反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒,导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用,结果表明,ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化,在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱,部分地抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达呈特异性抑制作用。     

人肝细胞癌中N－ras、c－myc癌基因的表达──原位分子杂交和免疫组织化学研究

为了明确Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ癌基因在人肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达及其形态学分布,我们对３８例石蜡包埋的ＨＣＣ（其中３３例带有癌周肝组织）标本进行了原位核酸杂交和免疫组化研究。结果表明,ＨＣＣ及癌周肝组织中Ｎ－ｒａｓ表达阳性率分别为４２％和３９％;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ阳性表达率分别为４７％和３６％;ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性率分别为５３％和３９％。ＨＣＣ与癌周肝之间Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及ｃ－ｍｙｃ蛋白表达水平无显著差别;ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及蛋白阳性强度也无显著差别,其形态学分布基本一致,主要集中于癌细胞和癌周肝中的部分高度增生结节;Ｎ－ｒａｓ表达增强主要见于癌细胞、癌周肝中的高度增生结节、小细胞性不典型增生及少部分肝小多角细胞。它们与ＨＢｘＡｇ表达之间无明确的对应关系。上述结果显示,ＨＣＣ中Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ表达都显著增强,它们可能是人ＨＣＣ发生中较晚期的事件,而Ｎ－ｒａｓ表达增强早于ｃ－ｍｙｃ癌基因活化。     

毛喉萜对人胃癌细胞BGC－823中蛋白激酶C及其亚类的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型,研究了毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对胃癌细胞中蛋白激酶Ｃ活性及其亚类基因表达的作用,同时也观察了毛喉萜对癌基因ｃ－ｊｕｎ及抑癌基因ｐ５３表达的影响．结果表明,２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ毛喉萜处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ,细胞质、膜和细胞核ＰＫＣ活性下降,ＰＫＣ亚类β,γ基因表达被抑制,癌基因ｃ－ｊｕｎ的表达也明显降低,而抑癌基因ｐ５３表达升高,上述变化可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖等生理效应的重要分子事件。     

毛喉萜抑制人胃癌细胞BGC－823增殖与ras基因表达相关性研究

毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对人胄癌细胞ＢＧＣ－８２３增殖有明显抑制作用,具药物剂量和作用时间之依赖性。剂量为２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ之毛喉萜使胃癌细胞在软琼脂中形成集落的能力显著降低;癌基因ｃ－Ｈａ－ｒａｓ之表达明显被抑制,细胞核中与ｒａｓ基因上游调控区２．５ｋｂ片段结合的三种蛋白结合能力下降。联系到以同样浓度药物处理胃癌细胞７２ｈ,细胞质、膜与细胞核中蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性均下降的现象,可能ＰＫＣ活性下降与Ｈａ－ｒａｓ基因上游片段２．５ｋｂ结合蛋白之结合能力下降存在相关性,ＰＫＣ可能通过影响ＤＮＡ结合蛋白的磷酸化作用,导致了Ｈａ－ｒａｓ基因表达之被阻抑。而ｒａｓ基因表达下降可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖的一个重要分子事件。     

新型生长抑肽对成纤维细胞的DNA合成及某些癌基因表达的影响

从细胞水平和基因水平研究了新型生长抑肽（ＥＰＰ）的生物学作用,研究表明：ＥＰＰ对ＮＣ３Ｈ１０及ＴＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成均有抑制作用,当ＥＰＰ与ｃＡＭＰ的位点选择性类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ共同作用时,其对ＮＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成的抑制作用消失,而对ＴＣ３Ｈ１０仍具有抑制作用;核酸杂交分析表明,ＥＰＰ可以抑制ｃ－ｆｏｓ、ｎｅｕ、ｋｉ－ｒａｓ三类癌基因在转化细胞中的表达。证明了ＥＰＰ对转化细胞的生长具有一定的抑制效应,且与８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ联合使用时其效果更佳。     

新型生长抑肽对成纤维细胞的DNA合成及某些癌基因表达的影响

从细胞水平和基国水平研究了新型生长抑肽（ＥＰＰ）的生物学作用，研究表明：ＥＰＰ对ＮＣ３Ｈ１０及ＴＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成均有抑制作用，当ＥＰＰ与ｃＡＭＰ的位点选择必类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ共同作用时，其对ＮＣ３Ｈ１０细胞的ＤＮＡ合成的抑制作用消失，而对ＴＣ３Ｈ１０仍具有抑制作用；核酸杂交分析表明，ＥＰＰ可以抑制ｃ－ｆｏｓ，ｎｅｕ，ｋｉ－ｒａｓ三类癌基因在转化中的表达，证明了ＥＰＰ对转化细胞的生长     

