BsNPV感染油桐尺蠖及Bs484细胞的酯酶分析

本文使用聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层扫描技术测定了油桐尺蠖Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ和Ｂｓ４８４细胞感染核型多角体病毒后的酯酶（ＥＳＴ）含量及类型的变化。结果表明,油桐尺蠖中肠ＦＳＴ的含量和类型在病毒感染８小时后就有明显的改变,随着感染时间延长,这二项指标都有较大的变化。而Ｂｓ４８４细胞的ＥＳＴ含量变化开始于病毒感染后３小时,细胞ＥＳＴ的类型则无改变。     

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的研究

本文报道利用油桐尺蠖核型多角体病毒感染处于不同培养基及不同培养时间的Ｂｓ４８４细胞的部分感染效果和特征。结果表明,细胞培养基的类型和细胞传代后的时间对病毒感染率和多角体产量以及其它感染特征都有比较明显的影响;经过比较,处于Ｇｒａｃｅ培养基组的传你后三天的Ｂｓ４８４细胞是一个理想ＢｓＮＰＶ感染受试系统。同时发现,健康的油桐尺蠖血淋巴具有提高细胞活性及病毒感染效果的作用。     

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的增殖与病理研究

用油桐尺蠖核型多角体病毒（ＢｓＮＰＶ）感染Ｂｓ４８４细胞,对感染后病毒增殖的部分性质及细胞病理变化进行了研究。结果表明：１．病毒子代的增殖在感染后的不同时间具有不同的变化形式,且增殖量与感染剂量具有一定程度的相关,２．病毒感染细胞后１２小时开始在培养物上清检测到明显的胞外病毒粒子;３．就ＢｓＮＰＶ的增殖而言,２４～２６℃是其最佳发育温度;４．病毒感染细胞后的明显病变特征是核内充满多用体,细胞堆积以及细胞体积膨大,同时观察到二类感染细胞,一种核内含较多的多角体,另一种核内则只有几个多用体。     

油桐尺蠖血球细胞系的建立及其对多角体病毒敏感性的测定

建立了稳定生长的油桐尺蠖幼虫血球细胞系,称为WIV-BS-02细胞系,原代培养始于1981年4月,至今已传至第83代,细胞系的群体倍增时间为48～72小时,形状有圆形和梭形两种,具有鳞翅目昆虫的典型染鱼体。比较了6种培养液和3种培养温度对细胞生长的影响,观察了同源油桐尺蠖核型多角体病毒感染后,光学显微镜下的细胞病理变化及电镜下病毒的形态发生,测定了细胞培养物对油桐尺蠖的体外培养细胞和幼虫的感染性。     

不同温度对油桐尺蠖核型多角体病毒在卵巢细胞系中增殖的影响

本试验用油桐尺蠖核型乡角体病毒(Buzura Suppressaria Nuclear Polyhedro-sis Virus)感染油桐尺蠖卵巢细胞系,分别置于0℃、15℃、20℃、26℃、28℃、30℃、37℃下静止培养,观察细胞病理变化,测定细胞的感染百分率和多角体含量。试验结果表明,不同温度对病毒的感染率及其在细胞中复制有明显的影响。26℃是油桐尺蠖核型多角体病毒感染卵巢细胞并形成多角体的最适培养温度,感染率最高,多角体含量也最多。培养温度过低或过高,多角体都不能在细胞内复制。     

油桐尺蠖核型多角体病毒在Bs484细胞中的感染特性研究

本文研究了油桐尺蠖核型多角体病毒(简称BsNPV)在油桐尺蠖成虫卵巢细胞系(Bs484)中的以下感染特性:1.病毒接种传代3-4天的细胞时,病毒感染率最高;2.病毒按种量在一定范围内与感染细胞的多角体总产量平行;3.病毒在细胞中连续传代七次后其滴度无明显变化;4,病毒基因组在感染细胞后6小时左右开始合成,并于感染后14小时达到最大。此外,本实验还发展了一种用于检测感染细胞中的病毒核酸的简便方法。     

Epstein-Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染细胞的形态特征发生改变。把ＥＢ病毒感染细胞接种在裸鼠皮下,每周注射ＴＰＡ,可诱导细胞在裸鼠体内形成肿瘤。经组织病理检查确诊,肿瘤为低分化上皮细胞癌。杂交试验证明,肿瘤组织细胞中有ＥＢ病毒ＥＢＥＲｓ存在。上述结果表明,ＥＢ病毒在ＴＰＡ协同作用下,可诱导永生化上皮细胞恶性转化。     

Epsten—Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ＰＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加,。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染的形态特征发生改变。把Ｅ     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位

用ｐＵＣ１９质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒（Ａｇｒｏｌｉｓｓｅｇｅｔｕｍｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,简称ＡｓＧＶ）ＤＮＡＰｓｔＩ－Ｄ．Ｅ．Ｆ．Ｇ．Ｈ．Ｊ．Ｋ．等７个片段。以［￣（３２）Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的油桐尺蠖核型多角体病毒（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａｎｕｃｌｃａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ简称ＢｓＮＰＶ）多角体蛋白基因为探针,在３７℃条件下对ＡｓＧＶ）颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于ＢｓｌⅡ－Ｓ或ＴＰｓＴＩ－Ａ或Ｂ和ＥｃｉＲＩ－Ａ片段上。     

