黄芩汤对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB/NLRP3/Caspase-1细胞焦亡通路的影响*

目的:研究黄芩汤对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱天蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)细胞焦亡通路的影响。方法: 将SD大鼠随机分为空白组、模型组、厄贝沙坦组(27 mg/kg)和黄芩汤低、高剂量组(5 g/kg和20 g/kg),高脂饲料喂养6周联合一次性腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)诱导DN大鼠模型,每组9只。灌胃给药6周后检测大鼠血清空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triacylglycerol,TG)、尿蛋白(urine protein,UP)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和IL-18水平;HE染色和Masson染色观察大鼠肾脏病理变化;Western blot和免疫组化检测肾脏NF-κB/NLRP3/Caspase-1细胞焦亡通路相关蛋白及阳性细胞表达。结果: 与空白组比较,模型组大鼠FBG、TC、TG、UP、BUN、Scr、IL-1β和IL-18水平明显升高(P<0.01);肾脏出现肾小球体积增大及基底膜增厚,肾小管管腔扩张,炎性浸润及纤维化明显等病理变化;肾脏组织NF-κB的磷酸化水平,以及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、Caspase-1、IL-1β和消皮素D(gasdermin D,GSDMD)的蛋白质表达明显升高(P<0.01);肾脏组织NLRP3和GSDMD阳性细胞表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,黄芩汤组大鼠上述血糖、血脂、肾功能及炎性因子水平均得到明显改善(P<0.05,P<0.01);肾脏肾小球及肾小管结构趋于正常,炎性浸润及纤维化程度得到改善;肾脏组织NF-κB的磷酸化水平,以及NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和GSDMD的蛋白质表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);肾脏组织NLRP3和GSDMD阳性细胞表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论: 黄芩汤对DN大鼠具有确切的疗效,机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/Caspase-1细胞焦亡通路有关。     

黄芪甲苷减轻大鼠脑缺血再灌损伤并抑制NF-κB磷酸化及NLRP3炎症小体活化

本文旨在探讨黄芪甲苷(astragaloside IV, AST-IV)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其抗炎机制。采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注模型,以神经功能缺失评分和脑梗死体积综合评价AST-IV抗脑缺血再灌注损伤的作用,Western blot检测脑组织中NLRP3、ASC、pro-Caspase-1、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18、IL-18、磷酸化NF-κB和总NF-κB蛋白表达水平。结果显示,与模型组比较,AST-IV能降低大鼠神经功能缺失评分,减少脑梗死体积,降低脑组织中NLRP3、Caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白水平,并抑制磷酸化NF-κB蛋白表达。以上结果提示,AST-IV具有抗脑缺血再灌注损伤作用,其机制可能与抑制NF-κB蛋白磷酸化以及抑制NLRP3炎症小体活化有关。     

粪肠球菌脂磷壁酸通过 激活NF-κB活化NLRP3炎性体

目的检测粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)对NLRP3炎性体的活化机制。方法粪肠球菌LTA及NF-κB抑制剂作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7上,运用Western blot及ELISA法检测NLRP3炎性体相关因子mRNA及蛋白的表达,检验LTA对NLRP3的活化是否借助NF-κB信号通路,免疫荧光染色检测NF-κB的核转位。结果LTA可直接活化RAW264.7细胞的NLRP3炎性体。LTA作用于细胞后NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达明显高于对照组(P0.05)。NF-κB抑制剂可有效抑制NF-κB P65的核转位,而一旦NF-κB信号通路被抑制,NLRP3炎性体蛋白的表达均明显降低。结论 LTA能直接激活小鼠巨噬细胞系RAW264.7的NLRP3炎性体的表达,NF-κB信号通路参与此过程。     

