神经生长因子的发光免疫分析法

介绍了一种灵敏的神经生长因子化学发光免疫测定方法。小鼠神经生长因子（ｍＮＧＦ）的抗体ＩｇＧ用亲和层析纯化并用吖啶酯标记。该法可用于大鼠组织中ＮＧＦ含量的测定。方法的灵敏度为１０ｐｇ／ｍＬＮＧＦ;批内批间变异系数分别为８．７％及１３．２％;回收率平均为１０３％。ｍＮＧＦ抗体对人的ＮＧＦ也有极强的交叉反应,故本方法也可能用于病人血清或脑脊液中ＮＧＦ含量的测定。     

蛇毒神经生长因子生物活性研究

从蛇毒中分离的神经生长因子（ＮＧＦ）,经用鸡胚背根神经节做生物活性测定,发现能促进神经节树突最大生长的最小ＮＧＦ浓度为２．５ｎｇ／ｍｌ。半成品的毫克蛋白（ｍｇＰ）比活性在１．５４×１０５～５．３５×１０５Ｕ／ｍｇＰ之间。经用ＨＰＬＣ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳做纯度分析,主峰面积在９５％以上。并从四种ＮＧＦ成品赋形剂中选出了理想的配方     

GDNF重组腺病毒增加MN9D细胞多巴胺合成与释放

有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基,用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示,经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞内及其培养基中的多巴胺水平分别增加５０．７％和５３．５％．给予神经毒素ＭＰＰ＋损伤后,细胞内多巴胺含量降低５３．５％,但同时给予ＧＤＮＦ腺病毒则可抑制这种降低,并使多巴胺水平增加１４１．３％．以上结果提示ＧＤＮＦ腺病毒可提高细胞内的多巴胺水平并促进其释放,同时还具有对抗神经毒素ＭＰＰ＋损伤作用,表明ＧＤＮＦ重组腺病毒用于帕金森氏病基因治疗具有良好的前景．     

神经生长因子的信号转导

神经生长因子的信号转导李智任一萍（华东师范大学生物系,上海２０００６２）关键词神经生长因子神经营养蛋白神经营养因子信号转导图１ＮＧＦ的信号转导机制Ａ．ＮＧＦ的信号转导概况Ｂ．Ｒａｓ的激活？未知转录调节因子．——转导途径．促进．抑制神经生长因子（ｎ...     

N42—A神经生长因子诱导PC12细胞分化的抑制作用

研究表明,缺乏神经生长因子（ＮＧＦ）的营养支持是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ等神经元退行性疾病发生发展的重要原因,而ＮＧＦ和／或ＮＧＦ受体的过度表达则与一些神经系统肿瘤的发生发展有着十分密切的因果关系。采用＾１２５Ｉ－ＮＧＦ受体特异结合实验作为ＮＧＦ受体活性物质筛选实验模型从中药牛膝中筛选出了能强烈地抑制＾１２５Ｉ－ＮＧＦ受体结合的活性成分Ｎ４２－Ａ（ＩＣ５０＝６．１８±３．４３,ｎ＝４）;细胞培养实验     

神经生长因子在6—OHDA化学性去交感神经中的保护作用

本实验用６－ＯＨＤＡ造成成年小白鼠颌下腺化学性去交感神经,观察了神经生长因子对该神经的保护作用。６－ＯＨＤＡ处理后２４小时腺体内去甲肾上腺素（ＮＥ）含量降至正常水平的２％以下。若在６－ＯＨＤＡ处理同时开始多次给予神经生长因子（ＮＧＦ）,则ＮＥ残留量明显提高。减小６－ＯＨＤＡ剂量到１０ｍｇ／ｋｇ,ＮＥ残留量增加,同时ＮＧＦ的作用亦较用６－ＯＨＤＡ１５ｍｇ／ｋｇ时列为显著。若提前２４小时给予ＮＧＦ,尽     

