几种蛋白酶活力测定新方法

几种蛋白酶活力测定新方法陈安和（西南师范大学生化教研室,重庆６３０７１５）关键词蛋白酶活力测定近年来,蛋白酶特别是丝氨酸蛋白酶及其抑制剂已成为研究热点。众多研究表明,蛋白酶在许多重要的生命活动过程中发挥着十分重要的作用。蛋白酶参与蛋白质的水解、消化、...     

蛋白水解酶活力测定新方法

蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟（吉林大学分子生学系．长春１３００２３）Ｇ．Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ,ＰａｉｓｌｅｙＵｎｉｖ,Ｓｃｏｔｌａｎｄ,Ｕ．Ｋ）本文研究了一种测定蛋白水解酶（Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ...     

脂肪酶活力测定研究进展

脂肪酶催化作用发生在油-水界面上,是一种典型的界面酶,因此其活力测定有别于其他的水相酶。如何准确测定酶活力的大小,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义。本文对脂肪酶检测的常用方法进行了综述与评价。     

Tricorn 蛋白水解酶

Tricom蛋白酶是一种超分子体系的蛋白水解酶,主要表现寡肽酶活性,现已基本弄清其组成、结构以及在蛋白质降解途径中的功能。     

木聚糖酶活力测定条件研究

用DNS法测木聚糖酶活力,分析测定条件对测定结果的影响。结果表明,在不同的条件下测定酶活力会得到不同的木聚糖酶活力测定值。其中,酶液用量、酶解反应的时间对测定结果的影响较大,酶液稀释度、DNS显色时间、DNS的用量,对测定结果也有一定的髟响。测定木聚糖酶活力的适宜条件为：酶液量/1％木聚糖液量1/9(V／V);酶解反应时间：10min;DNS用量2—2．5ml;DNS显色时间2—5min。     

鱼糜凝胶劣化现象相关蛋白水解酶

鱼糜凝胶劣化现象发生在鱼糜凝胶化过程中,导致鱼糜制品凝胶弹性下降,品质降低。研究表明,引起鱼糜凝胶劣化现象的原因是鱼糜内含的蛋白水解酶的作用。与该现象相关的蛋白水解酶类有肌浆型和肌原纤维结合型之分。大部分肌浆型蛋白水解酶为水溶性的,可以在鱼糜制备过程中漂洗去除。肌原纤维结合型蛋白酶不能通过漂洗有效去除,是引发鱼糜凝胶劣化现象的重要相关酶类。已证实的凝胶劣化相关肌原纤维结合型酶类包括丝氨酸型蛋白酶和溶酶体型组织蛋白酶。     

荧光发光测定AGPase活力方法初步建立及应用

腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活力传统上采用32P同位素标记反应底物来测定,但因测定条件的限制而极大地影响了其应用.该研究依据荧光素酶催化荧光素生成发光氧化荧光素的原理,在优化基本反应体系、确立反应体系ATP浓度和荧光强度线性关系等基础上,初步建立了以荧光发光反应测定AGPase活力的新方法,并运用新方法测定了含有不同glgC基因拷贝数菌株的AGPase活力.测定结果显示,不同菌株AGPase活力随glgC拷贝数不同存在显著差异,且其变化趋势与理论预期一致,即新方法可用于AGPase活力的体外测定,且具有更加安全、灵敏、简便和成本低的特点.     

蛋白激酶C活力的非同位素酶解测定法

在磷脂酰丝氨酸和Ca²⁺存在下,活化的蛋白激酶C以ATP为磷的供体使组蛋白H1磷酸化。用Dowex-1柱层析分离反应后的ADP与ATP,再用酸性磷酸酶水解ATP的磷酸酯键,测定磷的含量,建立了蛋白激酶C活力的非同位素酶解测定法。此法可靠易行。CV=5.2％。     

无花果蛋白酶在胍溶液中的分子折叠与活力变化研究

本文研究无花果蛋白酶（ＥＣ．３．４．４．１２）在不同浓度盐酸胍溶液中分子构象与活力变化关系。酶的内源荧光光谱,圆二色光谱与酶活力的变化表明：荧光光谱呈现二个明显的变化区域,低浓度胍（低于２ｍｏｌ／Ｌ）中,荧光发射峰基本不变,但荧光强度随胍浓度上升,随胍浓度断续增大（高于２ｍｏｌ／Ｌ）,酶的最大发射波长明显红移。当胍浓度低于１ｍｏｌ／Ｌ时,不仅不会使酶失活,反而使酶激活,当胍浓度高于１ｍｏｌ／Ｌ以上     