MiR-146a通过炎症参与小鼠糖尿病心肌病的机制研究

目的:探讨microRNA-146a (miR-146a)对小鼠糖尿病心肌病炎症的影响。方法:20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和糖尿病心肌模型组,模型组利用链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)腹腔注射建立糖尿病心肌病模型,对照组给予等体积枸橼酸钠缓冲液,建模成功后提取心脏组织RNA,利用qRT-PCR检测心肌组织中miR-146a和炎症因子白介素1β(IL-1β),白介素6(IL-6),单核趋化因子1(MCP-1)以及NF-κB/p65的mRNA表达;依次分离原代心肌细胞,成纤维细胞和内皮细胞,给予高糖处理后,检测细胞中miR-146a,IL-1β,IL-6,MCP-1以及NF-κB/p65的mRNA表达;内皮细胞转染miR-146a mimic或miR-146a inhibitor,观察炎症因子的表达情况。结果:糖尿病心肌病心肌组织中miR-146a水平较对照组降低(P0.05),炎症因子IL-1β,IL-6,MCP-1以及NF-κB/p65的mRNA表达高于对照组(P0.05);与对照组相比,高糖分别处理原代心肌细胞和成纤维细胞后miR-146a表达未改变(P0.05),而高糖降低内皮细胞中miR-146a的表达(P0.05);高糖增加内皮细胞炎症因子IL-1β,IL-6,MCP-1及NF-κB/p65的mRNA水平(P0.05);内皮细胞转染miR-146a mimic后可阻止由于高糖所导致的内皮细胞中IL-1β,IL-6,MCP-1及NF-κB/p65的增加(P0.05),而转染miR-146a inhibitor后,可引起正常对照组细胞中炎症因子IL-1β,IL-6,MCP-1以及NF-κB/p65表达的增加(P0.05)。结论:糖尿病心肌病中miR-146a的降低以及炎症的增加,与内皮细胞受损相关,且可能通过miR-146a影响炎症因子的表达。     

柚皮苷对骨关节炎软骨破坏的保护作用研究

目的:考察柚皮苷对骨关节炎软骨破坏的保护作用。方法:将60只7周龄雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和柚皮苷组,每组20只。模型组和柚皮苷组大鼠通过切断右膝关节的前交叉韧带建立骨关节炎模型,建模后,柚皮苷组大鼠每天灌胃200mg/kg的柚皮苷溶液,共灌胃4周。通过番红O/固绿染色和OARSI评分评估大鼠的关节软骨损伤程度。通过免疫组织化学染色检测软骨组织中p-IκBα和NLRP3的表达。通过用IL-1β体外诱导SW1353细胞来模拟骨关节炎软骨细胞的病理微环境,并分别应用NF-κB抑制剂(PDTC)或NLRP3抑制剂(CY-09)处理SW1353细胞。通过RT-PCR和Western blot检测细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-6、IL-10、IL-18、MMP13和ADAMTS-5的表达。通过Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:与模型组相比,柚皮苷组的OARSI评分显著降低(2.63 vs 0.94,P0.05)。柚皮苷组的p-IκBα和NLRP3蛋白表达水平显著低于模型组(P0.05)。与IL-1β组相比,IL-1β+柚皮苷组的SW1353细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-6、IL-18、MMP13和ADAMTS-5的表达水平均显著降低,而IL-10显著升高(P0.05)。PDTC和CY-09对NF-κB和NLRP3信号通路相关分子的调控作用与柚皮苷一致。与IL-1β组相比,IL-1β+柚皮苷组、IL-1β+PDTC组和IL-1β+CY-09组的细胞凋亡率均显著降低(P0.05)。结论:柚皮苷可在体内和体外抑制骨关节炎的进展,柚皮苷对骨关节炎的治疗作用部分依赖于对NF-κB和NLRP3信号通路的抑制。     

