非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）荧光活性测定法

建立了一种分析ＨＲＰ催化活力的新方法。该方法基于单体（底物）、聚合物（产物）的荧光发射光谱不重叠,使用荧光光谱仪,通过测量底物荧光淬灭来检测ＨＲＰ在非水介质中（二氧六环－水、乙醇－水、丙酮－水体系）催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便,结果是定量并可重复的,并能定量地计算底物转化率。     

反相胶束体系对辣根过氧化物酶结构与功能的影响

在十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）／异辛烷－正戊醇反相胶束中,研究了含水量（Ｗ０）和表面活性剂对辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）和活力的影响机制。在测定不同含水量（Ｗ０）和ＣＴＡＢ不同浓度下的ＵＶ－Ｖｉｓ光谱（即Ｓｏｒｅｔ吸收光谱）及活力的变化的基础上,发现含水量不同时,反相胶束主要通过影响ＨＲＰ的活性中心而影响酶的活力,但ＣＴＡＢ对酶活性中心没有明显影响。此外通过反相胶束与水相中的ＨＲＰ与Ｈ２Ｏ２复合物     

用凝集素和非同位素标记底物测定核心α－1，6－岩藻糖转移酶及其应用

报道了一个不需同位素和ＨＰＬＣ的α－１,６－岩藻糖转移酶（α１,６ＦｕＴ,又称核心岩藻糖转移酶）的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺（Ａｓｎ）的二天线Ｎ－糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Ａｓｎ,并以此生物素衍生物标记的Ａｓｎ－七糖的Ｎ－糖链为受体底物,ＧＤＰ－Ｌ－岩藻糖为供体底物,用ＬＣＡ柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用ＨＲｐ－Ａｖｉｄｉｎ交联物与柱上带有生物素的产物结合,此ＨＲＰ－Ａｖｉｄｉｎ－生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定ＨＲＰ活力可代表α１,６ＦｕＴ活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比．人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯（ＰＭＡ）处理人肝癌细胞后,α１,６ＦｕＴ增高,而用视黄酸或ｄｂ－ｃＡＭＰ处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。     

非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）催化酚类底物聚合反应速度的影响因素

利用荧光测活法研究了非水介质中不同的对位取代基团对酚类底物ＨＲＰ催化聚合的反应速度的影响,发现反应速度既同对位取代基团的空间位阻效应有关,又同反应中间态的自由基活性有关,两者共同影响反应速度。同时还考察了有机溶剂对反应速度的影响。     

辣根过氧化物酶在一种新型有机介质中的催化反应

选择合适的酶反应介质体系,是酶应用于有机合成的一个重要环节。利用适宜分子量的聚乙二醇（ＰＥＧ）可以将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）分散在甲苯中,摸索了ＨＲＰ在聚乙二醇（ＰＥＧ）－甲苯互溶体系反应的适宜条件,即ＰＥＧ／甲苯的比例、含水量、ｐＨ值、底物浓度等对酶活性影响,结果发现ＰＥＧ含量越低,含水量越高,酶的活力越高;酶在此体系中的最适ｐＨ值为７．０,最适过氧化氢浓度为２０ｍｍｏｌ／Ｌ,愈创木酚的浓度为０     

一种新的末端转移酶活力测定法——荧光底物掺入法

本文介绍了一种末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)活力的荧光底物掺入测定法。本法基于合成一种荧光物质εdATP(1,N-ethenodeoxyadenosine triphosphate)以代替放射性标记底物,在含εdATP与oligo(dA)₂₅的反应体系中,使TdT催化εdATP加接至oligo(dA)₂₅的3′-OH末端可得聚合产物,经分离、酶解后,测定游离εdATP的荧光强度并根据εdATP的掺入量测定TdT活力。方法简便、灵敏,测定范围较宽、重现性好及无需放射性底物。适用于临床定量检测白血病患者白细胞中TdT酶活力及基因工程中TdT工具酶活力的测定。     

在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究

用ＨＰＬＣ纯化了荧光标记的底物用β－１,４－半乳糖基转移酶的荧光标记底物的ＨＰＬＣ测定方法,测定了在发育过程中大鼠肝,肾,脑中的酶活性的变化,结果表明,（１）在正常成年大鼠中,各组织酶活性具有组织特异性,（２）不同的发育期,其酶活性不同,胎地最高,以后就渐渐下降,各组织酶活力变化幅度是不一致的,这些变化的生理意义有待于进一步研究。     

