桂枝汤对胃H，K－ATP酶活力的影响及对消炎痛引起胃H，K－ATP酶抑制作用的保护

中药桂枝汤在整体水平上能极其显著的激活胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶的活力,而离体水平上对该酶呈现明显抑制效应。消炎痛在整体和离体水平上均对胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶呈现抑制作用。桂枝汤在整体水平上对消炎痛引起胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶的抑制作用有保护效应。这些结果提示桂枝汤可能通过机体整体调节实现其提高胃Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶活力作用的,从而在Ｈ,Ｋ－ＡＴＰ酶水平上初步阐述了中药桂枝汤调整胃功能的可能作用机理。而且也为扩充桂枝汤的应用范围提供了可能性。     

消炎痛对猪胃H＋／K＋—ATP酶质子转运功能的抑制

作为猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的非竞争性抑制剂,消炎痛明显抑制Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊的质子转运功能,造成质子泄漏。在０．１５ｍｇ／ｍｌ蛋白深度下,４％的消炎痛结合于Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ泡囊上。它能渗入膜脂相并显著降低膜的流动性。并使Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ内源荧光受到淬灭。从实验结果看来,消炎痛对猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运功能的抑制来自对酶蛋白和膜结构影响两个方面,而非仅抑制     

消炎痛对猪胃H^＋／K^＋—ATP抑制的动力学

消炎痛作为一种要引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ０．５为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度以及最适     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

Mg~（2＋）对线粒体H~＋－ATP酶的阿霉素敏感性的拮抗效应──H~＋－AT

用生物膜的拆离与重建技术,研究了Ｍｇ２＋对阿霉素（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ,ＡＤＭ）抑制猪心线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶及其重建脂酶体（Ｌ·Ｈ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。用胆酸盐透析方法将Ｈ＋－ＡＴＰ酶在大豆磷脂脂质体上重建。实验结果表明,重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶的ＡＤＭ的敏感性较仅纯化而未重建者明显增加,这提示ＡＤＭ的抑制作用依赖于磷脂。但是,在有Ｍｇ２＋（１ｍｍｏｌ／Ｌ）条件下重建的Ｈ＋－ＡＴＰ酶对ＡＤＭ的敏感性较无Ｍｇ２＋者却又显著降低,这提示Ｍｇ２＋对ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用具有拮抗效应。Ｍｇ２＋的这种拮抗效应是与其在透析重建Ｈ＋－ＡＴＰ酶过程中诱导脂酶体的磷脂的物理状态的改变相关的。所得实验结果对于阐明ＡＤＭ抑制线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶的作用机理与磷脂的相关性提供了较直接的实验证据。     

消炎痛对猪胃H~＋／K~＋－ATP_（ase）抑制的动力学

消炎痛作为一种可引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ（０．５）为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＋／Ｋ＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度（３９℃）以及最适ｐＨ（约ｐＨ７．５）,但酸性条件下消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制比碱性条件下强烈。在我们的实验条件下,消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制与Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ量成正比,它不影响酶的Ｋｍ值（０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ）,而是显著降低Ｖｍａｘ,因而它是此酶的可逆性非竞争性抑制剂,其Ｋｉ为０．３２ｍｍｏｌ／Ｌ。     

Mg~（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基（－ＳＨ）的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ２＋者明显不同,前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中;在有Ｍｇ２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位,表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ２＋的促进作用,这进一步提示Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态促进线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶重建的间接作用。这些实验结果,从线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的亚基水平的相关性上,对于我们提出的Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态使之具有合适的流动性,诱导嵌入脂双层的Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的Ｆ０的构象发生变化并传递至复合体的催化中心Ｆ１,从而使重建Ｆ１－Ｆ０－ＡＴＰ酶具有较适合的蛋白构象,表现较高的重建酶活性的假设提供了直接的实验证据,精确地阐明了Ｍｇ２＋促进线粒体Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶重建作用的分子机理。     

CaMBP—10介导的质膜H^＋—ATP酶磷酸化对该酶活性的调节

ＣａＭＢＰ－１０在活体处理条件下,抑制ＩＡＡ诱导的质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶活性及其磷酸化,抑制作用可被ＩＡＡ逆转并在外加ＣａＭ时被消除,与前期ＢＰ－１０对ＩＡＡ生理应答的调节效应相吻合。并且在各项处理中,质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶活性与其磷酸化水平呈现极显著的正相关。     