藁本内酯衍生物抑制大鼠软骨细胞凋亡和炎症的作用及机制

该研究探究藁本内酯衍生物(LIGc)对IL-1β(10 ng/mL)诱导大鼠软骨细胞凋亡和炎症的作用及机制。将大鼠软骨细胞分为Control组、IL-1β组及LIGc高、中、低剂量组。除Control组外,其余组均采用IL-1β诱导建立软骨细胞炎症模型, LIGc高、中、低剂量组分别加入0.4、0.2、0.1μmol/mL的LIGc干预24 h。CCK-8检测LIGc对大鼠软骨细胞活性的影响; Hoechst 33258染色观察大鼠软骨细胞凋亡情况; Western blot检测细胞中Bcl-2、Caspase-3、TLR4、NF-κB p65蛋白表达情况; RTq PCR检测COX-2、HMGB1 mRNA的表达水平。研究发现不同浓度LIGc对大鼠软骨细胞的存活率无显著影响;与Control组相比, IL-1β组细胞凋亡水平明显升高; Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01), Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。COX-2、HMGB1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.01); TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<...     

姜黄素预处理对干热环境下中暑大鼠肾组织NF-κB p65及炎症因子表达的影响

目的:探讨不同剂量姜黄素对沙漠干热环境下大鼠肾组织炎症因子及NF-κB p65表达的影响。方法:将50只SD大鼠随机(随机数字法)分为五组(n=10):常温对照组、干热对照组、姜黄素低浓度组(50 mg/kg)、姜黄素终浓度组(100 mg/kg)、姜黄素高浓度组(200 mg/kg)。常温对照组及干热对照组均给予0.9%生理盐水灌胃,姜黄素组大鼠给予不同浓度姜黄素溶液灌胃,连续7天。在干热环境中放置150分钟后,麻醉处死大鼠,留取血液、肾组织进行分析。观察各组大鼠肾组织形态,检测肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α以及NF-κB p65表达及血清肌酐、尿素氮以及尿液中肾损伤分子1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的水平。结果:干热对照组大鼠血清肌酐、尿素以及尿液中KIM-1、NGAL水平均较常温对照组明显升高(P0.05),不同浓度姜黄素预处理组大鼠血清肌酐、尿素以及尿液中KIM-1、NGAL均较干热对照组有所下降,且差异具有统计学意义(P0.05)。干热对照组大鼠肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α以及NF-κB p65、磷酸化IκB-α的表达较常温对照组显著增加(P0.05)。姜黄素处理组大鼠随着姜黄素浓度的升高各指标较干热对照组呈不同程度的下降趋势(P0.05)。结论:姜黄素对于干热环境下大鼠肾损伤的保护作用,可能是与抑制NF-κB的表达降低细胞炎症反应水平有关。     

miRNA-9-5p与NF-κB信号通路在2型糖尿病肾病发病中的作用机制

目的:探讨mi RNA-9-5p与NF-κB信号通路在2型糖尿病肾病发病中的作用机制。方法:将80只db/db小鼠随机分为糖尿病肾病组、糖尿病肾病+罗格列酮组、糖尿病肾病+mi RNA-9-5p组、糖尿病肾病+阴性对照组,每组20只,分别给予生理盐水、噻唑烷二酮类抗糖尿病药马来酸罗格列酮、mi RNA-9-5p、mi RNA-9-5p阴性对照核酸,10μg/d腹腔注射。另将20只健康db/m小鼠作为对照组。观察各组空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、肾脏指数、24h尿量、肾脏组织变化,检测血清NF-κB信号通路关键因子单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6),及肾脏组织NF-κB m RNA、NF-κB p65蛋白水平。结果:糖尿病肾病组FBG、PBG、24 h尿量均高于对照组,肾脏指数低于对照组(P0.05)。糖尿病肾病+罗格列酮组和糖尿病肾病+mi RNA-9-5p组小鼠FBG、PBG、24 h尿量低于糖尿病肾病组,肾脏指数高于糖尿病肾病组(P0.05)。糖尿病肾病组小鼠血清MCP-1、TNF-α、IL-6水平,肾脏组织NF-κB m RNA、NF-κB p65蛋白水平均高于对照组(P0.05)。糖尿病肾病+罗格列酮组和糖尿病肾病+mi RNA-9-5p组血清MCP-1、TNF-α、IL-6水平,肾脏组织NF-κB m RNA、NF-κB p65蛋白水平低于糖尿病肾病组(P0.05)。结论:NF-κB在糖尿病肾病发病中起到重要作用,mi RNA-9-5p可以阻断NF-κB信号通路,下调MCP-1、TNF-α、IL-6的表达,抑制糖尿病肾病的发生和发展。     

