兔的一种新病毒 IlI.兔出血症病毒形态的超微结构和抗原性的研究

1986年春,武汉市第二制药厂(WSPMM)试验用家兔突然口鼻渗出鲜血,几乎全部猝死。作者观察了罹病死亡的症状,认为此病例与黄印尧等所报道的相同。湖北省中医药研究院(HTCMI)也发生此病的流行。作者对这两种不同来源的病料,进行相同的处理,提取病毒粗纯物,回接同种动物,可引起同样典型的发病症状。进一步将死亡兔的肝、睥等脏器组织匀浆。经低速、高速、超速和蔗糖密度梯度离心后制样,电镜观察可见典型的病毒柱子。以上两种病毒粒子制备的抗血清和南京农业大学的兔出血症病毒抗原在双扩散沉淀中,产生典型的沉淀反应,说明三种病毒抗原的一致性。但是湖北株、南京农业大学病毒株抗原和日本细小病毒的抗血清,在双扩散反应时均无沉淀反应。湖北株病毒的形态大小、超微结构、外壳蛋白的 多肽和血清学特性,均不同于标准兔细小病毒,可能是一新的病毒。     

兔病毒性出血症(暂定名)的研究 Ⅱ.病毒的分离提纯、电镜观察及核酸性质

应用氯仿处理,聚乙二醇沉淀,差速及蔗糖梯度离心,可以获得部份提纯的兔病毒性出血症病毒制剂,制剂呈典型的病毒核蛋白紫外吸收曲线,最高吸收值在260nm,A260/280=1.3,电镜下病毒呈廿面体,大小约36nm,无外膜,用该制剂回接健康兔,能引起典型发病及死亡,用核糖核酸及脱氧核糖核酸酶处理,证明病毒核酸为DNA,病毒DNA的温度熔解曲线测定证明,DNA为双链,初步测定DNA的分子量约为13-15×10~(?)道尔顿。     

黑胸大蠊浓核症病毒的研究

1990年我们从黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa)的若虫中,首次分离发现黑胸大蠊浓核症病毒(PfDNV)。根据Kock's 法则,将它进行了回感试验,结果表明：这一病毒对该虫可引起同样的病症,并从中重新分离出完全一样的DNV。同时,对诊病毒进行了分类鉴定,结果表明：其病毒粒子的形态结构呈球状二十面体,大小一致, 直径为20 nm; 病毒核酸呈线状, 长度为1.7/μm 分子量为1.7x10⁶ Dal(ssDNA),基因组为单链DNA;结构蛋白为4条多肽,分子量分别为81k、62k、53k、29k。根据病毒分类命名原则,证明从黑胸大蠊中分离出的病毒属细小病毒科(Parvoviridae)中的浓核症病毒属(Desovirus)。我们将它命名为黑胸大蠊浓核症病毒Periplaneta fugtnosa Densonucleosis Virus简称PfDNV).     

兔出血症病毒体外复制的研究

在几种动物细胞上,采用同步感染的方法研究了兔出血症病毒(RHDV)的复制特性。病毒感染细胞后(PI)48—72小时可观察到明显的细胞病变,血凝效价可增高5—10倍。病毒对细胞传代代数不同,敏感性也不同。在兔婴肾(RK)和兔婴肺(RL)细胞上以4—8代最为敏感。采用免疫荧光染色法,经病毒感染48—72小时的细胞中可观察到特异性荧光。细胞增殖的病毒经PEG-DS浓缩,Sepharose 4B柱层析提纯后,在电镜下可观察到完整的病毒粒子,将此病毒回接健康实验兔可致100％死亡。免疫双扩散和免疫电泳试验表明,细胞增殖的病毒抗原与来自病兔肝的RHDV抗血清之间产生明显的沉淀带。SDS-PAGE分析病毒获得四条多肽,其分子量大小与病兔肝组织提取的病毒蛋白多肽分子量相比略有差异。     

