改良固定方式以提高淋巴瘤组织的制片质量

目的通过改良两种时段接收淋巴结的固定方式,提高淋巴瘤诊断的制片质量。方法随机收集上午10时左右及下午4时左右接收的132例淋巴结标本,每例各切取2块组织,上午切取的组织随机分为2组,分别行短时间固定处理程序(上午短时间组)和延长固定时间处理程序(上午长时间组)进行固定,下午切取的组织也随机分为2组,也分别行短时间固定处理程序(下午短时间组)和延长固定时间处理程序(下午长时间组)进行固定。回顾性分析并筛选出病理诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的58例,其中包括上午10时左右接收的26例及下午4时左右接收的32例。脱水处理后的4组组织进行包埋后,按常规进行切片、HE染色、CD79a免疫组织化学检测、C-MYC双色分离荧光原位杂交实验(fluorescence in situ hybridization, FISH)。通过比较4组切片出现肉眼可见裂隙、皱折及破碎不全发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率,探讨最佳的淋巴结固定方法。结果上午长时间组制片CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率均不如上午短时间组,切片不完整发生率及HE染色质量与上午短时间组无明显差异;下午短时间组制片切片不完整发生率高且HE染色质量、CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率明显不如上午短时间组;下午长时间组切片以上指标均与上午短时间组无明显差异。结论上午接收的淋巴结标本应剖开于当天进行隔夜常规脱水,下午接收的淋巴结标本必须剖开后行延长固定程序进行脱水,随后得到的淋巴结组织在切片完整性、HE染色、免疫组织化学检测及FISH检测中能更好地提高淋巴瘤诊断的制片质量。     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

脂肪组织石蜡切片制作方法探讨

目的探讨脂肪组织石蜡切片制作方法,改善和提高其切片质量。方法将送检的脂肪组织切开固定于中性甲醛液中;取材后将标本放入脱水机中,调整脱水机设置程序,在常规方法的基础上适当增加组织再固定及脱水、透明时间;包埋时采取挤压组织等改进方法。结果通过改进和调整后制作的脂肪组织蜡块平整无塌陷,石蜡切片优良,厚薄均匀,完整,无空洞、无挤压、镜下组织结构完整清晰,细胞无挤压、重叠等现象。细胞形态清晰,着色均匀艳丽。结论通过上述方法的改进,能尽可能多地减少脂肪组织的脂滴,增加脂肪组织的硬度,使组织和石蜡能很好的融合在一起,有利于切出完整的厚薄均匀的石蜡切片,提高制片质量。     

病理冷冻切片组织速冻与解冻方法的优化

目的优化病理冷冻切片组织速冻与解冻的方法,以期提高冷冻组织制片的效率和切片质量。方法随机抽取50例术中快速冷冻切片诊断为乳腺浸润性导管癌病例,每例取3块组织,分3组进行速冻处理:不加盖冰锤组,冰冻切片机配置冰锤组,专利冰锤组。分析比较3组的速冻时间和冷冻切片HE染色质量。将冷冻制片后剩余的组织用不同的方法分两组进行解冻处理:固定剂融冰组,流水融冰组;将解冻处理后的组织与新鲜标本直接固定的组织行人表皮因子受体(HER-2)免疫组织化学染色,比较3组在免疫组织化学染色效果方面的差异。结果运用专利冰锤组件速冻,冷冻速度快,运用专利冰锤组件制出的冷冻切片组织结构形态良好,冰晶、褶皱现象少。三组不同方式处理的组织HER-2免疫组织化学染色阳性率一致,但组织新鲜固定组和固定液融冰组在阳性细胞定位和阳性染色强度方面均强于流水融冰组。结论推荐运用专利冰锤组件速冻组织,速度快且冷冻切片质量佳;冷冻制片后剩余组织的解冻处理,推荐在固定液中解冻,边溶化边退冰,最大限度的保存组织抗原以利于后续的工作。     

病理石蜡制片中试剂标准化操作的应用体会

近年来,随着经济的发展,蜡块制作由人工操作转向全自动密闭式脱水机的广泛使用,组织的固定、脱水、透明、浸蜡已进入恒温、恒湿化操作,有效地提高和稳定了病理制片的质量,但在各实验室石蜡HE制片中的试剂使用尚未统一实现标准化操作,影响了制作的蜡块质量稳定性。现将石蜡切片试剂标准化使用问题作如下探讨：     

