人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ,纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带,分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ,人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近,在ｐＨ７．５－８．０之间,酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０~（－３）及３×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用,说明二者均需活性中心丝氨酸参与。     

采用一种新介质纯化神经生长因子

采用一种新闻子交换介质Ｅｘｐｒｅｓｓ－ＩｏｎＣ（简称ＩｏｎＣ）使鼠神经生长因子（ｍＮＧＦ）能得到规模纯化。以鼠颌下腺为原料,匀浆后,经Ｅｘｐｒｅｓｓ－ＩｏｎＣ纯化得单一组分的ｍＮＧＦ,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其相对分子质量约为１３．７×１０＾３,比活约２．３×１０＾５Ｕ／ｍｇ。结果表明ＩｏｎＣ可替代ＣＭ－５２,且更适于工因子的规模化生产。     

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

用重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞在ＰＥＣ４０００作用下与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一株能分泌抗ｒｈＥＰＯ单抗隆抗体的杂交瘤细胞株２Ｆ１２,染色体数目大于１００条,间接ＥＬＩＳＡ法测定腹水和细胞培养上清效价,分别为１．６×１０＾－７和４×１０＾－４。测定抗体亚类时,则同时显示ＩｇＡ和ＩｇＧ１,其轻链为κ链;相对亲和力为５×１０％＾－１２ｍｏｌ／Ｌ。单抗２Ｆ     

人重组GM—CSF／HSA—D3嵌合蛋白（GM—HSA）在大肠杆菌中的表达及其产…

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＳＡ－Ｄ３）的基因串联后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达,表达量占菌体蛋白的３２．６％。利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明,ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０＾６Ｕ／ｍｇ,虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性。     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷酸脂酶Ａ２对血小板的作用。方法 采用ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｓｘ Ｃ－２５Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐ「ｈａｄｅｘＡ－２５,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５多步柱层析法,聚丙烯酰胺产胶电泳,酸性磷脂酶Ａ２酶活性测定;血小板聚集实验。累进要从粗中分离纯化出一酸性磷脂酶Ａ２单体,分子量为１４ＫＤ;等电点ＰＩ３．８;ＰＬＡ２比值２０μｍｏｌ．ｍｇ＾－１．ｍｉｎ＾－１;小     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究

由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）以包涵体的形式存在于细胞中,通过破菌、洗涤获得包涵体,再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱导析得到了均一的产品,经高压液相和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测定纯度均大于９８％,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的比活为３．２×１０＾７ＩＵ／ｍｇ,纯化获得的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ为一酸性蛋白,等电点约为５．２,ＮＨ２－末端有２０个氨基酸序列测定结果     

短裙竹荪多糖Dd—S3P的分离纯化及其性质研究

短裙竹荪子实体经２％Ｎａ２ＣＯ３溶液提取,用蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合除去蛋白,乙醇分级沉淀,级分３经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５柱层析纯化得到的短裙竹荪多糖Ｄｄ－Ｓ３Ｐ。经测定该多糖为均一组分,分子量约为３．８×１０＾５,红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰,含有α－型糖苷连接键,紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰。     

重组人粒细胞——巨噬细胞集落刺激因子的分离与纯化

探讨重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子的分离、纯化工艺。实验所得工艺流程为：离收收集菌体、超声破菌、溶解复性后以３步色谱法即疏水作用色谱、离子交换色谱、凝胶过滤精制纯化,终产品过滤除菌。所得产物用ＨＰＬＣ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,纯度大于９９％;与生白能对照测得其生物活性为１．５９＊１０＾７－１．８６＊１０＾７Ｕ／ｍｇ;产品的急性毒性实验及热原检测均符合要求。此工艺有一定的实用价值。     