神经生长因子在6－OHDA化学性去交感神经中的保护作用

本实验用６－ＯＨＤＡ造成成年小白鼠领下腺化学性去交感神经,观察了神经生长因子对该神经的保护作用。６－ＯＨＤＡ（１５ｍｇ／ｋｇｉｐ）处理后２４ｈ腺体内去甲肾上腺素（ＮＥ）含量降至正常水平的２％以下。若在６－ＯＨＤＡ处理同时开始多次给予神经生长因子（ＮＧＦ）,则ＮＥ残留量明显提高。减小６－ＯＨＤＡ剂量至１０ｍｇ／ｋｇ,ＮＥ残留量增加,同时ＮＧＦ的作用亦较用６－ＯＨＤＡ１５ｍｇ／ｋｇ时更为显著。若提前２４ｈ给予ＮＧＦ,尽管仍显著提高ＮＥ残留量,但程度却显然低于与６－ＯＨＤＡ同时给予者。以上结果表明外源性ＮＧＦ对６－ＯＨＤＡ造成交感神经化学性损毁有保护作用,此作用与神经受损的严重程度以及ＮＧＦ处理时间有关。     

N42－A对神经生长因子诱导PC12细胞分化的抑制作用

研究表明,缺乏神经生长因子（ＮＧＦ）的营养支持是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病发生发展的重要原因,而ＮＧＦ和／或ＮＧＦ受体的过度表达则与一些神经系统肿瘤的发生发展有着十分密切的因果关系。采用（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体特异结合实验作为ＮＧＦ受体活性物质筛选实验模型从中药牛膝中筛选出了能强烈地抑制（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体结合的活性成分Ｎ４２－Ａ（ⅠＣ（５０）＝６．１８±３．４３,ｎ＝４）;细胞培养实验表明,Ｎ４２－Ａ对ＮＧＦ诱导大鼠嗜铬神经瘤ＰＣｌ２细胞的分化也具有很强的剂量依赖性抑制作用（对０．１ｎｍｏｌ／Ｌ和０．２ｎｍｏｌ／ＬＮＧＦ诱导的大鼠嗜铬神经病ＰＣ１２细胞轴突生长的半数抑制浓度分别为６μｇ／ｍＬ和２１μｇ／ｍＬ）。这表明,Ｎ４２－Ａ是神经元上介导ＮＧＦ诱导轴突生长的特异受体抑制剂,不仅对ＮＧＦ及其受体过度表达所致的神经系统肿瘤的防治具有潜在的应用价值,而且对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病防治药物的开发研究具有十分重要的意义。     

江浙蝮蛇神经生长因子在家蚕幼虫中的表达

江浙蝮蛇神经生长因子（ＮＧＦ）基因克隆于昆虫病毒转移栽体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组转移栽体ｐＢａｃ－ＰＡＫ－ＮＧ〈与线性化Ｂｍ－ＡａｃＰＡＫ６修饰病基因组ＤＮＡ共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒洒家蚕幼虫,５天后收集血淋巴,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测及利用ＰＣ１２细胞进行ＮＧＦ生物活力测定证明,神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达,且表达产物具有良好的生物学活性     

神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化

根据基因库中的顺序,设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物,以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列,经ＤＮＡ测序确认后,该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导,在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体,经充分洗涤,溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离,梯度洗脱,以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性,再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化,纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定,每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．     

前列腺组织中神经生长因子(NGF)表达的研究

研究前列腺组织中神经生长因子（ＮＧＦ） 的生理学意义。采用原位杂交和免疫组化法, 检测４３ 例前列腺增生组织, ８ 例腺癌组织和８ 例正常组织中β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ及其蛋白的表达及分布。结果显示β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ 在正常组织及增生组织中定位于间质细胞, 偶见于上皮细胞中; 而在癌组织中, 上皮细胞和间质细胞有同样强度的β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ染色。其蛋白在良性组织中表达主要着色在间质细胞中,上皮细胞呈弱表达,而癌组织中上皮细胞见着色明显增强（Ｐ＜ ０．０５）。ＮＧＦ的自分泌异常可见是前列腺组织由良性向恶性转变的原因之一。     