鼠脑突触体Mg^2＋—ATP酶质子泵活性的研究

位于突触体质膜的外向型（ｅｃｔｏ）Ｍｇ＾２－ＡＴＰ酶具有水解ＡＴＰ活性,能量偶联的ＡＣ－ＭＡ荧光淬灭实验表明Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶水解ＡＴＰ时向膜内转移质子,建立跨膜质子梯度,跨膜质子梯度可以被电中性Ｋ＾＋／Ｈ＾＋离子载体Ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ消除,利用Ｈ＾＋敏感的ＢＣＥＣＦ荧光分子测定突触的ｐＨｉ变化,结果表明水解ＡＴＰ产生的质子转移突触体ｐＨｉ下降了光分子测定突触的ｐＨｉ变化,结果表示水解ＡＴＰ产生     

鸭肫平滑肌肌球蛋白的提纯及其ATP酶性质的研究

从鸭肫肌肉中分离纯化了平滑肌肌球蛋白,并对平滑肌肌球蛋白分子的亚单位组成和平滑肌肌球蛋白的ＡＴＰ酶性质进行了分析研究。鸭肫平滑肌肌蛋白的Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力与溶液的离子强度有关。在低于０．２０ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＬ浓度时,酶活力很低;大于０．３０ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＬ浓度时,酶活力较高,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶有两个最适ｐＨ值。Ｋ＾＋／ＥＤＴＡ－ＡＴＰ酶活力随ＫＣＬ浓度升高而增加。肌动蛋白激活的磷酸化肌球     

经渗透胁迫高梁根的质膜囊泡K~＋_－ATP酶及其运输特征

经ＰＥＧ－１０００处理的高粱根,用不连续蔗糖密度梯度制备获得反转密闭的纯化质膜囊泡,显示一种特殊的ＡＴＰ酶活力,它不同于Ｈ＋－ＡＴＰ酶,其最适ＰＨ为７．５,具有高ＡＴＰ亲和力和较低的Ｋ＋转运能力。环己酰亚胺和钒酸钠能抑制其活力,表明它是新合成的Ｐ－型ＡＴＰ酶。     

神经革苷脂GM3对肌质网Ca^2＋—ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ３参入肌质网膜后Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果表明：ＧＭ３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用。当参入的ＧＭ３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的激活作用最大。     

牛脑V型质子转运ATP酶复合体依赖于温度的活性变化

在ＫＣ１介质中牛脑Ｖ－型质子转运ＡＴＰ酶复合体活力温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图在３３℃附近呈现明显的折点,同样做其Ｎ－［１－芘］马来酰亚胺（Ｎ－［１－Ｐ］Ｍ）的荧光－温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图,发现其折点温度也为３３℃,当加入１００μｍｏｌ／Ｌ ＮＥＭ（Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ）,ＡＴＰ酶复合体活力部分被抑制后的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图折点下降为２７℃,加入０．７５－０．８５ｍｏｌ／Ｌ尿素则活力     

SeO_3~（2－）及SeO_3~（2－）和半胱氨酸或还原型谷胱甘肽联用对牛脑V

Ｓｅ_３~（２－）对牛脑Ｖ型质子转运ＡＴＰ酶复合体活力呈现明显的抑制作用。这种抑制作用具有对剂量和预保温时间的依赖关系,且不被稀释效应所恢复,但过量的ＤＴＴ可去除这种抑制作用。半胱氨酸对这种抑制作用呈双功能效应。低浓度时促进抑制作用,高浓度时部分恢复抑制作用。还原型谷胱甘肽与半胱氨酸有类似效应。但促进抑制作用没有半胱氨酸强,而恢复抑制作用却较半胱氨酸强。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影图谱表明,ＳｅＯ_３~（２－）和半脱氨酸优先结合在７０ｋＤ亚基上。并且验证了ＡＴＰ酶复合体的－ＳＨ基和ＳｅＯ_３~（２－）及半胱氨酸的－ＳＨ基以－Ｓ－Ｓｅ－Ｓ－键相连接。根据上述结果,讨论了７０ｋＤ亚基的－ＳＨ基及其相关的结构域涉及到ＡＴＰ酶的活性中心,７０ｋＤ亚基可能是ＡＴＰ酶复合体的水解活性亚基。     