反相胶束体系中辣根过氧化物酶的活力和动力学性质

本文系统研究辣根过氧化物酶在ＣＴＡＢ／Ｈ２Ｏ／ＣＨＣ．３－ｉｓｏｏｃｔａｎｅ（１∶１,Ｖ／Ｖ）反相胶束体系中的催化行为。在一定条件下酶反符合Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ动力学。研究水含量、底物浓度、ＰＨ、温度、表面活性剂的浓度等对酶反应的影响,结果表明表面活性剂对酶表现非竞争性抑制作用,高浓度的过氧化氢抑制酶活,最适ＰＨ为７．０。在低水含量（Ｗ０＜５）的胶束体系中保温后,酶的活力发生不可逆的改     

大鼠杏仁基底外侧核腹侧部向杏仁中央核的纤维投射──HRP逆行示踪结合免疫组织化学法研究

本实验采用ＨＲＰ逆行示踪结合免疫组织化学方法,对大鼠杏仁底基底外侧核腹侧部向中央杏仁核的纤维投射特征及其化学特性进行了研究。一侧杏仁中央核（Ｃｅ）内注射ＨＲＰ后,于双侧杏仁基底外侧核腹侧部（ＢＬＶ）观察到大量ＨＲＰ标记神经元,以对侧为主;在杏仁基底外侧核前（ＢＬＡ）、后（ＢＬＰ）部及梨状皮质内侧部（ＰＣＭ）第Ⅱ、Ⅲ层仅观察到少量ＨＲＰ标记神经元。当注射范围局限于杏仁中央核内侧部（ＣｅＭ）,ＢＬＶ的标记神经元相对多．当注射范围局限于杏仁中央核外侧部（ＣｅＬ）,ＢＬＶ的标记神经元相对少。将有ＨＲＰ标记神经元的切片分别与生长抑素（ＳＯＭ）、脑啡呔（ＥＮＫ）、Ｐ物质（ＳＰ）抗血清按ＡＢＣ法完成免疫组织化学反应,结果在ＢＬＶ、ＰＣＭ第Ⅱ、Ⅲ层观察到ＨＲＰ－ＳＯＭ免疫阳性双标记神经元,但未发现ＨＲＰ－ＳＰ、ＨＲＰ－ＥＮＫ免疫阳性双标记神经元;在ＢＬＡ和ＢＬＰ未发现ＨＲＰ－ＳＯＭ、ＨＲＰ－ＥＮＫ、ＨＲＰ－ＳＰ免疫阳性双标记神经元。本文着重讨论了ＢＬＶ与内脏功能活动的关系,认为ＢＬＶ不同于ＢＬＡ与ＢＬＰ,它参与“内脏环路”。此外,还分析了ＰＣＭ投射到Ｃｅ的神经元的功能学意义。     

微水——有机溶剂两相体系中消旋萘普生的酶法拆分

研究了微水－有机溶剂两相体系中固定化脂肪酶催化的萘甲酯的立体选择性水解反应,固定化酶活性受载体极性、水含量、有机溶剂的ｌｏｇＰ值,产物抑制的影响,据此构建了一种可以连续拆分产生（Ｓ）－（＋）－萘普生的微水－有机溶剂两相体系。反应在一个具有回路的连续流搅拌反应器中进行,反应器中添加有采用吸附法固定化的脂肪酶,截体为一种弱极性的合成载体,水相连同固定化酶颗粒一起永久保持在反应器中,有机流动相带入底物,     

PEG修饰的辣根过氧化物酶及其在非水介质中的性质

酶的化学修饰可以明显提高酶在有机相中的活力。通过氧化过氧化物酶（ＨＲＰ）的糖链后引入氨基再连接甲氧基聚乙醇（ＰＥＧ）５０００和在酶的肽链上连接ＰＥＧ５０００,发现ＨＲＰ多肽链上修饰后的酶在水相中的活力几乎没有变化,但通过氧化糖链连接ＰＥＧ的酶在水相中的活力下降近２倍。在甲苯及二氧六环含量较高的体系中,修和均呈上升趋势。特别在甲苯体系中两种修饰酶活力都比未经修饰的酶提高了近２倍。稳定性研究表明,不论     