江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒神经生长因子的分离纯化和特性

神经生长因子（ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗ ｔｈ ｆａｃｔｏｒ, Ｎ Ｇ Ｆ）是第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一种神经营养因子 利用 Ｐ Ｃ１２ 细胞生物活力测定为跟踪检测手段,分别经过 Ｃ Ｍ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃ Ｌ ６ Ｂ、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 及 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ ｍ ｏｎｏ Ｓ层析,从３０ ｇ 江浙蝮蛇粗毒中分离纯化到２００ μｇ Ｎ Ｇ Ｆ,纯化倍数高达１０５经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 测定,该蛋白分子量为 ２６ ｋ Ｄ,由两个亚基通过二硫键交联组成二体形式等电聚焦显示其等电点为６７,与氨基酸组成分析结果相吻合 江浙蝮蛇神经生长因子的生物活力水平与小鼠２５ Ｓ Ｎ Ｇ Ｆ相当,在１～１００ μｇ／ Ｌ 的浓度范围内维持 Ｐ Ｃ１２ 细胞在无血清条件下的存活     

神经生长因子家族及其受体研究进展

过去几年在神经营养因子、受体和神经元细胞程序性死亡的研究领域中取得了几项引人注目的进展：（１）神经生长因子（ＮＧＦ）基因家族的其他一些成员包括脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养素－３（ＮＴ－３）、神经营养素－４（ＮＴ－４）、神经营养素－５（ＮＴ－５）的发现;（２）神经生长因子三维结构及功能和进化之关系的阐明;（３）定性了两种神经生长因子受体Ｐ７５＾ＮＧＦＲ和原癌基因ｐ１４０＾ｔｒｋＡ以及相关     

大鼠生后不同时期心肌NGF mRNA水平的变化

神经生长因子 (ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ)是最早发现的神经营养因子 ,对于神经元的发育、分化、维持正常功能具有极重要的作用。研究表明 ,ＮＧＦ也参与免疫、造血、生殖、心血管等功能的调节。以往的研究证实 ,心肌细胞可以分泌ＮＧＦ。多年来 ,人们对ＮＧＦ在心脏方面的作用进行了较为深入的研究 ,但迄今为止 ,尚未见有关生后发育过程中正常心肌ＮＧＦｍＲＮＡ表达方面的报道。本研究采用ＲＴ ＰＣＲ(ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ)方法 ,半定量分析大鼠生…     

等电聚焦法测定2.5S NGF的等电点

采用水平等电聚焦法测定了２５Ｓｍ神经生长因子（ＮＧＦ）的等电点。经测定,纯化的２５ＳｍＮＧＦ的等电聚焦为三条带,这与文献报道相一致,等电点ｐＨ值分别为ｐＨ８７、９０、９３,其主要成分为β亚基ＮＧＦ及其修饰物的混合物,包括在羧基端失去８个氨基酸残基和在氨基端失去１个精氨酸残基,由这三种组分构成的ＮＧＦ统称为２５ＳｍＮＧＦ。     

江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化

将江浙蝮蛇（ＡｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｈａｌｙｓＰａｌａｓ,Ａ．ｈ．Ｐ．）神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ）基因克隆于分泌型原核表达载体ｐＥＴ２２ｂ＋,以Ｃ端融合了６个组氨酸的形式在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行了ＩＰＴＧ诱导表达。ＳＤＳＰＡＧＥ分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的２０％左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用６ｍｏｌ／Ｌ的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子（Ｎｉ２＋）配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达８０％左右。对该重组肽进行变复性研究。利用ＰＣ１２细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有ＮＧＦ生物活力。     

