固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的构象变化及调节作用

应用园二色谱测定了粪产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ）谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）各构象,结果表明在Ｇｌｕ培养下α螺旋为２８％,β折叠为２２％,无规则卷曲占５０％;而在ＮＨ~＋_４培养下,三者相应为２０％,２０％,６０％。荧光光谱及付立叶红外光谱也证明,两种培养条件下ＧＳ的构象存在着差异。不同氮源对粪产碱菌ＧＳ的形成有显著的影响。高浓度ＮＨ~＋_４培养下ＧＳ合成受到阻遇,而Ｇｌｕ或低浓度ＮＨ~＋_４则对ＧＳ合成无明显的影响。ＮＨ~＋_４对固氮酶活性瞬间抑制可以被ＧＳ的抑制剂部分消除,但ＧＳ活性也受抑制。     

固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的分离纯化及其特性

联合固氮细菌粪产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ）Ａ１５０１菌体经超声破碎后,无细胞粗提液以ＰＥＧ－６０００分级沉淀,丙酮沉淀,再经蓝琼脂糖（ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６８）亲和层析分离、纯化。获得的纯谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和４－３０％梯度ＰＡＧＥ上均呈均一的一条带。ＧＳ亚基及整酶分子量分别为５５ｋＤ和６４５ｋＤ,亚基由４５６个氨基酸残基组成。ＧＳ的Ｋｍ值,在以Ｇｌｕ为氮源的介质中培养时分别为２０ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｇｌｕ）,５０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ）和４５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ~＋_４）;在以ＮＨ~＋_４为氮源的介质中培养时则分别为７０ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｇｌｕ）,４９ｍｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ）和８０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ~＋_４）,表明ＮＨ~＋_４培养下形成高度腺苷化的ＧＳ对Ｇｌｕ及ＮＨ~＋_４的亲和力有所下降。     

固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的分离纯化及其特性

联合固氮细菌粪产碱菌Ａ１５０１菌体经超声破碎后,无细胞粗提液以ＰＥＧ－６０００分级沉淀,丙酮沉淀,再经蓝球脂糖亲和层析分离、纯化。获得的纯谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和４－３０％梯度ＰＡＧＥ上均呈均一的一条带。ＧＳ亚基及整酶分子量分别为５５ＫＤ和６４５ｋＤ,亚基由４５６个氨基酸残基组成。ＧＳ的Ｋｍ值。在以Ｇｌｕ为源的介质中培养时分别为２０ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｇｌｕ）,５０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ     

不同氮源对小麦幼苗谷氨酰胺合成酶的影响

利用ＤＥＡＥ－纤维素柱层析、酶活性测定、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 分子杂交等技术,研究了小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）幼苗的根、叶和离体叶在不同氮源培养条件下谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性和同工酶变化, 以及不同氮源对ＧＳ基因转录－ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的影响． 同时与硝酸还原酶（ＮＲ）活性进行比较, 结果表明∶当以ＮＨ＋４ 作唯一氮源时,小麦幼苗根谷氨酰胺合成酶（ＧＳｒ）和叶细胞质谷氨酰胺合成酶（ＧＳ１）活性要比以ＮＯ－３ 作唯一氮源的高．当以ＮＯ－３ 为唯一氮源时, ＮＯ－３ 则促进完整叶片和离体叶片叶绿体谷氨酰胺合成酶（ＧＳ２）活性． 从转录水平上看,ＮＨ＋４ 促进根ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成,而ＮＯ－３ 促进叶ＧＳ－ｍ ＲＮＡ 的合成     