水稻籽粒成熟过程中淀粉合成及水解酶活力的变化

一.引言谷类作物在开花以后,籽粒中大量堆积淀粉,一个多月可以增加几十倍,占植物总干重三分之一以上。因为淀粉的经济价值大,以及累积速度高,这个变化一直受着研究工作者的注意。在这一个过程中,那些酶起着主要的作用,它们的活力如何在变化,成了一个重要的问题。ax 等(Bach,Oparin 和 Wihner 1927)及(1951)     

TTC法测定红豆杉细胞活力

取悬浮培养红豆杉细胞,加入TTC溶液及缓冲液,避光保存后,以蒸馏水洗细胞3次,再用乙醇使细胞完全脱色后,测波长485 nm处吸光值.结果以0.4%的TTC溶液,0.1 mol@L-1(pH 7.0)的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,25℃处理13～16 h为最适..     

应用正交旋转组合设计构建测定条件对木聚糖酶活力影响的数学模型

通过正交旋转试验,探讨了反应温度（X1）、pH值（X2）、反应时间（X3）、底物浓度（X4）、DNS用量（X5）5个测定条件对木聚糖酶活力（Y）测定结果的影响,并构建了测定条件对木聚糖酶活力影响的数学模型：Y=10．2950＋1．6563X1-0．0704X2＋0．3179X3＋1．7004X4-1．3413X5＋0．0669X1X2＋0．2094X1X3＋0．7631X1X4＋0．3301X1X5＋0．1256X2X3-0．0881X2X4＋0．1544X2X5＋0．2596X3X4＋0．1469X3X5-0．2594X4X5-0．4121X1^2-0．1258X2^2-0．2233X3^2-0．8358X1^2＋0．5217X3^2．实验结果表明：反应温度、底物浓度和DNS用量对木聚糖酶活力测定结果有极显著影响．     

花粉的保存及其生活力测定

花粉是种子植物的雄配子体,在有性繁殖中发挥着重要作用,采集的花粉和贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的鉴定,以估价花粉是否有授精能力,并掌握花粉的形态和生理特征,本文对花粉的采集与保存,花粉生活力的概念及花粉生活力的测定方法作了详细的介绍,并对各种方法的优缺点进行了讨论。     

超氧化物歧化酶两种邻苯三酚自氧化测定活力方法的比较

在同一反应条件下,以酵母SOD为原料,对2种邻苯三酚自氧化测定SOD的方法进行了比较,实验结果表明325 nm法测定的酶活力单位与420 nm法测定的酶活力单位的比值约为2.7,考察了不同浓度邻苯三酚对SOD活力的影响。     

用管碟法测定碱性蛋白酶活力

参照抗生素效价生物测定法,用管碟法测定碱性蛋白酶活力,可大大提高菌种筛选的工作效率。待测样品在２％酪蛋白平板上的水解圈直径被效正后,从标准曲线上可查得相应的酶活。管碟法测得的酶活与Ｆｏｌｉｎ法测得的酶活相差一般小于２０００ｕ／ｍｌ。管碟法测定酶活时,操作要求认真仔细,操作误差可使一样品的水解圈直径相差２．９ｍｍ,但一般误差在０．２～０．３ｍｍ,相应酶活误差小于１０００ｕ／ｍｌ。     

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的抑制作用

本文研究了慈姑和天花粉两种天然的蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的影响。结果显示:(1)在人精子获能期1.0×10~(-3)mol/L天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带田鼠卵子预先用抑制剂处理0.5h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5或1.0×10~(-3)mol/L时,精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂的浓度为1.0×10~(-4)mol/L时,作用不明显。(5)抑制剂不影响人精子的活动能力。这样看来,涉及精子穿透卵子的酶体系受到了蛋白酶抑制剂的影响。     

豌豆NAD激酶的提纯及活力测定

NAD激酶(ATP:NAD 2′-磷酸转移酶EC 2.7.1.23简称NADK)催化NAD磷酸化生成NADP,其活性随着酶的纯化而降低,其激活依赖于Ca~(2 )激活的钙调素(Calmod-ulin简称CaM),两者之间成剂量关系,因此,可用该酶定量CaM。活性CaM一般采用酶法[如环腺苷酸磷酸二酯酶(PDE)和红血球Ca~(2 )-ATP酶等]定量,但采用这类酶时,酶活性易受磷酯与脂