外源性神经节苷脂GM3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

通过苔酚蓝染色细胞发现,外源性ＧＭ３能明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长,在ＧＭ３处理３ｄ时,出现明显差异,通过ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析发现,外源性ＧＭ３可明显影响人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ四种癌基因的ｍＲＮＡ表达,未经ＧＭ３处理的细胞中没有检测到ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ,但ｃ－ｊｕｎ微量表达,并有ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ的高     

重组RA—538及反义c—myc腺病毒对人胃癌,食管癌和bcl—2高表达细胞系的作用

本课题研究ＲＡ５３８、反义c-ymc重组腺病毒对人胃癌（ＳＧＣ７９０１）、食管癌（Ｅ Ｃ１０９、ＥＣ８７１２）、正常人胚肺２ＢＳ（２ＢＳ）及ｂｃｌ－２高表达细胞第的体仙外生物学作用及其分子机制。结果显示Ａｄ－ＲＡ５３８及Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ对ＳＧＣ７９０１细胞体内外均具有明显的生长抑制及凋亡诱导作用,并能抑制其ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２、ｃｙｃｌｉｎＤ１基因的表达及刺激ｂａｘ基因的表达。对ＥＣ１０９、ＥＣ８     

稀土化合物氯化亚鈰对人肺癌细胞PG、人胃癌细胞BGC-823的作用

 以人肺癌细胞 Ｐ Ｇ 和人胃癌细胞 Ｂ Ｇ Ｃ ８２３ 作为研究对象,利用 Ｍ Ｔ Ｔ 测定、３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入、流式细胞术、软琼脂培养、 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、 Ｗ ｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 等实验方法,观察了稀土化合物氯化亚鈰（ Ｃｅ Ｃｌ３）抑癌作用．结果表明, Ｃｅ Ｃｌ３ 浓度为 ００５ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ,０１ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ,０５ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ和 １ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ可抑制 Ｐ Ｇ 细胞的增殖;浓度为 ０５ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ和 １ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ可抑制 Ｐ Ｇ 细胞 Ｄ Ｎ Ａ 的合成,其 Ｇ１ 期细胞比例增加而 Ｓ期细胞比例减少,在软琼脂中的生长能力降低,原癌基因 ｃ ｍ ｙｃ 和 ｃ ｒａｓ 表达降低,ｐ１６ 蛋白质表达降低．而同样浓度的 Ｃｅ Ｃｌ３ 对 Ｂ Ｇ Ｃ ８２３ 细胞和正常细胞 ２ Ｂ Ｓ未见影响．提示：稀土化合物抑制肺癌细胞 Ｐ Ｇ 的增殖以及降低其恶性度的作用机制可能与一些增殖相关的原癌基因的表达和细胞周期的调控有关,其确切的机理还需进一步的研究．     

端粒酶RNA的反义cDNA对乳腺癌细胞端区长度的影响

应用反义核酸技术,将端粒酶ＲＮＡ的ｃＤＮＡ反向插入整合型腺病毒载体ｐＡｄＥ１ＣＭＶＩＴＲＥＸｎｅｏ,与ｐＢ－ＨＧ１１Ｘ共转染２９３细胞反获得反义重组病毒。将此反义重组病毒感染乳腺癌细胞ＭＣＦ－７后,使细胞端区长度缩短。     

人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ 是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ,编码一个ＲＲＭ ＲＮＡ 结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ 的全编码区用ＰＣＲ扩增后,克隆到ｐＥＴ３０ａ＋ 表达载体中,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达,表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％ ．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ 端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ,采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ 结合活性及其所结合的ＲＮＡ 性质,将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ结合,发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ （Ａ）结合,结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后,ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．     

Forskolin对放射性转化细胞TGF基因及部分癌基因表达的影响

＾３Ｈ－ＴｄＲ放射性转化细胞经１×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ Ｆｏｓｋｏｌｉｎ处理２４ｈ后,ＴＧＦａ,ｃ－ｍｙｃ,ｃ－Ｋ－ｒａｓ基因的ｍＲＮＡ表达下降;ＴＧＦβ,ｃ－ｆｏｓ基因表达无明显变化。非转化细胞经相同条件处理,ＴＧＦａ,ＴＧＦβ,ｃ－ｍｙｃ及ｃ－Ｋ－ｒａｓ基因表达无显著改变。提示：Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ介导的转化细胞的生长抑制作用与ＴＧＦａ,ｃ－ｍｙｃ,ｃ－Ｋ－ｒａｓ基因的转录表达下降有关。     