重组人肿瘤坏死因子纯化方法的探索

ＴＮＦ是一种具有多种生物学作用的细胞因子,高纯度ＴＮＦ的获得是进一步研究其作用机理和探讨防治方法的基础,对克隆后工程菌表达的纯化进行研究,经盐析,透析,离子交换等步骤,成功地制备了高纯度的ｒｈＴＮＦ,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,分子量１７ｋＤ,纯度〉９５％,比活性为３．４４×１０＾７Ｕ／ｍｇ,与国外同产品相似。     

高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰａｋＳＰ柱分离后,得到两种分子量的尿激酶（ＵＫ）,即高分子量尿激酶（ＨＵＫ）和低分子量尿激酶（ＬＵＫ）,采用民斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白板法测定活力,测得ＨＵＫ比活为２．９×１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,ＬＵＫ为３．５１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,活力回收为７０％以上,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,ＨＵＫ和ＬＵＫ均呈单一条带,分子量分别为５４ｋＤ和３３ｋＤ,Ｈ     

家蚕后部丝腺GPT的分离纯化与动力学性质

本文用丝腺匀浆抽提液经硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析和羟基磷灰石柱层析等步骤分离纯化了家蚕后部丝腺谷丙转氨酶（ＥＣ２．６．１．２,ＧＰＴ）,并研究了它的动力学性质。该酶由两种不同亚基组成,分子量分别是５４０００和２１０００;对丙酮酸、α－酮戊二酸、Ｌ－丙氨酸和Ｌ－谷氨酸的Ｋｍ值分别是２．５×１０－４、４．２×１０－４、９．６×１０－３和１２．５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ;最适温度５０℃,最适ｐＨ８．５;Ｋ＋、Ｍｇ２＋和Ｃａ２＋等离子对酶有激活作用,Ｎａ＋、Ｍｎ２＋、Ｃｕ２＋和Ｚｎ３＋等离子对酶有抑制作用;酶的活性中心含有巯基或咪唑基。     

L—NNA 和还原型Hb对SHRsp肠系膜动脉内皮依赖性舒张的影响

我们以主往的工作证实成年自发高血压大鼠肠系膜动脉由乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张减弱,为进一步探讨ＥＤＲ减弱的机制,本文观察了一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸及ＥＤＲＦ灭活剂还原型血红蛋白对卒中易感型自发高血压大鼠与常压对照大肠系膜动脉,ＡＣｈ内皮依赖性舒张的影响,发现Ｌ－ＮＮＡ（１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨＲｓｐ弱于ＷＫＹ的ＡＣｈ ＥＤＲ（１０＾－８－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）的差异消失,ＲＨｂ（     

重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子的实验室培养、复性和分离纯化

建立了一个实验室制备重组ｈＧＭ-ＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整,使ｈＧＭ-ＣＳＦ的表达量从１６.９％提高到３２.３％,获得０.７４９ｇ／Ｌ的包含体,纯度为６５％;包含体用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解和稀释复性后,经ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ．ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００ＨＲ层析分离,制得纯度达９７％以上、比活性为３.０×１０^７ｕ／ｍｇ的ｈＧＭ-ＣＳＦ,纯化总回收率约为５％     

蛋白激酶C对CNE-2Z细胞p53基因表达的影响

用抗人ｐ５３蛋白单抗,进行免疫细胞化学染色,研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞ｐ５３基因表达的影响。结果发现：对照组Ｐ５３蛋白阳性细胞百分比为６７．６９±２．９７。ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）终浓度分别为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ诱导细胞２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３０．４４±４．２５和２９．１９±２．３９,较对照组均明显降低,Ｐ＜０．０１。用终浓度为２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＴＰＡ和终浓度为４ｕｇ／ｍｌ的ＯＡＧ分别作用２４ｈ后,Ｐ５３阳性细胞百分比分别为３３．７５±４．３４和６８．１８±４．４２,前者较对照组明显降低,Ｐ＜０．０１,后者变化不明显。阳性细胞中对照组和ＯＡＧ组以胞核和胞浆均着色为主,而ＳＳ、ＳＴ和ＴＰＡ组以胞核着色为主。以上结果表明：突变型ｐ５３基因在ＣＮＥ－２Ｚ细胞中有较高表达;通过抑制细胞ＰＫＣ活性和耗竭ＰＫＣ含量后,均可降低ｐ５３基因的表达;ＰＫＣ激活剂ＯＡＧ对该细胞ｐ５３基因的表达无明显影响。     

