程中还得到高质量的副产品白及胶。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析

采用硫酸铵分级分离,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析以及５＇－ＡＭＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶,提纯倍数为７５０－８００。总回收率为４０％左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,Ａ２７３／Ａ４６０比值为５．８．在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为３２ｋｄ。ＮＡＤＨ和２,６－     

层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基的分离纯化和结晶

藻红蓝蛋白α－亚基具有儿可逆光致变色性质。采用ＤＥＡＥ－纤维素柱层析、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶过滤、ＦＰＬＣ－Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５ ＨＲ １０／３０柱层析等纯化方法,得到了电泳纯的藻红蓝蛋白α－亚基,光化学活性达９３％。在室温、避光条件下,采用悬滴汽相扩散法,得到了两种外形不同的藻红蓝蛋白α－亚基晶体,进一步证实了上述纯化方法的可靠性。     

钙亲和层析分离纯化光系统Ⅱ中的钙结合蛋白（Ⅰ）

Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ经环氧氯丙烷活化后,与亚氨基二乙酸钠偶联。用钙离子作配体从光系统Ⅱ中分离纯化得到一种钙结合蛋白,在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶上此蛋白呈现单一电泳谱带,分子量约为３０ｋＤａ。根据Ａｒｎｏｎ和Ｂｒａｄｆｏｒｄ方法测定的结果表明该蛋白质是叶绿素ａ／ｂ结合蛋白,每分子蛋白约结合有５分子叶绿素ａ,２分子叶绿素ｂ和一定数量的胡萝卜素分子。     

脊神经节感觉神经35kD特异蛋白的纯化

为纯化和鉴定感觉神经特异蛋白,以兔脊髓背根神经节及背根纤维组织为材料,通过制备匀浆、离子交换层析 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓｅｐｈａｃｅｌ,高压液相凝胶过滤层析分离纯化了脊神经感觉神经元 ３５ ｋ Ｄ蛋白,将其作为抗原制备抗 ３５ ｋ Ｄ 多克隆抗体． Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 的结果表明,该蛋白特异地存在于脊感觉神经而不存在于脊运动神经．并初步观察到它对鸡胚背根节有神经营养作用．     

甲基单胞菌Methylomonassp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的…

Ｍｅｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌ ＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明的酶由     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

酵母菌SH2发酵产物增强干扰素抗病毒活性及其有效成分的初步研究

酵母菌 Ｓ Ｈ２ 发酵产物（ 简称 Ｆ Ｓ Ｈ２） ,用 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 凝胶层析和 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 色谱层析分离纯化,收集到一组蛋白。该组蛋白在 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳上带型一致,无蛋白亚基,分子量范围为５２ ～７２ ｋ Ｄ。凝胶上糖蛋白的特异性染色——— Ｓｃｈｉｆｆ’ｓ 染色显示阳性染色带;用 Ｌｏｗｒｙ’ｓ 法测蛋白和硫酸酚法测糖,显示蛋白与糖的比例约为３∶１ 。该组蛋白与人α干扰素作用,增强干扰素生物学效价分别为１ ．６ ～２ ．８ 倍和１ ．４ ～４ ．０ 倍;经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 凝胶层析的 Ｆ Ｓ Ｈ２ 蛋白洗脱峰增效２ ．０１ ～５ ．６８ 倍;发酵液增效１ ．６４ ～６ ．８６ 倍。并证实酵母菌 Ｓ Ｈ２ 增效干扰素的活性成分为５２ ～７２ｋ Ｄ 分子量范围的胞外糖蛋白（ 简称 Ｙ Ｅ Ｇ Ｐｓ） 。     

高压快速柱分离纯化牛血球超氧化物歧化酶的研究

以牛血球为材料,经溶血等处理和丙酮沉淀,获得牛血球超氧化物歧化酶粗品。此粗酶可以通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ快速柱层析,获得超氧化物歧化酶纯品。纯化的酶比活可达１３５００ｕ／ｍｇ,经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和快速蛋白液相色谱（ＦＰＬＣ）检测,结果表明,纯化酶是均一的Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤测得该酶分子量为３１,８００,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１５     

以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD

以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ,得到电泳均一,比活为８６２２Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ,其回收率为８５．４％。探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景。     

粘虫颗粒体病毒增效因子的分离纯化及其生化性质

粘虫颗粒体病毒经０．０２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ碱溶,先用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提中分离增效因子,然后选用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析柱进一步纯化增效因子,得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组ＮＳ５区Ａ段和部份Ｂ段蛋白。ＮＳ５Ａ蛋白溶于水,可经过ＧＳＴ亲和层析柱纯化;ＮＳ５Ｂ蛋白不溶于水,经ＰＢＳ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析,ＮＳ５Ａ蛋白除在５７ｋＤ左右有条带外,还有不同程度的降解产物;ＮＳ５Ｂ蛋白主要在５８ｋＤ左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取９     

以魔芋葡甘聚糖凝胶为载体亲和层析分离纯化猪血SOD

以魔芋葡甘聚糖（ＫＧＭ）凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血ＳＯＤ,得到电泳均一,比活为８６２２Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为７７．８倍的ＳＯＤ,其回收率为８５．４％．探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景．     

脊神经节感觉神经特异蛋白的分离纯化和鉴定

为进一步研究感觉神经特异蛋白２９ＫＤ的结构和功能,我们以兔脊神经节及背根纤维为材料,通过制备匀浆,离子交换层析ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ,高压液相凝胶过滤层析分离纯化了感觉神经特异蛋白２９ＫＤ,薄层扫描鉴定纯度为８０％以上,用蛋白质印迹法鉴定了该蛋白,并进行了该蛋白的稳定性观察。为该蛋白作为鉴定感觉神经元及其纤维的标志物,和研究感觉神经元的再生与功能打下了基础     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