B3型柯萨奇病毒上调NF-κB引起胰岛β细胞凋亡的作用及机制研究

B3型柯萨奇病毒（Coxsackie virus B3,CVB3）与1型糖尿病发病、胰岛功能破坏有关,但CVB3对胰岛β细胞凋亡的影响及机制尚不清楚。本研究的目的是观察CVB3上调NF-κB p-p65引起胰岛β细胞凋亡的作用及机制,进而初步探究CVB3感染引起胰岛β细胞损伤的分子机制。本研究培养了人胰岛β细胞株,分为对照组、CVB3组、阴性对照（NC）质粒组、NF-κB p65质粒组、si-NC组、si-NC+CVB3组、si-NF-κB p65+CVB3组,检测细胞活力A490水平、细胞凋亡率及细胞中cleaved caspase-3、NF-κB p-p65、IκB α的表达水平。结果显示与对照组比较,CVB3组的A490水平及细胞中IκB α的表达水平降低,细胞凋亡率及细胞中cleaved caspase-3、NF-κB p-p65的表达水平增加（P<0.05）;与NC质粒组比较,NF-κB p65质粒组的A490水平降低,细胞凋亡率及细胞中cleaved caspase-3、NF-κB p-p65的表达水平增加（P<0.05）;与si-NC+CVB3组比较,si-N...     

NLRP3炎症小体表达与慢性阻塞性肺疾病合并肺癌的相关性研究

目的:分析核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达与慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺癌的相关性。方法:选取2015年1月-2018年2月我院收治的COPD合并肺癌患者62例作为实验组及同期88例COPD患者作为对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患者外周血IL-1β、IL-18浓度,免疫组化法检测两组患者术后肺病理组织中Caspase-1、ASC、NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白相对表达量,并比较不同病理特征下患者术后肺病理组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白相对表达量的差异,并分析其与COPD合并肺癌的相关性。结果:实验组患者外周血IL-1β、IL-18水平均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组患者术后肺病理组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白相对表达量均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P0.05);中低分化、临床分期Ⅲ期、淋巴结有转移的急性加重期COPD合并肺癌患者术后肺病理组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白相对表达量高于高分化、临床分期Ⅰ-Ⅱ期、淋巴结无转移的稳定期COPD合并肺癌患者,差异具有统计学意义(P0.05)。经Spearman秩相关性分析发现,患者术后肺病理组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白相对表达量与COPD合并肺癌患者病情严重程度、淋巴结转移情况、分化程度以及病情所处时期均呈正相关(r0,P0.05)。结论:NLRP3炎症小体通路可能参与了COPD合并肺癌的发展过程,其释放的细胞因子IL-1β、IL-18水平升高可能与患者持续炎症有关,并进一步导致机体免疫病理损伤,促进疾病进展。     

miR-124-3p靶向TLR4抑制流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应

目的:探讨miR-124-3p靶向Toll样受体4(TLR4)对流感病毒性肺炎小鼠炎症反应的影响。方法:建立流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1)感染所致病毒性肺炎小鼠模型,采用RT-qPCR测定肺组织miRNA-124-3p表达水平。病毒性肺炎小鼠尾部注射miR-124-3p agomir或agomir NC后,第4 d摘眼球取血并取出肺组织,ELISA检测血浆中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察肺组织病理变化,Western印迹测定TLR4和核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白水平。结果:与正常肺组织比较,病毒性肺炎小鼠肺组织miR-124-3p表达量降低(P0.001);miR-124-3p agomir注射组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α明显低于注射agomir NC组和模型组(P0.001),而高于正常组;HE染色结果表明miR-124-3p agomir注射组小鼠的肺组织炎细胞渗出和浸润较agomir NC组和模型组减轻;与agomir NC组比较,miR-124-3p agomir注射组的TLR4、NF-κB p65表达减少(P0.01)。结论:miR-124-3p抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应。     