大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化

对重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）高效表达克隆ｐＺＷ．ＧＭ的表达产物进行了纯化,并对纯化的ＧＭ－ＣＳＦ进行了Ｎ端氨基酸序列分析。人ＧＭ－ＣＳＦ基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列化步骤,终产物纯度达９９％,按蛋白总量计算回收率达１０％,比活性达１×１０＾７ｕ／ｍｇ蛋白质。通过测定纯化人ＧＭ－ＣＳＦ的Ｎ端１     

番茄感染TMV诱导的β—1,3—葡聚糖酶的纯化和性质

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶胞外β－１,３－葡聚糖酶活性升高,番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析和ＰＢＥ９４聚焦层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶,测得该酶的分子量为２２ｋＤ;以昆布多糖为底物,该酶的最适ｐＨ５．４,最适温度３０－４０℃;Ｋｍｔ Ｖｍａｘ值分别为５．６４ｍｇ／ｍｌ和０．３２８ｎｍｏｌ／ｓ。在感染     

^60Co—γ辐射对尼氏钝绥螨抗多虫畏性状的诱导及其它生物学效应

本文首次报道了＾６０Ｃｏ－γ射线辐笛射诱导抗药性产生的方法,以２０００拉德的剂量辐射３次,约１年时间培育出尼氏钝绥螨Ａｍｂｌｙｓｅｉｕｓ ｎｉｃｈｏｌｓｉ Ｅｈａｒａ ｅｔ Ｌｅｅ对拟除虫菊酯农药多虫畏具抗性的两个品系：单抗１（ＦＲ１）与双抗（ＰＦＲ）品系。多虫畏对其致死中浓度ＬＣ５０由敏感品系的８．２２×１０＾－５ｐｐｍ分别提高到１．３３４７×１０＾－３和１．４３０７×１０＾－３,抗性水平提高２     

笋瓜籽毒蛋白Maximin—一种新的蛋白质生物合成抑制剂的分离纯化…

笋瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍａｘｉｍａ）种籽经去壳捣碎,乙醚脱脂,硫酸铵分级沉淀,阳离子交换层极及凝胶过滤等步骤,纯化到一种有蛋白质生物合成抑制活性的碱性蛋白,命名为Ｍａｘｉｍｉｎ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示单一条带,其分子量约为２８ｋＤ。该蛋白对兔网织红细胞裂解液的蛋白生物合成有较强的抑制,ＩＣ５０为４．０×１０＾－１０ｍｏｌ／Ｌ,与天花粉蛋白（ＴＣＳ）毒性相似。从这些特性可见,该蛋白似为单链核糖体失     

GA3和BR对离体苎麻叶片中过氧化氢酶和过氧化物酶的影响及其…

经１．０ｍｇ·Ｌ＾－１ＧＡ３和０．１ｍｇ·Ｌ＾－１ＢＲ分别处理后的离体苎麻叶圆片中,过氧化物酶和过氧化氢酶活性都有明显增加。过氧化物酶的最大增加值出现在１２ｈ;过氧化氢酶与超氧物歧化酶同步,最大增加值出现时间都在处理后３６ｈ。０．２ｍｍｏｌ·Ｌ＾－１Ｈ２Ｏ２处理的过氧化氢酶和超氧物歧化酶活性都增加;３．０ｍｇ·Ｌ＾－１ＮａＮ３处理的超氧物歧化酶活性明显增加;１９．５ｍｇ·Ｌ＾－１ＫＣＮ处理的过氧化