草莓伪温和黄边病毒提纯技术的研究

纯化的草莓伪温和黄边病毒(SPMYEV),小叶嫁接繁殖于指示植物草莓UC—4上,然后采样榨汁,结合聚乙二醇(PEG)沉淀,蔗糖垫底差速离心及连续性蔗糖密度梯度离心,能成功地将草莓伪温和黄边病毒提纯出来。经电镜观察为丝杆状病毒粒体,长×宽为650nm×12—13nm。提纯的病毒制剂,经紫外分光光度计测定,呈典型的核蛋白吸收曲线,其最大值位于263nm,最小值位于243nm。A260/A280=1.24,用冰醋酸分解病毒,提取衣壳蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量约37000道尔顿。     

我国水稻条纹叶枯病病原性质的研究

病样经提纯后,在电镜下获得3nm丝状和8nm分枝丝状结构,病毒样在蔗糖密度梯度离心后产生三条沉降带。经过电泳分析表明:病毒外壳蛋白为单一组分,分子量约为3.69×10~4dalton;病毒核酸有三种大小不同的组分,分子量为0.9,1.0,1.4×100dalton(混合样)。用提纯的抗原制备抗血清。提纯病毒抗原与所制备抗血清、与我国过去研究制备的抗血清及与日本制备的条纹叶枯病单克隆抗体都有血清学反应。     

免出血症病毒的形态与结构的研究

免出血症病毒无锡株A_2R—3的完整病毒颗粒呈球形,廿面体等轴对称、无囊膜、其直径约为33—37nm。空心病毒粒子亦可看到,其核心直径为21—25nm。病毒衣壳包裹在颗粒的最外层,由紧密连结的子粒所组成,子粒排列规则,呈管状结构。其长度约为5—6nm,中心孔径为2—3nm。廿面体对称的等边三角形的面由6个子粒所构成,即每条边上排列3个子粒。据此推算出病毒衣壳的子粒总数为42,分负数为4,三角形面数为80,结构单位数为240。     

草莓伪温和黄边病毒的提纯技术研究

本研究比较了多种提纯方法,提出一个较理想的草莓伪温和黄边病毒（ＳＰＭＹＥＶ）提纯程序。病ＵＣ－４草莓叶经ＰＥＧ沉淀,蔗糖垫层差速离心,蔗糖密度梯度离心,可获得相当纯的病毒制剂。紫外检测呈典型的核蛋白吸收曲线,Ａ２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ＝１．２１,病毒得率为７－１０ｍｇ／ｋｇ病叶,病毒粒子电镜下观察,长６７０ｎｍ,宽１２～１３ｎｍ。     

兔出血症病毒核酸的某些理化性质的研究

本文对我国无锡分离的兔出血症病毒A_2R-3毒株核酸的某些理化性质进行了研究。采用孚尔根染色、二苯胺反应和核酸酶解实验证实病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色、甲醛反应、核酸酶S_1消化和核酸热变性实验表明病毒核酸为单链型。核酸电泳呈单一组分。电境观察显示核酸分子链呈线状,平均长度约为2.15μ。计算分子量约为2.1—2.5×10~6d。核酸碱基组盛为A25.34、T29.37、G23.85、C21.43、(G C)克分子百分比值为45.28。结合以前的报道、我们认为:兔出血症病毒可以归类于细小病毒科。     

一种含有单链RNA的香菇球状病毒

从生长不正常的香菇(Lentinus edodes(Berk.)Sing)菌株中分离到一种等轴对称含单链RNA的病毒颗粒。病毒颗粒在电镜下直径为33～34nm,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中病毒外壳蛋白分子量为22000道尔顿。病毒核酸径DNase1和SI酶解试验及热变性紫外吸收曲线试验证明为单链RNA,在1.5％的琼脂糖凝胶电泳中,病毒核酸呈现一条带,分子量为2.38×10~6道尔顿。     

甘薯羽状斑驳病毒分离提纯及血清学特性

从感染有甘薯羽状驳病毒的牵牛（I．Nil）叶片,通过超速离心,Cscl密度梯度离心提纯SPFMV粒子,每千克叶片可得病毒13－15毫克。电镜观察病毒粒子长度范围在820－860nm,也可见到900nm以上的特长粒子。病毒提纯物的紫外吸收曲线呈典型核蛋白吸收曲线,OD260／OD280＝1．21,免疫电镜检查,该病毒与SPFMV抗血清起阳性反应。     

