体内存在天然的FSH拮抗物

许多研究表明,垂体前叶存在一组FSH的异构体(iso-FSH),由于碳水化合物部分的微异质性,使它们在分子量、等电特性、生物活性及半衰期等方面存在差异。最近,美国学者根据这些iso-FSH的不同等电特性,在pH为7～4的梯度范围内,用PBE-94柱进行层析,结果得到4个iso-FSH峰(PⅠ、PⅡ、PⅢ、PⅣ),然后分别用生物学和放免检测法测定其生物学活性和免疫活性,并计算两者的比值(B/I),结果显示,PⅠ、PⅡ、PⅢ、PⅣ的B/I值分别为0.1、8、57、2,提示PI组份中的生物学活性较低,主要表现为免疫活性。进一步研究又发现,给性功能低下的妇女使用GnRH拮抗剂后,可使血中FSH的生物学活性     

蒙药乌力吉-18对大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体表达的影响

目的:探讨蒙药乌力吉-18对大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体的影响。方法:选取40只健康雌性未孕SD大鼠,随机分为空白组、对照组、乌力吉-18高、低2个剂量组,每组10只。空白组灌胃等体积蒸馏水,对照组灌胃逍遥丸,高、低剂量组分别灌胃2.0 g·kg^-1·d^-1、1.0 g·kg^-1·d^-1乌力吉-18,连续给药31学艺术d。采用酶联免疫吸附法测定血清促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E₂)及孕酮(PROG)的含量;免疫组化法检测下丘脑组织促性腺激素释放激素(GnRH)、垂体组织促性腺激素释放激素受体(GnRHR)的表达;以蛋白免疫印迹技术检测卵巢组织促卵泡生成素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)蛋白表达量。以实时荧光定量PCR检测卵巢组织中FSHR、LHR基因表达量。结果:与空白组比较,乌力吉-18低剂量组可明显升高血清LH含量(P<0.05),上调下丘脑组织GnRH、垂体组织GnRHR表达及卵巢组织FSHR、LHR蛋白表达(P<0.05);乌力吉-18高剂量组可显著升高血清FSH、LH、E₂含量(P<0.05),上调下丘脑组织GnRH表达及卵巢组织FSHR表达量(P<0.05),并可显著升高卵巢组织中FSHR、LHR基因表达量(P<0.05);对照组可明显升高血清E₂含量(P<0.05)。结论:蒙药乌力吉-18可明显升高血清FSH、LH及E₂的含量,促进下丘脑组织GnRH、垂体组织GnRHR及卵巢组织中FSHR、LHR的表达,表明乌力吉-18能够对下丘脑-垂体-卵巢轴相关激素及受体表达产生影响。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。为研究GnRH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用,构建了GnRHcDNA的原核表达载体并进行融合表达。利用RT-PCR方法从丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41.6%。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,Amylose-sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白。目的蛋白经FactorXa酶切裂解,Amylose-sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白。以80μg/只的剂量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对GnRH前体蛋白的血清抗体应答,免疫组抗体水平显著高于空白组(P<0.05),且加强免疫第5周后抗体效价为0.707±0.320,达到高峰值,说明表达产物具有免疫原性,可以刺激机体产生免疫应答。     

GnRH及其受体在性成熟前后鲇、黄颡鱼脑、垂体和卵巢中的免疫细胞化学定位

用链霉亲和素 -生物素化过氧化物酶复合物 (StreptAvidinBiotin peroxidaseComplex ,SABC)免疫细胞化学方法 ,使用促性腺激素释放激素 (Gonadotropin releasinghormone ,GnRH)以及促性腺激素释放激素受体 (GnRHR) 2种抗血清对性成熟前后的黄颡鱼 (Pelteobagrusfulvidraco)和鲇鱼 (Silurusasotus)的脑、垂体、卵巢中的免疫活性内分泌细胞进行了免疫细胞化学定位。结果表明GnRH和GnRHR免疫活性在两种鱼的各脑区、垂体、卵巢中均有分布 ;两种鱼在性成熟时它们的下丘脑、垂体和卵巢中的GnRH和GnRHR免疫反应细胞数目和免疫反应强度明显高于性成熟前。本文讨论了GnRH、GnRHR直接或间接参与黄颡鱼和鲇鱼性腺发育成熟调节的可能性及形态学证据。可为下丘脑 垂体 性腺轴、神经 内分泌、GnRH功能的多样性等研究领域提供新的形态学依据。     