miR-21对心肌缺血大鼠心肌细胞TLR-4/NF-κB通路的影响

摘要 目的：探究微小核糖核酸-21（miR-21）对心肌缺血大鼠心肌细胞Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：取40只SD大鼠随机分为假手术组（10只）和建模组（30只）,建模组大鼠通过左冠状动脉前降支（LAD）结扎术建立心肌缺血大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸后不做其他处理即缝合。将建模成功大鼠随机分为对照组（转染miR-NC慢病毒）、沉默组（转染miR-21 antagomir慢病毒）、过表达组（转染miR-21 mimics慢病毒）,假手术组注射等量生理盐水。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况;原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（WB）检测TLR-4、NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）水平。结果：对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量心肌细胞肿胀坏死并伴随炎症细胞浸润,沉默组大鼠心肌组织损伤情况进一步加重,而过表达组大鼠心肌组织损伤现象得到明显改善。与假手术组比,对照组、沉默组、过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与对照组比,沉默组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA表达与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平降低,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：下调miR-21表达可促进TLR-4/NF-κB通路表达,加重心肌缺血大鼠心肌损伤。     

CREB和NF-κB在p38MAPK所致脊髓星形胶质细胞活化中的作用（英文）

目的：探讨CREB和NF-κB在p38MAPK所致脊髓星形胶质细胞活化中的作用,明确脊髓星形胶质细胞活化中p38MAPK细胞信号转导途径的作用。方法：分离培养SPF大鼠脊髓星形胶质细胞,设正常组、SP刺激组（SP组,10-7mol/L）、SP刺激＋SB203580（10μmol/L）阻断p38MAPK组（SP＋SB组）、SP刺激＋PD98059（10μmol/L）阻断CREB组（SP＋PD组）、SP刺激＋SN50（10μmol/L）阻断NF-κB（SP＋SN组）。WB法、免疫荧光法、ELISA法检测12 h和24 h时p-p38、p-CREB、NF-κBp65水平及GFAP、TNF-、IL-1β水平变化。结果：SP组脊髓星形胶质细胞p-p38、p-CREB、NF-κBp65显著升高,GFAP水平显著增高,同时TNF-和IL-1β水平显著增高。与SP组比较,用SB203580阻断p38MAPK通路后,SP＋SB组p-p38、p-CREB、NF-κBp65显著降低,GFAP、TNF-和IL-1β水平显著降低。用PD98059阻断CREB通路后,SP＋PD组p-p38、NF-κBp65无显著变化,p-CREB显著降低,GFAP水平降低,同时TNF-和IL-1β水平降低。用SN50阻断NF-κB通路后,SP＋SN组p-p38、p-CREB无显著变化,NF-κBp65显著降低,GFAP水平降低,同时TNF-和IL-1β水平降低。结论：体外培养中,SP刺激后脊髓星形胶质细胞显著活化,p38MAPK活化后通过CREB及NF-κB信号途径导致胶质细胞炎性因子水平显著升高。     

