黄瓜离体叶绿体转化方法

叶绿体是植物细胞内执行光合作用的半自主性细胞器,叶绿体转基因是研究叶绿体基因表达调控机制的重要技术。通常在细胞和组织水平进行转化时需要叶绿体同质化,因此实验周期较长。该文以无菌培养的黄瓜绿色子叶为材料,通过差速离心分离叶绿体,以0.33 mol/L山梨醇为叶绿体洗涤和悬液,在13 k V/cm电击电压条件下进行转化。经PCR、RT-PCR鉴定和荧光显微镜观察,证明外源基因能导入离体叶绿体并可进行表达。该方法有望为包括鉴定叶绿体表达载体功能等基础性研究工作提供快捷途径。     

高粱离体叶绿体蛋白质合成的研究

高粱叶绿体蛋白质在SDS凝胶电泳上至少可分离出染色程度不同的30多个条带,而具有放射性的条带只有13条。它们大部分属于叶绿体膜结构蛋白。可溶性蛋白质中只有两个具有放射性的条带。其中一个57000道尔顿的多肽是二磷酸核酮塘羧化酶大亚基。该酶的小亚基只在染色图谱中显示而无放射性。说明小亚基是由核基因编码合成的。该酶是受叶绿体和核基因联合控制的产物。在膜蛋白中32000道尔顿的多肽只在成熟叶绿体中出现,在黄化苗的质体中未发现这个多肽。它可能是叶绿体DNA上“光基因32”的产物。     

几种因子对离体豌豆叶绿体蛋白质合成的影响

利用制备的豌豆完整叶绿体研究了离体条件下蛋白质合成的条件。结果表明：叶绿体蛋白质合成的饱和光强为４５０μｍｏｌ ｍ＾－２ｓ＾－１,合成的速率在最初５ｍｉｎ内最大,此后随时间延长而合成速率下降;Ｋ＾＋对蛋白质合成有促进作用,其最适浓度为３０￣４０ｍｍｏｌ／Ｌ,进一步增加浓度其促进使用反而降低;Ｍｇ＾２＋在１ｍｍｏｌ／Ｌ以下对蛋白质合成有轻微的促进作用,当浓度超过１．５ｍｍｏｌ／Ｌ则开始产生明显的抑制     

几种因子对离体豌豆叶绿体蛋白质合成的影响

利用制备的豌豆完整叶绿体研究了离体条件下蛋白质合成的条件。结果表明：叶绿体蛋白质合成的饱和光强为450μmol-2s－1,合成的速率在最初5min内最大,此后随时间延长而合成速率下降;K 对蛋白质合成有促进作用,其最适浓度为30-40mmol/L,进一步增加浓度其促进作用反而降低;Mg2 在1mmol／L以下对蛋白质合成有轻微的促进作用,当浓度超过1．5mmol/L则开始产生明显的抑制;叶绿体的蛋白质合成随着外源氨基酸浓度的增加而很快地增加,但赵过200μmol/L以后蛋白质合成随浓度增加而有所降低。DCMU抑制叶绿体蛋白质的合成,当浓度达10μmol/L时,其抑制作用达41％。荧光自显影结果表明,叶绿体合成的主要问质蛋白为Rubisco大亚基,合成的类囊体膜蛋白中以32kD蛋白较为明显。     

离体叶绿体释氧反应中锰的必需性

近年来,结合离体叶綠体光合作用的研究,已可将光合作用整个过程大致分为三个主要部分:(1)水光解和释氧的释放;(2)光合磷酸化;(3)二氧化碳的固定和还原。可以认为,离体叶綠体加入氧化剂时在光下的释氧反应(即希尔反应),是光合作用水光解和释氧过程在体外的表现,这已在量子需要量(殷宏章等,1961;French等,1945)、光饱和现象(Hill等,1940)、有效光谱成分(陈绍龄,1952)、抑制剂效应(Macdo     

植物离体根的光形态建成

光抑制许多种植物离体根的延长生长,在 White 培养基中增添肌醇和蔗糖能改善其发育。连续白光可诱导黄瓜等植物离体根变绿、进行缓慢的叶绿素 a 和 b 以及类胡萝卜素的生物合成。叶绿体发生于中柱内的小型薄壁细胞中,在造粉休中逐渐形成:淀粉粒逐渐消失,被充满质体内的层膜系统取代,形成与叶肉细胞不同的、大量类囊体垛叠的基粒。绿色离体根短粗,有光合自养能力,鲜重及干重均大于黑暗对照。离体根的光形态建成受除草剂的不同影响。     

一种简易的大鼠离体肝脏灌流装置

参照Miller等人n 0]的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含O.15%葡萄糖的Krebs-Ringor碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2—3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%Or-5?20灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。     

一种崂山百合的离体快速繁殖技术

以崂山百合的鳞茎为外植体,通过植物组织培养技术成功获得了再生植株,建立了该植物的快速无性繁殖体系。整个组织培养过程分为芽的诱导、根的诱导和移栽三个阶段。适合芽诱导的最佳外植体是:鳞茎基部,最适培养基是:1/2 MS+0.5 mg/LNAA+0.8 mg/L KT+3%蔗糖。用于生根的最佳培养基是:1/2 MS+0.4 mg/L IBA+3%蔗糖。最适培养温度为25℃.不同基质对组培苗移栽的成活率有一定影响,其中在珍珠岩上的移栽成活率为98%。     