铝和铝＋钙对小麦幼苗根尖质膜,液泡膜微囊ATP酶和膜流动性？…

研究了铝和铝＋＿钙对小麦功苗根尖质膜、液泡膜微囊Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及共动力学参数和膜流动性的影响。在质膜和液泡膜微囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾２＋－ＡＴＰ囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活笥和酶促反应的Ｖｍａｘ及膜流动性下降,而酶     

低温,高pH胁迫对水稻幼苗根系质膜,液泡膜ATP酶活性的影响

以耐冷性不同的两个水稻品种为材料,比较研究了幼苗根系质膜、液泡膜ＡＴＰ酶对低温（８℃）及高ｐＨ（８．０）胁迫的反应。结果表明：水稻根细胞质膜和液泡膜上均存在Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶,但活性远低于Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶。耐冷品种武育粳３号经低温（８℃）处理２ｄ,根系质膜和液泡膜Ｈ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶海性均明显升高,至冷处理１２ｄ,Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性有所下降,但仍与对照     

Mg~（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ＾２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ＾２＋者明显不同,前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中;在有Ｍｇ＾２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位,表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ＾２＋的促进作用,这进一步提示Ｍｇ＾２＋通过改变膜脂的物理状态促进线     

V型H~＋_－ATP酶的分子结构及其药理学意义

Ｖ型ＡＴＰ酶广泛存在于细胞内膜系统,如溶酶体,内膜体,高尔基体,分泌颗粒等,Ｖ－ＡＴＰ酶水解ＡＴＰ,建立跨膜质子电化学梯度（△￣μＨ￣＋）,酸化细胞内外环境。研究证明△￣μＨ￣＋和酸化作用为细胞的内吞、外泌、膜流和物质转运等生理生化反应提供了必需的条件。Ｖ－ＡＴＰ酶在生命活动中的重要性和它的实际意义,日益引起人们的兴趣与关注,是当前Ｈ￣－ＡＴＰ酶家族中一个异常活跃的研究分支。     

心钠素前体分子内调控对心肌Na^＋—K^＋—ATP酶的作用

目的：研究利钾尿肽及心钠素前体分子内调控作用对心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的作用。方法：将大鼠心肌匀浆后,分别加入利钾尿肽、心钠素以及利钾尿肽＋心钠素,用比色法测定Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶活性。将大鼠心脏悬挂于Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ灌流装置,分别以利钾尿肽、心钠素、利钾尿肽＋心钠素为灌流液,灌注心脏,用四道生理仪观测左心室内压、左心室收缩最大速率,左心室舒张最大速率,心率及冠脉流量。结果：心钠素虽然对Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶有抑制作用（抑制率２６．２％）,但是,与对照无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽显著抑制酶的活性（抑制率４６．５％,Ｐ＜０．０１）这种抑制作用可被心钠素抵消（抑制率１７．６％,Ｐ＞０．０５）。利钾尿肽可以增加左心室收缩和舒张最大速率以及左室内压,而这种强心作用可因心钠素的加入而消失或减弱。结论：利钾尿肽可以抑制心肌Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶的活性,产生强心作用,心钠素可以抵消以上作用。     

牛脑V型质子转运ATP酶复合体依赖于温度的活性变化

在ＫＣｌ介质中牛脑Ｖ－型质子转运ＡＴＰ酶复合体活力温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图在３３℃附近呈现明显的折点,同样做其Ｎ－［１－芘］马来酰亚胺（Ｎ－［１－Ｐ］Ｍ）的荧光－温度的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图,发现其折点温度也为３３℃,当加入１００μｍｏｌ／ＬＮＥＭ（Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ）,ＡＴＰ酶复合体活力部分被抑制后的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图折点下降为２７℃,加入０．７５－０．８５ｍｏｌ／Ｌ尿素则活力的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图的折点变为３０℃。加入６％（Ｖ／Ｖ）的乙醇后,活力的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图的折点上升为３８℃。加入ＮＥＭ,尿素和乙醇的内源荧光和Ｎ－［１－Ｐ］Ｍ标记的荧光测定,表明它们确实引起了牛脑Ｖ－型质子转运复合体构象的改变,这表明引起构象变化配基的加入,可改变牛脑Ｖ－型质子转运ＡＴＰ酶复合体的Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图折点温度,也说明牛脑Ｖ－型质子转运ＡＴＰ酶复合体Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图折点与酶复合体的构象直接相关。