褪色HE染色切片ALK基因融合检测可行性探索

目的 探索利用HE染色切片褪色样本进行ALK基因融合检测的可行性。方法 选取3例ALK基因融合阳性的福尔马林固定石蜡包埋（formalin fixed and paraffin embedded,FFPE）组织样本的HE染色切片,分别经盐酸乙醇褪色法和高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色后,提取RNA,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术,检测ALK基因融合。结果 从经盐酸乙醇褪色法或高锰酸钾草酸氧化漂白法褪色的HE染色切片中提取的RNA的纯度与从对照切片中提取者无显著差异,但其浓度较从对照切片中提取者显著降低。在模板量相同的条件下,经盐酸乙醇褪色的HE染色切片与对照组切片均检测到明确的ALK基因融合阳性,而经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片无任何曲线升起。从经盐酸乙醇褪色的HE染色切片中提取的RNA的完整性与从对照切片中提取的RNA的完整性无差异,但显著高于从经高锰酸钾草酸褪色的HE染色切片中提取者。为保证研究的准确性,本研究采用免疫组织化学与荧光原位杂交法对选取的ALK基因融合阳性样本进行验证,结果发现所选样本均为明确阳性。结论 HE染色切片经盐酸乙醇褪色后提取的RNA可以用于ALK...     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

病理快速冷冻切片染色的质控切片制备

目的探索一种较佳的病理快速冷冻切片染色质控片的制备方法。方法随机抽取60例快速冷冻组织,每例取2块组织,随机分为A、B二组,在-25℃速冻后,A组(标准组)切片放入AAF液(由95%乙醇A、乙酸A、甲醛F按85:5:10的比例配制而成)固定30s后立即进行HE染色,B组切片放入AAF液固定30s后取出室温晾干后放进冷冻切片机内过夜。余下的A组及B组组织进行后续2种不同的操作。C组:得到A组切片后的组织不做任何处理,直接放冷冻切片机机箱内,并将冷冻切片机箱体温度调高至-10℃,第二天上午再次调至-25℃;D组:得到B组切片后的组织于组织上加包埋剂覆盖后放冷冻切片机机箱内,余操作同C组。C、D两组于第二天上午8点再次进行冷冻切片后同B组一同进行HE染色,以十分制评定切片有无裂隙、皱褶或冰晶,染色后组织结构、细胞核着色和核质对比清晰度等6项指标的得分,分别与A组的染色片进行比较。结果 A、B两组切片质量评价指标得分无明显差别,C组切片无裂隙指标得分低于A组,D组无冰晶指标得分低于A组;B、C两组的组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分与A组比较无显著差异;D组组织结构清晰、细胞核鲜艳、核质对比清晰指标得分均低于A组。结论新鲜的组织冷冻切片后,切片立即放入AAF液固定30s,随后取出,常温晾干后再次放进冷冻切片机机箱内过夜直至第二天上午放入全自动染色机内进行HE染色,观察染液的染色力,适用于每天快速冷冻切片工作开展前的全自动染色机的染色质控。     

不同固定液对豚鼠免疫器官石蜡切片质量的影响

摘要 目的：比较不同固定液对SPF级豚鼠免疫器官的固定效果,为筛选适用于脾脏、淋巴结和骨髓的固定液提供参考。方法：将21只300～350 g雄性SPF级豚鼠随机分为7组,每组3只,摘取脾脏、肠系膜淋巴结、髂骨骨髓,各组分别使用4 %多聚甲醛溶液、10 %中性福尔马林溶液、Bouin''s溶液、Carnoy溶液、Davidson''s溶液、Zenker溶液、Helly溶液固定48 h。髂骨骨髓在固定前浸泡于EDTA脱钙液（pH7.2）中并置于37 ℃孵箱进行脱钙。通过制作石蜡切片并进行HE染色,从切片龟裂程度、细胞形态、染色效果等方面比较7种固定液对切片质量的影响。结果：10 %中性福尔马林溶液固定后的脾脏未出现龟裂,白髓和红髓着色清晰,淋巴细胞形态易辨。Carnoy溶液固定后的淋巴结生发中心明区暗区分明,红蓝染色适中,淋巴细胞形态清晰。4 %多聚甲醛溶液固定后的骨髓着色适中,清晰可辨。结论：常温条件下对组织固定48 h,经HE染色后想要达到理想的切片质量,建议使用10 %中性福尔马林溶液固定脾脏,使用Carnoy溶液固定淋巴结,首选4 %多聚甲醛溶液固定骨髓,如果考虑固定的同时完成脱钙建议选择Bouin''s溶液固定骨髓。     

人胎肝组织制作蜡块脱水时间的探讨

目的:探讨人胎肝组织制作蜡块的适宜脱水时间.方法:应用16印象例不同发育阶段的人胎肝组织标本,通过HE石蜡制作技术进行探索性研究肝组织适宜的脱水时间.结果:人胎肝组织蜡块内组织浸蜡充分,与周围石蜡紧密相连.经HE染色后,在光镜下可见肝组织结构清晰,肝细胞形态完整.结论:人胎肝组织适宜的脱水时间是优质蜡块制作的关键环节.     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