卵巢内发现促性腺激素释放激素样蛋白质

近来许多报道表明,促性腺激素释放激素(GnRH)或GnRH样物质可直接影响卵巢功能,其中包括对离体颗粒细胞和黄体细胞功能的影响以及GnRH拮抗剂在体内加强FSH对卵巢内卵泡发育的作用。在未成年和成年大鼠离体颗粒细胞和黄体细胞均发现有 GnRH 受体。这提示,卵巢内可能合成 GnRH 或 GnRH样肽。美国学者 Aten 等用大鼠黄体化卵巢检测是否存在有 GnRH 或 GnRH 样肽。他们用50IU 孕马血清     

GnRH脉冲模式对FSH分泌的影响

本文目的是进行GnRH脉冲模式对FSH分泌影响的研究。用GnRH以不同的脉冲振幅、不同的频率对GTH细胞进行刺激后,检测FSH的24 h分泌量。结果表明,FSH的24 h分泌量,以频率为120 min、振幅20 nmol/L时的GnRH脉冲模式为最高,并且随着GnRH刺激频率的增快或减慢,FSH的分泌量均呈逐渐减少趋势。所以,GnRH脉冲频率本身就是一个调控信号,不同脉冲频率GnRH对FSH表达有着明显不同的影响,在相同振幅条件下,低频脉冲刺激(120 min间隔)时FSH的分泌达到高峰。     

c-fos在卵泡刺激素生成中的作用及信号转导通路

c-fos作为一种即刻早期基因,在介导脉冲性促性腺激素释放素(GnRH)刺激下垂体中卵泡刺激素(FSH)的合成与释放中发挥重要作用。本文就c-fos在介导不同频率GnRH脉冲刺激下cAMP信号通路、MAPK信号通路、Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶信号通路和活化T细胞核因子(NFAT)信号通路的信号转导后FSHβ转录中的作用进行综述,以便更深入地理解不同频率的GnRH脉冲性刺激下FSH生成的生理机制,这将有助于研发免疫治疗的分子靶位,最终有效的治疗由于c-fos或相关信号转导通路分子的缺乏或突变所致的不孕/不育。     

测定Epstein-Barr病毒IgA/EA抗体的改进方法

用免疫酶法(IE)检查鼻咽癌(NPC)病人血清中IgA/EA抗体,阳性率为73％,几何平均滴度为25,将血清用马抗人IgG血清或葡萄球菌菌体A蛋白(SPA)处理后,以除去竞争性IgG类抗体后,阳性率可增高至92％,几何平均滴度提高到89,有15例NPC病人血清,经马抗人IgG血清处理前IgA/EA抗体为阴性,处理后均呈阳性反应。     

光周期—褪黑素信号调控高原鼠兔精原细胞分化和季节性精子发生

高原鼠兔是青藏高原特有的小型哺乳动物,其繁殖活动呈现明显的季节性。成年雄性高原鼠兔在繁殖期睾丸重量显著增加,精子发生正常进行,而在非繁殖期睾丸退化,精子发生阻断在未分化精原细胞阶段。光周期控制实验显示,长光照（16h∶8h）诱导非繁殖期高原鼠兔重新启动精原细胞分化和精子发生;而短光照（8h∶16h）显著抑制繁殖期高原鼠兔精子发生。酶联免疫分析发现,褪黑素分泌水平在长日照条件下降低而在短日照条件下升高。非繁殖期高原鼠兔连续注射褪黑素拮抗剂能诱导生殖细胞发育和精子发生恢复。促性腺激素释放激素(GnRH)与黄体生成素(LH)在繁殖期鼠兔下丘脑垂体显著升高,促卵泡素（FSH）水平无显著差异。注射GnRH可以促进非繁殖期高原鼠兔精原细胞分化和精子发生,而褪黑素注射后抑制GnRH的分泌进而负调控性腺轴。综上,高原鼠兔季节性精子发生受光周期-褪黑素信号控制,后者主要通过控制GnRH、LH水平影响精原细胞分化。本研究对理解季节性动物精子发生的调控机制有重要借鉴意义。     