鸭肠炎病毒CHv强毒株超微结构研究

将鸭成纤维细胞培养的鸭肠炎病毒(DEV),经超声处理、高速冷冻差速离心后,采用酒石酸钾—甘油非线性密度梯度超速离心,收集病毒蛋白带,3%磷钨酸负染后观察病毒粒子形态。结果表明:病毒粒子主要集中在40%~50%酒石酸钾—甘油缓冲液交界层。电镜下,病毒粒子纯净,具有疱疹病毒典型形态结构,剖面六角,外观轮廓清楚。成熟病毒粒子直径约150~266nm,病毒囊膜、核衣壳和核心清晰可见;囊膜外层较内层着色略深,且可见尚未形成完整囊膜的柄状拖尾结构。多数病毒粒子以单核衣壳为主,一定数量的病毒具有双核衣壳,偶见三核衣壳,核衣壳直径为100~150nm,呈现致密圆形、半圆形或马蹄形等类型。在核衣壳外和囊膜之间可见明显的亮晕。核心DNA电子染色较深,集中分布,直径40~65nm。本文获得的清晰DEV负染超微结构照片,为该病毒结构生物学的研究提供了重要依据。     

两株蓖麻蚕核型多角体病毒的比较研究

本文描述来源不同的两株菌麻蚕多角体病毒的形态特征和理化特性。一株为较长期饲喂马桑叶的蓖麻蚕从自然罹死的幼虫和蛹中分离的多角体病毒（简称ArscsNPV);另一株为饲喂蓖麻叶的蓖麻蚕从幼虫分离的核型多角体病毒（简称ArscsNPV);另一株为饲喂蓖麻叶的蓖麻蚕从幼虫分离的核型多角体病毒（简称ArNPV)。两株核型多角体病ArNPV多角体大小约1．2－2．0μm最大的可达2．9μm。两株NPV病毒粒子均为杆状,ArscsNPV病毒粒子大小平均为310×50nm;ArNPV病毒粒子大小为350×50nm。两株NPV均为多粒包埋型。两株NPV的多角体蛋白均为单一组分,ArscsNPV多角体蛋白分子量为27．5kd;ArNPV多角体蛋白分子量为28kd。两株NPV的病毒粒子结构多肽均含有21条多肽,其中各多肽分子量有所差异。ArscsNPV的病毒粒子多肽分子量范围为11－130kd;ArNPV病毒粒子多肽分子量范围为11－96kd,其中有11种多肽了量彼此相同包括两种主要多肽（54kd和33kd）。用SDS－苯酚提取的病毒核酸,经实验证明均为双链DNA型使用几种内切酶酶解,求得两株NPV的核酸分子量,ArscsNPV为52．4×10^6d;ArNPV为73．5×10^6d。     

一种新的纯化玉米粗缩病毒的方法及病毒形态的研究

玉米粗缩病毒是一种双链RNA病毒,结构比较复杂。病毒粒子极不稳定,在分离纯化过程中,外层蛋白衣壳易脱落,成为亚病毒颗粒,纯化的病毒粒子在冰箱中存放2～3天,也会变成亚病毒颗粒,所以迄今为止,所有玉米粗缩病毒的研究或纯化均用感病植株的根部作材料,以达到减少膜结构等杂质影响,简化提纯步骤的目的。但病株根部收获量少,而且病毒含量不高。我们采用四氯化碳,葡聚糖凝胶2B柱分离以及25～50%的蔗糖密度梯度离心等技术成功地从感病小麦的叶片中分离提纯了玉米粗缩病毒。电镜观察结果证明,经蔗糖密度梯度离心后出现的两条病毒带,上带含有大量直径为60～66nm的亚病毒粒子的空壳,下带含有大量的完整病毒粒子及亚病毒粒子,完整病毒粒子的大小在未暴露A突起的情况下直径约85nm,带有A突起的为75nm,亚病毒粒子带有不完整的B突起,直径约60nm,这些数字均比国外报道的玉米粗缩病毒略大。我们还发现一些直径为45nm左右的亚病毒粒子空壳,从而进一步证明我们以前的工作,认为玉米粗缩病毒可能存在三层甚至四层蛋白外壳。     