一种简易的大鼠离体肝脏灌流装置

参照Miller等人的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含0.15%葡萄糖的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2～3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%O_2-5%CO_2。灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。     

一种简易的家兔离体心脏灌流方法

生理实验中的经典实验,蛙心灌流给研究药物对心脏的影响提供了很好的实验平台,但是蛙心的结构毕竟区别于哺乳动物的心脏,研究结果不能说明药物对哺乳动物心脏的影响。然而哺乳动物是恒温动物,体外存活条件苛刻,设备复杂,非一般教学实验室能够实现。介绍了一种在常规生理教学实验室可以实现的简易的哺乳动物心脏离体灌流的方法。     

一种崂山百合的离体快速繁殖技术

以崂山百合的鳞茎为外植体,通过植物组织培养技术成功获得了再生植株,建立了该植物的快速无性繁殖体系。整个组织培养过程分为芽的诱导、根的诱导和移栽三个阶段。适合芽诱导的最佳外植体是：鳞茎基部,最适培养基是：1／2MS＋0．5mg／LNAA＋0．8mg,LKT＋3％蔗糖。用于生根的最佳培养基是：1／2MS＋0．4mg/LIBA＋3％蔗糖。最适培养温度为25℃．不同基质对组培苗移栽的成活率有一定影响,其中在珍珠岩上的移栽成活率为98％。     

小麦离体叶绿体翻译产物与细胞质雄性不育性的研究

关于植物细胞质雄性不育性的研究,从1954年Stephens关于高粱细胞质雄性不育性的研究报道到目前已有不少专题研究报告。从目前已有报道来看,关于线粒体的研究较多。Pring等在对玉米、高粱线粒体DNA     

介绍一种观察叶绿体的方法

观察叶绿体的理想材料是质地薄,细胞大,叶绿体明显的叶片。这样无须切片就能看到叶绿体、叶绿体在叶肉细胞内的排列方式甚至叶绿体的运动都能看到。黑藻和某些藓类大体符合这一要求。但在干旱地区,这些材料不易找到,在钙质硬水地区,黑藻难以培养。如果改用刮取叶肉法取材,则能较好地解决这一问题。取一片厚实柔软的植物叶(如大白菜),将叶片下表皮向上裹于左手指上,撕去下表皮一小块(0.5-1厘米),用刀片轻轻刮取叶肉,于显微镜下     

高等植物的一种叶绿体转录系统

引言 近几年来,在DNA序列水平上对质体基因组的结构做了广泛的研究。与之相比,对于叶绿体基因表达机理,为叶绿体RNA聚合酶所使用的促动子的组成分,以及对转录活性的时间和发育控制的调节区域却知道得很少。随着具有转录活性的叶绿体DNA蛋白质复合体--有转录活性的染色体(TAC)的分离,更详细地研究叶绿体核蛋白 。     

介绍一种叶绿体的观察方法

常规的叶绿体观察多是采用菠菜叶片上剥下的叶肉细胞层.方法虽简单.但由子细胞壁的存在,观察较困难,既便在油镜下也是模糊不清.我们实验室在进行原生质体制备和培养工作中,发现利用去壁后的原生质体观察叶绿体效果明显.大体做法如下:一、材料试剂:考虑取材方便,多以新鲜油菜叶或菠菜叶.由于菠菜叶酶解时易碎,故     

离体条件下沙枣的形态解剖学观察

在离体培养条件下,沙枣(Eiaeagnus angustifolia L.)苗分正常苗和异常苗两种类型。正常苗的株型、叶的形状和颜色与自然条件下的实生苗完全相同,所不同的是试管正常苗的叶肉中无栅栏组织,整个叶肉组织全被具叶绿体的同形薄壁细胞所充塞,无典型的表皮细胞和主脉不发达。显然在离体培养条件下,沙枣已丧失其旱性结构特征,异常苗变化更大。株型呈莲座状,园棒状等多种形态。其解剖学结构基本上不保持模式叶的形态特征。叶肉不分化,细胞不含叶绿体。茎的解剖学结构也有类似现象,主要表现在输导组织发育不良。     

一种高精度离体心肌等长收缩灌流装置

乳头肌是心脏学科常用的研究标本,将乳头肌放在灌流装置中进行人工灌流,通过换能器即可记录其机械活动。研究乳头肌等长收缩力学性能和顺应性的灌流记录装置,必须具备下述两个条件: 1.准确记录乳头肌的静息张力和主动张力:静息张力(RT)是研究顺应性的基本参数;     

介绍一种简易离体平滑肌实验的恒温装置

在做离体平滑肌实验吋,除需要营养液成分恒定外,更需保持温度的恒定,因平滑肌活动的一个很大特性是对温度的敏感。本文提供一种简易可靠的离体平滑肌实验的恒温装置。实验器材除制备标本及常规器材、药品外,另增加以下器材:7151-DM控温仪(或其它控温仪);速热器(俗称:热得快) 实验原理和方法将制备好的离体平滑肌标本,一端系于通气勾上,然后放人麦氏浴皿內。另一端连接描记杠杆,其活动曲线记录在记纹鼓上。麦氏浴皿置于2000毫升烧杯內,烧杯盛满自来水,再将控温仪的感温元件及速热器放人烧杯內,并把控温仪的输出接头串连于速热器的