GnRH相关肽在大鼠垂体前叶的细胞学定位

本研究应用特异性抗GnRH相关肽(GAP)N端11个氨基酸的抗血清和六种垂体前叶激素的抗血清,通过免疫组织化学双重染色技术观察GAP在大鼠垂体前叶细胞的定位。结果发现,GAP样免疫反应性物质存在于LH细胞和FSH细胞,而未见于GH、PRL、TSH和ACTH细胞。本文首次证明GAP存在于正常大鼠垂体促性腺激素细胞,为GAP调节LH和FSH的分泌提供了形态学证据;也支持GAP的功能序列在其分子的N端,或GAP进一步裂解出N端片段而发挥作用。     

酪氨酸对未成年大鼠卵巢Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶活性的影响

利用PMSG(妊娠母马血清促性腺激素)及HCG(人羢膜促性腺激素)处理的未成年大鼠卵巢匀浆,通过测定Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶(HSD)活性,研究了酪氨酸影响孕酮的代谢机理。结果表明,同一浓度的酪氨酸(60微克/毫升)加到排卵后不同时间(12—72小时)的卵巢匀浆中,Δ~5-3β-HSD活性增加,并随着时间延长有逐渐增加的趋势。酪氨酸组同对照组间差异非常显著(P<0.001),不同浓度的酪氨酸(30—160微克/毫升)加到排卵后同一时间(24小时)的卵巢匀浆,也能提高Δ~5-3β-HSD活性,酪氨酸组与对照组间差异非常显著(P<0.001)。     

人胎盘中抑素和绒毛膜促性腺激素之间有(?)反馈环

已证明,足月家兔和人胎盘中存在抑素(inhibin)样生物活性和免疫活性。美国 Petraglia 等研究了胎盘抑素的定位、局部作用及其调节。结果表明,抑素样免疫活性存在于人足月胎盘细胞滋养层细胞和人滋养层原代培养中。人绒毛膜促性腺激素(hCG)促进上述离体培养胎盘细胞分泌抑素。此效应可被8-溴-cAMP以及腺苷酸环化酶活化剂 forskolin 和霍乱毒素模拟,提示 hCG 诱发胎盘抑素分泌的机理依赖于 cAMP。当滋养层细胞与抗人抑素α-亚基抗血清共同培养时,其中 hCG 和促性腺激素释放激素(GnRH)样免疫活性     

重组人促性腺激素释放激素及导肽的分离纯化与活性分析

对含重组人促性腺激素释放激素(GnRH)及导肽(LEP)的工程菌株进行诱导表达,分离纯化GnRH/LEP并进行生物学活性分析.工程菌IPTG诱导,收获的菌体经超声破碎后,裂解液用Glutathione-Sepharose 4B亲和层析纯化GST-GnRH/LEP融合蛋白,经CNBr裂解、Sephadex G-25柱脱盐、QAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析和RP-C18柱脱盐,得到纯度大于98%的重组GnRH/LEP.Western blot表明表达产物均具有GrRH抗原特异性.生物学活性分析表明:该表达产物可促进小鼠次级卵泡向成熟卵泡发育,可提高其血清中E2含量.     

孕酮通过细胞膜机制刺激下丘脑GnRH释放

孕酮刺激下丘脑释放促性腺激素释放激素(GnRH)的分子机制不同于经典的甾体激素两步作用原理,可能通过其它的细胞机制发挥作用。为了探讨孕酮作用于下丘脑细胞可能存在的细胞膜机制,作者将孕酮连接在牛血清白蛋白(BSA)分子上,观察它们在用雌激素维持的去卵巢未成年大鼠的离体视前区-下丘脑前区-下丘脑内侧基底区(POA-AHA-MBA)低冷灌流系统中对 GnRH 释放的影响,结果表明,孕酮-3-羧甲基肟 BSA(P-3-BSA)可使 POA-AHA-MBA 释放 GnRH 逐渐增加,4h 后达到高峰;而孕酮-11α-半琥珀酰-BSA(P-11-BSA)和11-去氧可     