菜白蝶的一种新病毒分类鉴定

1978年9月武汉病毒研究所保藏室主任孙富林副研究员和该室的几位同志,在武汉市郊区从菜白蝶自然流行病死亡的幼虫中分离出常见的颗粒体病毒,同时在样品中发现一种不易确定的细小粒子,并对该粒子进行了分离和鉴定。通过电镜观察、血清学试验、核酸性质研究以及回接试验等多方面的探讨,表明病毒直径约25毫微米,衣壳由32壳粒组成,病毒粒子外周有12个壳粒围绕,壳粒中空。提纯病毒经吖啶橙染色,荧光显微镜观察呈红色荧光。甲醛反应,OD值增加说明该病毒核酸为单链。DNA病毒粒子沉降系数为132s,回接死亡率为99％,是一种有强烈毒性的病毒。该病毒能在地鼠肾原代细胞培养成功。说明该病毒能在脊椎动物细胞上培养。1990年5月22日由     

兔出血症抗体间接ELISA检测试剂盒的研制与初步应用

目的建立检测兔病毒性出血症(RHD)血清抗体的间接ELISA方法并组装成试剂盒,进行初步应用。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯RHDV病毒粒子作为包被抗原,优化反应条件和筛选试剂,建立间接ELISA检测方法,组装试剂盒并对其总体性能进行评价。结果试剂盒敏感性为血凝抑制试验的4~32倍,重复性和特异性良好,保质期为4℃3个月。对105份兔血清进行随机检测,与血凝抑制试验的复核率为95%。结论本试剂盒可以在检测和科研中初步应用。     

美味侧耳病毒及其生化特性

自美味侧耳(Pleurotus sapidus)子实体中分离到两类病毒颗粒,一是球形,直径为25nm(少数为19、32am);一是杆状,具较深锯齿状亚基,大小为12～14×40～600nm,病毒具核蛋白吸收峰,最大吸收为E257nm,最小为242nm,ISCO蔗糖密度梯度离心中出现3个峰。 病毒具有分子量为44000和22000两条主要衣壳多肽,自子实体中提取到分子量约1.2×10~(?)道尔顿的dsRNA,可能是球形病毒的基因组,病毒与同属真菌糙皮侧耳(P,ostreatus)和德平菇(P,floride)球形病毒之间有血清学关系。     

一种新病毒——兔出血症病毒的鉴定初报

从我国新发生的一种家兔急性败血性传染病死兔内脏抽提物中,观察到典型的病毒粒子,回归兔可引起典型发病,再从病死兔内脏回收到同样病毒,证明该病系病毒性传染病,暂定名为“兔病毒性出血症”,病原暂定为“兔出血症病毒”。经初步鉴定,认为本病毒可能是一种首次发现的新病毒,属双股RNA病毒。但从病毒大小和核酸节段看,又不同于呼肠病毒科。最终归属正在进一步研究。     

扁刺蛾核型多角体病毒的形态结构与某些生化特性的测定

扁刺蛾核型多角体病毒是一种单粒包埋型的杆状病毒,在扫描电镜下呈不规则多面体。病毒多角体大小不一致,平均直径为0.59μ。病毒粒子为340×85nm. 经SDS—PAGE分析,病毒的多角体蛋白主带分子量为29500道尔顿;病毒粒子的结构蛋白具有25条多肽,分子量为17.8～69.5×10~4道尔顿。病毒多角体蛋白氨基酸组成中富含Asp和Glu,而His、Cys、Met的含量却很低。病毒DNA的分子量为67.89×10~6道尔顿。     

兔病毒性出血症(暂定名)的研究 Ⅰ.兔病毒性出血症引起兔肝细胞的超显微结构病变

兔病毒性出血症是一种致死性急性传染病,取体温41℃但尚未死亡的病兔的肝组织,经电镜超薄切片研究,在肝细胞核内可见大量成熟的,直径约36nm的球状无膜病毒颗粒,还可看到细胞核的严重病变,细胞质内的细胞器,包括线粒体,内质网系统也发生不同程度的病变,这一类病毒在细胞核内复制和装配,这提示该病毒可能是一种DNA病毒。