N_2和NH_4~＋培养下粪产碱菌固氮酶铁蛋白圆二色谱及热力学特性比较

Ｎ２和ＮＨ培养下粪产碱菌固氮酶铁蛋白（分别为Ａｆ２和Ａｆ＊２）的氧化态和还原态的ＣＤ谱及ＭＣＤ谱存在明显差异。还原态Ａｆ２与Ａｆ＊２在２１０ｎｍ附近的ＭＣＤ谱完全不同,但它们的氧化态ＭＣＤ谱相同。热力学测定结果表明．在２９８°Ｋ,１．０１３×１０５Ｐａ下,Ａｆ２与ＭｇＡＴＰ饱合络合时的培（△Ｈ°）变化为－２７．０ｋＪ／ｍｏｌ,自由能（△Ｇ°）变化则为－２０．８ｋＪ／ｍｏｌ．熵（△Ｓ°）变４也为－２０．６Ｊｍｏｌ－１Ｋ－１。而Ａｆ＊２与ＭｇＡＴＰ饱合络合时的烂变化为－４４．３５ｋＪ／ｍｏｌ,自由能变化为一２０．４ｋＪ／ｍｏｌ,熵变化为－７９．９Ｊｍｏｌ－１Ｋ－１。Ａｆ２与ＭｇＡＴＰ络合后再与Ｎ２培养的钼铁蛋白反应为吸热反应,而Ａｆ＊２与ＭｇＡＴＰ络合后再与ＮＨ培养的钼铁蛋白反应为放热反应。     

铵培养的粪产碱菌（Alcaligenes faecalis）中固氮酶的生物合成

粪产碱菌A—15的氮素同化途径在铵培养下以GDH途径为主,而氮培养下则以GS/GOGAT途径为主,DEAE—纤维素层析,SDS—PAGE及免疫学试验均证明,粪产碱菌在铵浓度高达30mmol/L时仍有固氮酶合成,但没有固氮活性。铵和氮培养两者细菌粗提液在电泳条带上有些差异。铵培养的粪产碱菌合成的固氮酶,在解阻遏后,仍可出现固氮活性。     

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离弛化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶,经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达５０％,并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０,ＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９最适作用温度为５０℃,最适作用,ＰＨ为７．４在４０℃以下热稳定性良好,ＰＨ４．５－９．５范围内稳定,重金属离子Ｆｅ＾３＋,Ｚｎ＾２＋,Ｃｏ＾２＋,Ｈｇ＾２＋,Ｎｉ＾２＋Ａｇ＾＋,Ｃｕ     

氨对脑细胞胞浆游离钙含量的影响

目的与方法：采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ探针技术观察ＮＨ４Ｃｌ对离体急性分离之Ｗｉｓｔａｒ乳鼠大脑细胞胞头游离钙「Ｃａ＾２＋」ｉ含量的影响。结果：ＮＨ４＾＋浓度为２．５ｍｍｏｌ／Ｌ时脑细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ含量升高。在一定范围内,随着ＮＨ４＾＋浓度的加大,细胞内Ｃａ＾２＋持续升高。ＮＨ４＾＋的升钙作用主要被Ｎｉｃａｒｄｉｐｉｎｅ所阴断,其变化特征类以ＫＣｌ。结论：ＮＨ４＾＋主要通过影响电压依赖性钙离子通     

NaCl对水稻谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的胁迫作用

在ＮａＣｌ的胁迫下,水稻幼苗根和叶的谷氨酸合酶和谷氨酸脱氢酶的活性随着营养液中的ＮａＣｌ浓度的升高而降低;游离ＮＨ４＾＋在叶中积累,在根中未见明显变化。与根相比,叶对ＮａＣｌ的胁迫作用更为敏感。叶的ＮＡＤＨ－ＧＯＧＡＴ和ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性在ＮａＣｌ胁迫降低的程度明显大于根。无论是否有ＮａＣｌ存在,根的ＮＡＤＨ－ＧＤＨ活性明显高于叶。ＧＳ／ＧＤＨ比值分析提示,对对照下,根中的ＮＨ４＾存在,根的ＮＡ     