小檗碱对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及免疫机制*

目的:探讨小檗碱对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及免疫机制。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham group)、模型组(Model group)、小檗碱低剂量组(BBR-L,25 mg/kg)、小檗碱中剂量组(BBR-M,50 mg/kg)、小檗碱高剂量组(BBR-H,100 mg/kg),每组各10只。采用Longa线栓法建立脑缺血/再灌注大鼠模型,缺血2 h后再灌注24 h处理。于造模成功2 h后灌胃给药,假手术组和模型组组按上述方法同体积给予生理盐水。给药24 h后,测定各组大鼠神经功能缺损程度评分及脑梗死率;采用ELISA法检测抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性、细胞因子TNF-α、IFN-β、IL-6和NO的含量;采用流式细胞术检测CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺血清含量;进一步采用RT-qPCR与Western blot技术检测大鼠脑组织内NF-κB-NLRP3信号轴关键基因及蛋白的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损程度、脑梗死率均升高(P＜0.05),且血清NO、TNF-α、IFN-β、IL-6含量和脑组织的NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1基因与蛋白表达水平均升高(P＜0.05),而血清中SOD、GSH-Px活性和CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺水平下降(P＜0.05);与模型组比较,BBR-H、BBR-M、BBR-L组大鼠神经功能缺损程度、脑梗死率均下降(P＜0.05),且血清NO、TNF-α、IFN-β、IL-6含量和脑组织的NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1基因与蛋白表达水平均降低(P＜0.05),而血清中SOD、GSH-Px活性和CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺水平升高(P＜0.05)。结论:小檗碱可通过减轻氧化应激,抑制炎症反应,增强免疫功能,减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制NF-κB-NLRP3信号有关。     

TLR7在1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨Toll样受体7(TLR7)介导的My D88/NF-κB信号通路在1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为3组(n=6),糖尿病假手术组(DS),糖尿病缺血再灌注组(DIR),糖尿病缺血再灌注+氯喹预处理组(DIR+CQ)。采用腹腔注射链尿佐菌素65 mg/kg建立糖尿病模型,TLR7抑制剂氯喹预处理于糖尿病模型成功后第3周0.5%氯喹40 mg/kg进行腹腔注射,连续给药7天。于第四周采用双侧肾蒂夹闭25 min,再灌注48 h建立肾缺血再灌注损伤模型。取大鼠肾脏HE染色观察大鼠病理学结果,血标本测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测TLR7,My D88和NF-κB蛋白表达。结果:与DS组相比,DIR组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死,Paller评分升高(P0.01)。与DIR组相比,氯喹预处理可以改善肾损伤(P=0.017);与DS组相比,DIR组BUN,Scr,IL-6,TNF-α,细胞调亡指数(Apoptosis%),TLR7,My D88,NF-κB增高(P0.05);与DIR组相比,DIR+CQ组BUN,Scr,IL-6,TNF-α,Apoptosis%,TLR7,My D88,NF-κB降低(P0.05)。结论:TLR7介导的My D88/NF-κB信号通路参与糖尿病肾缺血再灌注损伤,氯喹通过抑制TLR7表达,阻断My D88/NF-κB信号通路,降低炎症反应,从而减轻1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤。     

中药薯蓣皂苷对NLRP3炎性体的作用

目的 检测中药薯蓣皂苷是否可以抑制粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)所诱导的NLRP3炎性体的活化。方法 选用中药薯蓣皂苷作为实验药物,作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7,NLRP3炎性体相关因子mRNA的表达用Real-time qPCR方法检测。通过免疫荧光染色检测薯蓣皂苷对NF-κB的表达情况,流式细胞仪检测其对ROS的表达情况。结果 Real-time qPCR试验显示,中药薯蓣皂苷在LTA存在下,可以明显降低NLRP3、Caspase-1及IL-1β的mRNA表达。免疫荧光染色及流式细胞仪的检测证实,其对NLRP3的抑制主要是通过抑制NF-κB的活化及ROS的释放而实现。结论 薯蓣皂苷可有效抑制NLRP3炎性体的表达,其机制是通过抑制NF-κB信号通路及ROS的释放而实现。薯蓣皂苷可以作为临床难治性牙髓根尖周病治疗的候选药物。     