胸苷激酶基因治疗胃癌的体外实验

将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ, ＧＣＶ）选择性杀死肿瘤细胞．构建了含胸苷激酶与潮霉素磷酸转移酶（ｈｐｈ）融和基因（ＨｙｔＫ）的真核表达载体ＬＸｐｓｐ－ＨｙｔＫ．以脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）为介导,将这种质粒与仅含潮霉素Ｂ基因的质粒ＬＸＳＨ 分别转染胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,用６０ Ｕ／ｍ ｌ潮霉素Ｂ进行筛选,得到了可稳定传代的阳性克隆,分别命名为ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 和ＢＧＣ－Ｈｙ．三种细胞的生长曲线无明显差别．用不同浓度的ＧＣＶ 分别作用于ＢＧＣ－ＨｙｔＫ, ＢＧＣ－Ｈｙ 及ＢＧＣ－８２３,０．０２～２００ μｇ／ｍ ｌ 的ＧＣＶ 对ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 细胞有明显的杀伤作用（ＩＣ５０＝ ０．０２ μｇ／ｍ ｌ）,而对另外两种细胞几乎无毒性作用（ＩＣ５０＞ ２００μｇ／ｍ ｌ）．２０ μｇ／ｍ ｌＧＣＶ 作用９６ ｈ 后,仅存在２０％ 的ＢＧＣ－ＨｙｔＫ 就可使周围的大部分ＨＳＶ－ｔｋ－ 的肿瘤细胞死亡,说明存在较显著的“旁观者效应”     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ｃＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动子下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反义ＲＮＡ载体．将其用电击法导入ＣＤ４４＋的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地抑制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达．ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响．将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

在建立大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）体外培养方法的基础上,通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验,ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响．结果表明,ｂＦＧＦ作用于ＭＣ１８ｈ,ＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入率明显增加（Ｐ＜０．０５）,２４ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１）;ｂＦＧＦ显著诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达,其表达活性分别于３０ｍｉｎ和１ｈ达到高峰．提示ｂＦＧＦ是ＭＣ的强效丝裂原,其对ＭＣＤＮＡ合成的促进作用与诱导原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达有关．     

ras和c-erbB癌基因在特发性肺间质纤维化中的表达

采用原位分子杂交技术和免疫组织化学方法,对８例临床与肺组织学确诊的特发性肺间质纤维化（ＩＰＦ）病人的肺活检组织及７例正常肺组织进行了ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌基因及其产物的检测。结果：ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１在６／８例ＩＰＦ肺组织中呈阳性反应;５／８例ＩＰＦ肺组织ｃ－ｅｒｂＢ－２显免疫阳性反应,而在７例正常肺组织Ｐ２１及ｃ－ｅｒｂＢ－２均无明显表达,原位杂交结果显示ＩＰＦ肺组织没有明显ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌基因的ＤＮＡ扩增提示ＩＰＦ的病变过程与ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ癌蛋白表达增强有关     

反义癌基因c－jun对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

构建可表达原癌基因ｃ－ｊｕｎ正义和反义ＲＮＡ的真核细胞表达载体,将其导入体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）后,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析证实,两种插入方向的ｃｊｕｎ基因均在ＶＳＭＣ中大量表达;￣３Ｈ－ＴｄＲ参入实验表明,ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ的增殖具有显著抑制作用．提示用反义核酸抑制ｃ－ｊｕｎ表达对治疗某些由于ＶＳＭＣ增殖所引起的心血管病可能具有一定意义．     

erbB-2表达抑制与EGF对p21、p53基因转录活性的促进

原癌基因ｅｒｂＢ－２的异常表达存在于人类多种肿瘤中,与肿瘤的发生、发展密切相关［１］．我们曾构建了反义ｅｒｂＢ－２逆转录病毒重组载体,将其转染存在该基因异常表达的人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３,达到了特异抑制ｅｒｂＢ－２表达、抑制瘤细胞恶性增殖并部分阻断...     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾小球系膜细胞原癌基因c—fos和c—…

在建立大鼠肾小球系膜细胞体外培养方法的基础上,通过＾３Ｈ－ＴｄＲ参入实验,ＲＮＡ印迹分析和斑点杂交观察ｂＦＧＦ对ＭＣ ＤＮＡ合成及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。