黑曲霉生产β—葡萄糖苷酶发酵条件的研究

经多项式回归分析,研究了不同浓度Ｎ源、Ｃ源、无机盐等对酶产量的影响,确定出最佳培养基配方为：麸皮４．９％,（ＮＨ４）２ＳＯ４０．４％,ＫＨ２ＰＯ４０．２９％,ＣａＣｌ２０．０５％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０４％,ＦｅＳＯ４·７５ｍｇ·Ｌ＾－ＺｎＣｌ２１．４ｍｇ·Ｌ＾－,０．２％油酸钠。并对培养温度１时间、培养基初妈ｐＨ、通气量、接种量、接种方式等培养条件进行优化,使黑曲霉生产β－葡萄糖苷酶的产量由     

细菌产木聚糖酶发酵条件的研究*

研究了碳源、氮源以及其他因子对木聚糖酶高产菌ＷＬＵＮ０２４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）产酶的影响,结果表明在麸皮６ｇ／Ｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．８ｇ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．４ｇ／Ｌ、接种量５％－１０％的条件下,３７℃培养３６ｈ,其木聚糖酶活力可达６００ＩＵ／ｍＬ。同时研究了在较优条件下该菌的摇瓶产酶曲线。     

产碱菌麦芽四糖淀粉酶的底物特异性

产碱菌Ｇ４Ａ仅能水解由α－１,４－葡萄糖苷键连接的麦芽寡糖、淀粉或糖原。淀粉和糖原的水解产物为Ｇ４;麦芽寡糖Ｇ５,Ｇ６和Ｇ７的水解产物分别为Ｇ４＋Ｇ、Ｇ４＋Ｇ２和Ｇ４＋Ｇ３,水解速度为Ｇ５〈Ｇ６〈Ｇ７。直链淀粉的水解限度为１００％,其他淀粉为６０￣７４％,糖原仅３４％,表明该酶为从麦芽寡糖、淀粉或糖原非还原末端顺序切割第４个α－１,４－葡萄糖苷键的外切型淀粉酶。Ｇ４Ａ对Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７及直链淀粉、     

不同形态N素对水曲柳幼苗生长的影响

在温室内用砂培的方法研究了ＮＯ＾－３－Ｎ、ＮＨ＾＋４－Ｎ及其不同配比对水曲柳（Ｆｒａｘｉｎｕｓ ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ）幼苗生长的影响。结果表明，水曲柳幼苗在营养液ＮＯ＾－３－Ｎ：ＮＨ＾＋４－Ｎ为７５：２５时生长最好，营养液中ＮＨ＾＋４－Ｎ比例继续增加则生长下降。过量的ＮＨ＾＋４－Ｎ可抑制水曲柳幼苗根系生长，降低幼苗的地下／地上比。营养液中ＮＨ＾＋４－Ｎ比例增加，水曲柳幼苗的净光合速率下降，体内Ｐ     

粘质赛氏菌胞外蛋白酶的提取,纯化及部分性质研究

经过硫酸铵３０％￣５０％分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收集可达５３％,并制备了酶的结晶。该酶以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量约为８１０００,该酶的最适ｐＨ为７．０,最适温度为４５℃,Ｚｎ＾＋、Ｍｎ＾＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｃｏ＾２＋等重金属离子不同程度地抑制酶活性。     

主要营养成分对悬浮培养玫瑰茄细胞生长和花青素合成的影响

本文研究了培养基中碳源和氮源变化对悬浮培养玫瑰茄细胞生长和花青素合成的影响。在８种不同的碳源中,麦芽糖有利于花青素的积累,而蔗糖和葡萄糖适合细胞生长,并有较高的花青素产率。在１％～１０％蔗糖浓度范围内,４％浓度下细胞生长和花青素产率最高,而６％浓度下细胞花青素含量最高,高渗环境较有利于细胞花青素的积累。１３５ｍＭ的氮源总量已足够维持玫瑰茄细胞生长和花青素合成,氮源总量增加对细胞代谢有抑制作用。ＮＨ＋４对细胞有显著抑制作用。总量１３５ｍＭ,ＮＯ－３与ＮＨ＋４比例２５∶２和２３∶４时细胞生长和花青素合成最佳。     