人类疱疹病毒7型体外生长特点的研究

研究了人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ－７）南京株ＹＹ５在脐血单个核细胞（ＣＢＭＣｓ）及ＳＵＰＴ１细胞株上生长特点。观察病毒感染细胞后不同时间病变效应程度,记数死亡细胞百分率,间接免疫荧光染色记数抗原表达阳性细胞数,并用透射电镜观察病毒感染细胞超微结构变化及病毒复制不同时期的特点。结果发现：ＨＨＶ－７在ＣＢＭＣｓ及ＳＵＰＴ１上出现ＣＰＥ时间迟于ＨＨＶ－６,且ＣＰＥ程度也低于ＨＨＶ－６;ＨＨＶ－７在ＳＵＰＴ     

虎斑颈槽蛇胸腺APUD细胞的免疫组织化学观察

虎斑颈槽蛇胸腺ＡＰＵＤ细胞的免疫组织化学观察ＴＨＥＩＭＭＵＮＯＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＴＨＹＭＩＣＡＰＵＤＣＥＬＬＳＩＮＴＨＥＳＮＡＫＥＲＨＡＢＤＯＰＨＩＳＴＩＧＲＩＮＡＫｅｙｗｏｒｄｓＲｈａｄｂｄｏｐｈｉｓｔｉｇｒ...     

单纯疱疹病毒感染细胞内环核苷酸含量的改变

用单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ型Sm44株和Ⅱ型333株感染非洲绿猴肾细胞系(Vero细胞),观察感染细胞中cAMP和cGMP含量的改变。病毒感染量均为0.5TCID50/细胞,观察周期为36小时(从接种病毒到CPE达++++),在感染后0、2、8、12、24、36小时分别收获细胞,以放射免疫法测定细胞内环磷酸核苷的含量改变。结果Ⅰ型、Ⅱ型HSV感染后在全部6个观察时期,细胞内的cAMP含量始终是升高的。HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ组的平均cAMP含量都明显高于正常细胞(P<0.05和P<0.02)。cGMP和cAMP/cGMP的变化不显著(表1)。     

GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究

将构建好的可表达ＧＳＴ融合蛋白的重组病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ＾－－ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８感染Ｓｆ９细胞,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,结果显示５３ｋＤａ的融合蛋白（ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８）呈不溶状态。在原有裂解液的基础上,加固体十二烷基肌氨酸钠致终浓度１．５％,并将Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００的比例由１％提高到２％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示至少有１／     

油桐尺蠖核型多角体病毒的空斑测定

在油桐尺蠖卵巢细胞系上对油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)进行了空斑测定。用此方法测定了BsNPV的感染力,并将所得的结果与其TCID_(50)进行比较,结果显示这两种方法在测定病毒感染力时敏感性相似。     

EB病毒致瘤的分子机制

ＥＢ病毒是一种ＤＮＡ肿瘤病毒,感染人类可引起鼻咽癌、Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤和移植后平滑肌肿瘤,也与胃癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌的发生有一定关系。近年来对ＥＢ病毒感染与肿瘤发生之间的关系报道颇多,本文着重介绍ＥＢ病毒感染与肿瘤发生的分子机制。     

油桐尺蠖核型多角体病毒的流行病学观察

本文报道油桐尺蠖核型多角体病毒(简称BsNPV),用人工散布在茶园中引起油桐尺蠖幼虫患病死亡。并在使用过BsNPV的茶园中作连续调查,观察油桐尺蠖核型多角体病毒在油桐尺蠖种群中的持效和扩散途径,结果证明:施用BsNPV后三个月乃至一年,使油桐尺蠖幼虫死亡率达94～63.8％。油桐尺蠖成虫所产的卵在扫描电镜下观察可见到多角体附着在卵的表面。     

EB病毒相关疾病与免疫应答

ＥＢ病毒感染引起的相关疾病有传染性单核细胞增多症、Ｘ连锁淋巴细胞增殖综合征、伯基特淋巴瘤、鼻咽癌、移植后淋巴细胞增殖病、腮腺癌、霍奇金病等。针对ＥＢ病毒膜抗原ｇｐ８５抗体有中和作用。针对ｇｐ３５０抗原的抗体与抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用有关。在限制ＥＢ病毒感染的Ｂ细胞增殖过程中,ＣＤ４＾＋Ｔ细胞和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞起重要作用。     

不同感染状态下EB病毒核抗原亚型表达的研究

本实验用免疫印迹法纯化的抗ＥＢＮＡ亚型抗体,结合显微荧光分光光度检测技术,检测在不同感染状态下,三种亚型ＥＢＮＡ抗原在细胞中的表达程度。结果表明,处于潜伏感染状态下的Ｒａｊｉ细胞ＥＢＮＡ－１表达量较大,经巴豆油和正丁酸诱导进入钝挫感染状态后ＥＢＮＡ－１表达减少,而ＥＢＮＡ－２的表达增强。Ｂ＿（９５－８）细胞也有相似的趋势。表明ＥＢ病毒的激活可能与不同ＥＢＮＡ亚型表达量的改变有关。     

重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备

用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段,直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定后,再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间,构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ,将此质粒导入大肠杆菌,经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达,用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白,经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分,得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体,经检测发现抗ＦＡＳ抗体能诱导Ｕ９３７细胞发生细胞凋亡     

油桐尺蠖核型多角体病毒接种几种脊椎动物细胞的试验

利用昆虫病毒防治害虫,既要求有防虫效果,又必须考虑其安全性。油桐尺蠖核型多角体病毒对实验动物的致病性试验,已有报道。本文侧重于细胞水平,用油桐尺蠖核型多角体病毒接种鸡胚细胞、地鼠肾细胞及人胚肺细胞,观察病毒能否在细胞中增殖或引起细胞病理变化。