性腺素:卵泡液中刺激垂体促性腺激素分泌的肽

作者给22天的未成年雌性大鼠注射孕马血清促性腺激素,于25天处死,取卵巢,将卵泡液处理后得到大鼠卵泡液性腺素(gonadocrinin)的粗制剂。将此性腺素制剂加入垂体细胞单层培养以后,培养液中的LH和FSH均增加。而以同样方式处理大鼠肝脏所得到的制剂无此作用。在大鼠间情期第二天,静脉注射该性腺素,血清LH水平的变化与用LRF处理的大鼠相似。这说明,在体及离体条件下,性腺素均能刺激垂体分泌促性腺激素。离体条件下,性腺素仅仅刺激LH和FSH的分泌,对其它几种垂体激素(PRL、GH及TSH)的分泌均无影响。这提示性腺素的作用具有特异性。用放射免疫测定法证明,该性腺素制剂中没有可测出量的FSH、LH、雌激素、孕酮及睾丸酮。     

芹菜素对雌性大鼠生殖轴的影响

目的：探讨芹菜素在10-9mol/L浓度时对雌性大鼠生殖功能的影响。方法：应用侧脑室注射方法观察芹菜素对雌性大鼠生殖轴激素含量的影响。在侧脑室注射后第3天取血浆,采用放免技术测定血浆中促性腺激素释放激素（GnRH）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）的含量。结果：在给药后第3天血浆中促性腺激素释放激素（GnRH）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）的含量增加而雌二醇（E2）、孕酮（P）的含量降低,差异有显著性。结论：芹菜素抑制雌二醇（E2）合成中芳香化酶的活性实现对雌二醇（E2）、孕酮（P）分泌的抑制。芹菜素通过影响雌激素受体而使下丘脑的促性腺激素释放激素（GnRH）和腺垂体的卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）分泌增加。     

抑素特异性地降低垂体 FSHβmRNA 水平

澳大利亚 Mercer 等研究了牛卵泡液抑素对母羊(下丘脑和垂体间中断及卵巢已切除)垂体 LH 和 FSHβ、α亚基以及 PRL 等的 mRNA 浓度的影响。实验母羊预先给予 GnRH 脉冲,每2h 一次,共给一周,以维持垂体的功能。动物给予牛卵泡液(2ml/只)6h 后(牛卵泡液每 ml 相当于9～18kU 抑素),垂体 FSHβmRNA浓度下降约80%,同时血浆 FSH 浓度仅下降8%,30h 后,血浆 FSH 浓度下降50%时,垂体 FSHβmRNA浓度下降90%之多。说明抑素选择性地降低 FSHβ基因表达水平,而并不是简单地抑制 FSH 从垂体释放。     

GnRH在性成熟高白鲑神经系统及性腺中的分布定位

摘要：应用免疫组织化学方法,系统观察性成熟期高白鲑(Coregonus peled)神经系统及性腺中的促性腺激素释放激素( GnRH)的分布情况。结果表明,GnRH在大脑、小脑、中脑、脊髓、延髓中免疫阳性反应明显,且主要分布在神经元内。GnRH免疫阳性细胞在卵巢和精巢中均有分布,而且其阳性部位在卵巢主要分布于小生长期卵...     

卵泡刺激素和雌激素对培养的鸡胚卵巢生殖细胞增殖的影响

在动物体内多种激素共同调控着卵巢生殖细胞的生长、发育和成熟,其中促性腺激素起着至关重要的作用。本实验建立了鸡胚(18日胚龄)卵巢构建生殖细胞和体细胞的共培养模型,并研究卵泡刺激素(FSH)、17B雌二醇(E2)以及二者联合处理对生殖细胞增殖的影响。结果发现FSH(0．25-1．0IU／mL)、E2(10-1000ng／mL)处理48h后均可显著促进生殖细胞的增殖,FSH与E2共同处理作用更加显著且高于其单独处理组,表明FSH和E2可协同刺激鸡胚卵巢生殖细胞的增殖,FSH可能是通过促进雌激素或其受体的合成而发挥作用。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素前体蛋白的克隆与表达

促性腺激素释放激素（gonadotropin—relying hormone,GnRH）是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。为研究GnRH对性腺发育的作用,构建了GnRH cDNA的原核表达载体并进行融合表达。利用RT—PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL—c2x中构建重组表达质粒pMAL—GnRH,并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41．6％。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,Amylose—sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白。目的蛋白经Factor Xa酶切裂解,Amylose—sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白。该研究为鱼类GnRH蛋白的控制性腺成熟和抗体制备打下了基础．是国内鱼类GnRH前体蛋白在原核细胞中成功表扶的首次报道．