离子注入改良维生素C二步发酵混合菌研究：（II）2—酮基—L—古龙酸高产？…

考察了不同碳氮源、碳氮比、金属离子和有机溶剂等以及环境因子,如起始ｐＨ,通气量和种龄等对高产菌系ＩＰＰＭ－１０２８发酵水平的影响。实验结果表明,适宜的碳氮比对产酸有明显的影响;在培养基中加入适量的金属离子如Ｍｎ＾２＋、Ｃｅ＾３＋、Ｃｅ＾４＋或Ｌａ＾２＋以及增加通气量均有利于２－ＫＬＧ的产生。二甲苯和乙酸己酯对产酸也有一定的刺激作用。发酵周期一般为６０￣６４ｈ,２－ＫＬＧ浓度可达７６ｇ／ｌ左右,转化     

外加氮源对杉木叶凋落物分解及土壤养分淋失的影响

采用原位（Ｉｎ ｓｉｔｕ）模拟实验方法研究了外加Ｎ源对杉木叶凋落物分解及土壤养分淋失的影响,结果表明,施加ＮＨ＾＋４－Ｎ时,杉木叶凋落物的失重率与对照（未加任何Ｎ的处理）相比,没有差异：而施加ＮＯ＾－１－Ｎ时,使杉木叶凋落物分解速率显著提高（ｐ＝０．０５,达１０％以上,与施加ＮＨ＾＋４－Ｎ相比,施加ＮＯ＾－３－Ｎ明显促进了杉木叶凋落物的分解（ｐ＝０．０５）。施加ＮＨ＾＋４－Ｎ和ＮＯ３＾－－Ｎ会产生     

神经系统内高亲和谷氨酸摄取及其调节影响因素

神经系统内高亲和谷氨酸１（Ｇｌｕ）摄取是Ｎａ＾＋依赖性的,由Ｇｌｕ能神经末梢及胶质细胞膜上的Ｇｌｕ转运蛋白介导。已克隆得到四种Ｇｌｕ转运蛋白,分别为ＧＬＡＳＴ１、ＧＬＵＴ１、ＥＡＡＣ１及ＥＡＡＴ４。它们的所在部位、分布及药理学性质都有自己的特点。花生四烯酸、一氧化氮、氧自由基、蛋白激酶、细胞因子及生长因子等多种因素能调节或影响高亲和Ｇｌｕ摄取。很显然这些因素的调节或影响效应具有一定生理及病理生理意     

小鼠4.5S RNA逆转座子对Luc基因表达的影响

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从小鼠肝脏组织总ＲＮＡ中扩增出４．５ＳＲＮＡ的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ被克隆到ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）质粒上,酶切鉴定并测序。然后将该序列插入以Ｌｕｃ基因作为报道基因的表达载体ｐＳＶｌｕｃ２０的ＰｖｕⅡ位点,构建了含４．２ＳＲＮＡ逆转座子的表达载体ｐＳＶｌｕｃ２０－４．５Ｓ。脂质转染法将表达载体导入小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１、ＳＰ２／０和人乳腺癌细胞Ｂｃａ６１。结果表明,小鼠４．５ＳＲＮ     

L—赖氨酸产生菌FH128菌株的研究：（Ⅰ）FH菌株的选育及摇瓶发酵

以赖氨酸产生菌Ａ１１１（ＨＳ＾－,ＡＥＣ＾ｒ）为出发株,经化学诱变剂ＭＮＮＧ（Ｎ－’－硝基－Ｎ－亚硝基胍）及单氟醋酸处理获得单氟生突变株Ｆ７９,摇瓶发酵产Ｌ－赖氨酸盐酸盐７．０％－７．５％,对糖转化率３８％－４０％,分别比Ａ１１１株提高红２５％及２０％。