两种操作方法在EBER原位杂交染色中的比较与应用

目的比较全自动免疫组织化学染色机染色和手工染色在EBER原位杂交技术中的应用。方法收集EBER染色阳性表达的不同组织标本35例,每例切片2张,分别采用罗氏Ventana免疫组织化学染色机染色和手工染色两种方式进行EBER原位杂交染色,对染色结果进行比较和分析。结果 35例手工组与仪器组染色结果一致,但仪器组阳性细胞着色深,与背景染色对比鲜明,且仪器组节省时间11h。结论两种方法在EBER染色中结果一致,但仪器组图像质量更好,且操作方法简便,更适合临床推广。     

Smo 蛋白在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义

目的:研究Smoothened(SMO)在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义。方法:选取组织标本后,运用石蜡包埋,切片后,HE染色,构建组织芯片,免疫组织化学和原位杂交方法检测Smo蛋白在肝癌和肝硬化中的表达。结果:Smo蛋白在肝癌细胞浆、良性肝肿瘤组织细胞浆、肝硬化组织中强染色,在正常组织中无染色。并且在典型肝硬化中强染色,在中度肝硬化中弱阳性。结论:Smo蛋白表达与肝癌的发生有关,Smo基因的高表达可能激活某种机制而参与诱导肝癌的发生。可能是通过异常激活Sonic hedgchog信号通路,从而诱导肝癌的发生与发展。     

脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色的影响

目的:探讨脱钙对鼠颅骨标本中肥大细胞组织化学与免疫组织化学染色影响.方法:用不同脱钙液处理小鼠颅骨标本,组织切片后进行苏木素一伊红染色、甲苯胺蓝染色、醛品红染色以及免疫组织化学染色.结果:经过不同脱钙液处理后的颅骨组织切片组织结构保存完好,肥大细胞的组织化学染色(甲苯胺蓝和醛品红染色),及肥大细胞中胰蛋白酶的免疫组织化学染色清晰.结论:不同脱钙液(8%盐酸脱钙液、EDTA脱钙液、混合酸脱钙液)处理不影响鼻腔粘膜中肥大细胞的组织化学和免疫组织化学染色.     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

超声快速石蜡切片在脱落细胞学诊断中的应用

目的 探讨新型环保超声处理试剂配合超声快速组织处理仪应用于脱落细胞学诊断中的可行性.方法 收集湖北省中西医结合医院病理科2020年3月到2021年3月之间临床送检的胸水、腹水的脱落细胞学标本各30例.每例标本取材2块,同时进行超声快速石蜡处理(快蜡组)和常规石蜡处理(常规组).分别将其石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学...     

细胞蜡块制作方法改良及在浆膜腔积液临床病理分析中的应用

目的研究并分析浆膜腔积液经多次反复离心及加固定液离心制作成细胞蜡块的成功率,并结合相关免疫细胞化学染色以验证其诊断的价值。方法选取临床怀疑恶性胸腹水的患者30例,胸腹水标本接收后放置半小时,倒掉部分上清液,剩余液体分批多次转移至同一个10 ml离心管中离心5min,2000 r/min、弃上清(一般反复转移离心5次),再加入10%的中性甲醛,2000 r/min离心5min,弃上清,此时细胞沉渣已经成小块状,取出块状细胞用滤纸包裹,装入包埋盒,放入10%的中性甲醛固定1h,然后脱水、浸蜡、包埋,制作成细胞蜡块、切片、HE染色。镜下观察细胞形态学,并结合相关的免疫细胞化学染色标记,确定胸腹水的性质及细胞来源。结果通过对细胞蜡块制作过程的改良,30例胸腹水细胞蜡块制作成功率达到100%,结合免疫细胞化学检测,对胸腹水的诊断率达到100%,且简单、经济、实用性强。结论通过对细胞蜡块制作过程的改良,并结合相关的免疫细胞化学染色检查有助于诊断晚期难以取得病理活检组织的浆膜腔积液的性质及来源,尤其针对基层病理科而言,该方法既实用又经济,值得推广。     

植物基因表达的组织原位杂交和原位组织化学分析技术的改进

改良了组织原位杂交和原位酶组织化学分析的方法。主要改进有：原位杂交采用简化的ＦＡＡ固定程序,常规石蜡包埋,切片时采取液氮深冷冻;以随机引物法标记的ＤＮＡ代替转录标记的ＲＮＡ作探针,在保湿盒中进行杂交,而不用矿物油覆盖。组织化学分析中用含铁氰化钾的显色液进行ＧＵＳ染色后再包埋、切片的程序,代替先包埋、切片再显色的常规方法,可最大限度地保持酶活性的真实性。     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。