神经生长因子应用研究进展

神经生长因子的研究已经进入应用阶段,国内外科学工作者完成了天然神经生长因子及其基因重组表达神经生长因子的中试研究和药理学研究,结果显示,ＮＧＦ在外周神经损伤后有肯定的促进再生作用,毒理学研究方面尚未见到ＮＧＦ有何严重不良反应的报道。目前,国内外正进行了临床研究工作,初步结果表明神经生长因子可能成为治疗周围神经病的潜在药物之一     

用ELISA法检测2.5S鼠神经生长因子

鼠颌下腺提纯的２５ＳＮＧＦ免疫家兔,获得兔抗ＮＧＦ抗体,研制出鼠２５ＳＮＧＦＥＬＩＳＡ检测试剂盒,该试剂盒灵敏度小于１ｎｇ／ｍｌ,在６７０～０８４ｎｇ／ｍｌ范围内,线性良好,ｒ＝０９９。与大鼠、小鼠及人血浆无非特异反应,在大鼠血浆中,ＮＧＦ样品回收率在９１％～１０７％之间,变异系数小于１０％（ｎ＝４）。结果表明：本试剂盒操作简便,灵敏度高,特异性强,适合药代动力学研究及生产过程中的ＮＧＦ检测。     

刺激大鼠视上核后电针“足三里”对蓝斑灌流液中去甲肾上腺素含量的影响

运用行为测痛结合蓝斑（ＬＣ）灌流液去甲肾上腺素（ＮＥ）的高压液相（ＨＰＬＣ）测定；观察 大鼠痛阈（ＰＴ）与ＬＣ灌流液中去甲肾上腺素含量变化间的相互关系，结果表明：（ｌ）视上核 （ＳＯＮ）内注射 １０μｍＬ－谷氨酸（Ｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ， Ｌ－Ｇｌｕ）后 ３０分钟，大鼠ＰＴ较注射前增加１３３． ２± ２１．４％，此时ＬＣ 灌流液中ＮＥ含量从注射前的４３７．３±２０．４ｎｇ／ｍｌ降到２２９．２±１１．９ｎｇ／ｍｌ，注射 后６０分钟ＰＴ仍比注射前高８３．９±１４．７％，而灌流液中ＮＥ的含量为３２８．６±２８．０ｎｇ／ｍｌ，与人工 脑脊液（ＡＣＳＦ）对照组相比有非常明显的差别（Ｐ＜０．０５～０．００１）。（２） ＳＯＮ注射Ｌ－Ｇｌｕ后，电 针足三里３０分钟（Ｌ－ＧＩＵ＋ＥＡ组）增加到注射前的１８８．２±２３．９％，同ＡＣＳＦ电针组（ＡＣＳＦ＋ ＥＡ）的 ９４．９±７．１％相比有明显差异（Ｐ＜０．０１）。此时ＬＣ灌流液中ＮＥ的含量虽较注射前都明显 降低、分别为１３７．６±７．５ｎｇ／ｍｌ和 １５１，１±１１．５ｎｇ／ｍｌ，但两者相比无明显差异。停针后３０分钟Ｌ－ Ｇｌｕ＋ＥＡ组的ＰＴ仍比注射前高１３３．８±２７．９％，明显高于     

铕螯合剂DTTAEuNa标记流行性出血热单克隆抗体的实验研究

用Ｎ′（对异硫氰基苄基）二乙三胺Ｎ１,Ｎ２,Ｎ３四乙酸铕钠（ＤＴＴＡＥｕＮａ）作为螯合剂,标记不同蛋白浓度的流行性出血热单克隆抗体（ＥＨＦＭｃＡｂ）,经ＳｅｐｈａｋｅｘＧ５０凝胶柱分离标记的单抗分子,通过对层析液的紫外吸收峰处的蛋白光密度,时间分辨荧光强度以及免疫活性测定表明：二批Ｅｕ标记单抗的比活性分别为７８和１４７个Ｅｕ３＋／ＥＨＦＭｃＡｂ,标记回收率分别为４１％和４２％,标记物的免疫活性良好,可用于流行性出血热的抗原及抗体检测