微水相中杏仁醇腈酶催化不对称合成(R)-氰醇的研究

利用气相色谱手性分析,研究了微水相中来源于杏仁的（R）－醇腈酶催化醛与HCN不对称合成（R）－氰醇,结果表明,反应时间,添加乙酸,反应介质,反应体系水活度,反应温度和底物的结构对醇腈醇反应均有显著影响,杏仁醇腈酶对芳香族,脂肪族和杂环族醛均有良好的催化作用,其中,苯甲醛为杏仁醇腈的最和达作用底物,在低温（0－5℃）下,转化率和产物对映体过剩值均为99％以上。     

钙离子对辣根过氧化物酶同工酶C的溶液构象的影响

运用荧光光谱方法研究了脱辅基的辣根过氧化物酶同工酶Ｃ。结果表明：（１）ａｐｏ－ＨＲＰ（Ｃ）与其他“Ｂ”类蛋白质不同,有明显的Ｔｙｒ荧光;（２）低浓度变性剂（〈２ｍｏｌ／Ｌ脲或０．２ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍）能增强酶的Ｔｒｐ荧光,但并不改变光谱特性;（３）进一步增加变性剂浓度则使Ｔｒｐ残基暴露于水溶液中,荧光强度略有降低,荧光谱红移;（４）Ｃａ＾２＋络合剂ＥＤＴＡ对色氨酸荧光的影响与低浓度变性剂相同。有意思     

兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ_２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ）,将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）,从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团,使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下,具有ＧＰＸ活性,其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍。研究了双功能酶的最佳制备条件,包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ_２Ｓｅ处理时间等,并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法测定了双功能酶的硒含量;测定了双功能酶对不同底物的米氏常数及双功能酶的荧光光谱、紫外吸收光谱及稳定性。     

脂肪酶在反相胶囊中的催化行为的研究

系统研究了脂肪酶在ＡＯＴ／水／异辛烷反应相胶囊中的催化行为。在一定条件下,反相胶囊中的酶反应的仍符合Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ动力学原理,研究了含水量,底物浓度,ｐＨ,温度,溶剂的种类和表面活性剂浓度等对酶反应的影响。结果表明,酶活力与Ｒ值（水与表面活性剂的摩尔比值）有关。获得最大酶活力的条件是Ｒ＝１１,ｐＨ７．０,温度３２．５℃,橄榄油浓度为４０％。     

重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶的性质

以特异性底物和多态的对大肠杆菌表达的重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶（简称ａｐＰＥＰ）催化性质的研究表明,ａｐＰＥＰ在４～３２℃比较稳定,最适催化温度为３４℃;在ｐＨ６～１０比较稳定,最适ｐＨ为８．４;ａｐＰＥＰ的比活力为６７．６ｕ／ｍｇ。对Ｚ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－βＮＡ底物的酶解常数Ｋｍ为０．０３ｍｍｏｌ／Ｌ。一些蛋白酶抑制剂和金属离子的抑制作用结果表明,ａｐＰＥＰ不受ＰＭＳＦ、ＴＬＣＫ、ＴＰＣＫ、胰     

正常豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元的投射

本文采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行追踪技术结合硫辛酰胺脱氨酸（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学方法,研究正常豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元的上行投射特点。探讨耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元在听觉信号传递中的可能作用。结果表明,一侧上橄榄复合体加压注射ＨＲＰ后,两侧耳蜗核均出现ＨＲＰ标记细胞,同侧耳蜗核ＮＯＳ－ＨＲＰ双标细胞较多占８２．６３％,并可见ＨＲＰ阳性纤维和终末包绕ＮＯＳ阳性胞体,对侧耳蜗核ＮＯＳ－ＨＲＰ双标细胞相对较少,仅占１４．８７％。一侧下丘加压注入ＨＲＰ后两侧耳蜗核均无ＨＲＰ－ＮＯＳ双标细胞。结果提示,耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元向上橄榄复合体投射,可能具有调节听觉声信号传递的作用     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）,使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ）,因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％,并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。     

化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４）使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基因硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究;硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位,其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提     

胃肠道伤害性刺激诱导中缝背核触液神经元Fos表达

本文以ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达技术相结合,观察胃肠道伤害性刺激后中缝背核触液神经元Ｆｏｓ的表达。在中缝背核发现三种标记神经元,包括ＣＢ－ＨＲＰ逆行标记神经元（３０８）、Ｆｏｓ阳性神经元（４２）和ＣＢ－ＨＲＰ／Ｆｏｓ双重标记神经元（５）。本研究提示中缝背核含有一些具有双重功能的神经元,它们既在脑－脑脊液神经体液回路中传递信息,又在胃肠道伤害性刺激的中枢传递和功能调控中起一定的作用