莪术醇对非酒精性脂肪性肝大鼠肝功能和肝纤维化的影响及机制*

目的:探讨莪术醇(CC)对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)大鼠模型肝功能和肝纤维化的影响及机制。方法:采用高脂饮食构建非酒精脂肪肝炎(NASH)伴肝纤维化的大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为:空白对照组、模型组(NASH)、NASH+复方鳖甲软肝片(CBT)组(阳性对照组)、NASH+CC组(25、50、100 mg/kg),每组10只。测量大鼠肝脏占体重的百分比,测量大鼠高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,HE染色观察肝纤维化情况,免疫组化检测鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及肝组织核因子κB p65(NF-κB p65)的阳性染色情况,蛋白印迹(Western blot)检测α-SMA、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达及Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子激活激酶-1(TAK1)、NF-κB p65、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中白介素(IL-6、IL-10、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠HDL、 IL-10含量、MMP-1蛋白表达量显著降低(P＜0.05),TG、ALT、AST、肝组织P65阳性率,α-SMA、TIMP-1、TLR4、TAK1、NF-κB p65、VCAM-1表达、IL-6、TNF-α及IL-1β含量显著升高(P＜0.05)。与模型组相比,CBT和CC处理后大鼠HDL、 IL-10含量、MMP-1蛋白表达量显著升高(P＜0.05),TG、ALT、AST、肝组织P65阳性率,α-SMA、TIMP-1、TLR4、TAK1、NF-κB p65、VCAM-1表达、IL-6、TNF-α及IL-1β含量显著降低(P＜0.05),其中模型+CC组以高浓度组改善最显著(P＜0.05),但各剂量改善幅度均低于模型+CBT组(P＜0.05)。结论:莪术醇通过调节TLR4、TAK1、NF-κB p65信号通路,减轻炎症反应,改善肝功能,从而缓解非酒精性脂肪肝肝肝纤维化,且在一定范围内呈浓度依赖性。     

肝组织中NF-κB、TGF-β1及其Ⅰ型受体mRNA和HSC在肝纤维化中的改变及护肝片对其的影响

目的探讨中、晚期纤维化大鼠肝组织中肝星状细胞(HSC)的活化与增殖、核转录因子-κB(NF-κB)及转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的改变及护肝片对其的影响。方法采用12.5%CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自造模之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921mg/kg)或溶媒,每日一次,直至8或13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片。免疫组化S-P法检测大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)和NF-κB p65蛋白的表达,原位杂交检测TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达;并用MetaMorph图像分析系统计数-αSMA阳性细胞数,对NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达量进行定量分析。结果 1.模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组。2.模型复制8周和13周,模型组活化的HSC(即-αSMA阳性细胞)数量较正常组明显增多,NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达均较正常组明显增强(P<0.01);3.护肝片显著抑制8、13周纤维化肝组织HSC的活化与增殖和NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达(P<0.01)。结论抑制HSC的活化与增殖和NF-κB p65蛋白与TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达可能是护肝片抗肝纤维化作用的靶点之一。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后免疫蛋白酶体的变化

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织免疫蛋白酶体LMP2和LMP7表达及其意义。方法线栓法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑缺血1h再灌注72h。免疫荧光染色观察脑组织LMP2、LMP7、NF-κB、IL-1β、TNF-α表达和细胞分布。Western blot分析LMP2、LMP7、磷酸化NF-κB p65、IL-1β、TNF-α蛋白水平变化。结果 1局灶性脑缺血再灌注后上调LMP2和LPM7表达,尤其在梗死灶周边的皮层和纹状体区,与假手术组比较有显著性差异(P0.001)。2免疫荧光双标显示星形胶质细胞是LMP2主要来源细胞,而OX42阳性的小胶质细胞/巨噬细胞是LMP7主要来源细胞;而且,NF-κB、IL-1β、TNF-α与LMP2、LMP7具有一定程度的细胞共定位。3Western blot结果表明,脑缺血再灌注后NF-κB p65、IL-1β、TNF-α蛋白水平表达趋势与LMP2、LMP7变化相类似。结论局灶性脑缺血再灌注后免疫蛋白酶体LMP2和LMP7主要来源于免疫炎症相关的细胞,推测LMP2和LMP7可能参与调节缺血性脑卒中后脑神经炎症反应。