杂交狼尾草胚性愈伤组织的诱导与植株再生

以杂交狼尾草初级愈伤为材料,运用方差分析的方法研究不同因素对杂交狼尾草胚性愈伤诱导率与植株再生率的影响。结果发现,2,4-D和TDZ对杂交狼尾草胚性愈伤诱导影响显著,最佳的胚性愈伤诱导培养基为MS+3.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 TDZ,诱导率为54%;愈伤分化培养基以附加0.1 mg·L-1 TDZ+0.2 mg·L-16-BA+3.2 mg·L-1 CuSO4的 MS培养基为最佳,再生率为68.33%,褐化率为8.33%;分化培养基中添加0.8~3.2mg·L-1的CuSO4均能促进杂交狼尾草愈伤组织分化,而添加AgNO3对杂交狼尾草愈伤分化无显著影响。该技术为离体诱变获得杂交狼尾草低温种质材料奠定了基础。     

油桐叶柄高效直接再生体系的建立

以油桐无菌苗叶柄为外植体,研究植物生长调节剂对其离体培养及植株再生的影响。结果表明:叶柄直接诱导不定芽的最佳培养基1/2MS+3.0 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 IAA,诱导率达91.67%;最佳继代增殖培养基1/2MS+3.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 GA3,增殖系数可达4.89;最佳生根培养基为1/2MS+0.05 mg·L-1 IBA,生根率96.18%。炼苗移栽到泥炭土:珍珠岩:黄土=2:1:1的基质中,成活率达93.55%以上。     

麻栎成熟合子胚外植体体胚发生和植株再生

为探索麻栎快速繁殖技术新途径,以成熟合子胚为外植体诱导体胚发生,进一步培养形成幼苗。结果表明:体胚诱导以MS+1.0mg.L-1 6-BA+1.0mg.L-1 IBA+1.0g.L-1谷氨酰胺+0.5g.L-1脯氨酸为最优,培养30d诱导率达70.0%;体胚成熟以1/2MS+2.0mg.L-1 6-BA+0.5mg.L-1 IBA+2.0mg.L-1 ABA+4.0g.L-1谷氨酰胺+2.0g.L-1脯氨酸为佳,培养60d,体胚完全成熟;体胚萌发最适培养基为1/2MS+0.2mg.L-1 6-BA+10g.L-1山梨醇,且冷处理有利于体胚的萌发,萌发率高达100%,萌发培养80d,形成再生植株。     

泰山酸枣离体叶片再生体系的建立

以泰山酸枣叶片为外植体,以WPM为基本培养基,研究了植物生长调节剂种类、浓度及培养方法等因素对离体叶片不定芽再生的影响,结果表明:不定芽启动的最佳培养基激素组合为1.0 mg·L-1 TDZ+0.5 mg·L-1 IAA;不定芽诱导伸长最佳培养基的激素组合为0.1 mg·L-1 IAA+0.5 mg·L-1 GA3.暗培养是不定芽再生的必需条件,在最适宜的不定芽再生培养基上,叶片连续光培养,不定芽不能再生;叶片先进行暗培养3周后转入光下培养,叶片不定芽再生效果最好,再生率最高可达100%.     

同源四倍体灯盏花离体再生及其倍性鉴定

以四倍体灯盏花的无菌苗叶柄为外植体进行离体培养,研究其再生体系,并对再生植株进行染色体倍性鉴定。结果表明:叶柄外植体在MS+0.05 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA+0.65%琼脂+3%蔗糖的培养基上不定芽的再生频率可达87.3%;继代培养(MS+0.1 mg·L-1NAA+0.3 mg·L-16-BA+0.65%琼脂+3%蔗糖)增殖系数为7.8,诱导(1/2MS+1.0 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1IBA+0.65%琼脂+3%蔗糖)生根率100%,移栽成活率为90%。细胞学鉴定结果表明,再生植株的染色体数为2n=4x=36,而原二倍体的染色体数目为2n=2x=18,基数x=9,因此,再生植株为四倍体。     

棉花大田植株叶柄组织培养体系的建立

以早熟棉花品种'中棉所24'为材料,通过对大田棉花植株叶柄灭菌条件、叶柄愈伤组织诱导与分化、胚状体的萌发及植株再生所需的培养基等进行研究,以建立棉花大田植株叶柄组织培养体系.结果表明:棉花植株叶柄经0.1%HgCl2灭菌4～5 min后,横切成0.8 cm左右的小段,在MSB+0.05 mg·L-1IAA+0.05 mg·L-1KT+0.05 mg·L-12,4-D+25 g·L-1葡萄糖+2 g·L-1Gel(pH 5.8)培养基上培养,易获得分化的愈伤组织;愈伤组织在添加有KT/IAA(MSB+0.08 mg·L-1IAA+0.08 mg·L-1KT+25 g·L-1葡萄糖+2 g·L-1Gel,pH6.5)或ZT/IBA(MSB+0.1 mg·L-1ZT+0.1 mg·L-1IBA+25 g·L-1葡萄糖+2 g·L-1Gel,pH 6.5)的分化培养基中,均可以获得胚性愈伤组织.胚性愈伤组织在MSB+0.05 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1IAA+25 g·L-1蔗糖+2 g·L-1Gel(pH 6.5)培养基上,形成胚状体、生长发育成再生植株.     

大叶蚁塔组织培养技术

以大叶蚁塔茎尖作为外植体诱导出无菌苗,再以无菌苗的嫩叶诱导不定芽发生,研究了其离体培养和不定芽再生的过程,成功建立了低成本的快速繁殖技术体系。结果表明:(1)无菌苗增殖培养基为MS+BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,培养30 d,增殖率稳定为3.80;(2)叶片可直接诱导再生出不定芽,其最佳培养基为MS+ZT 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,诱导率达95%,分化幼苗众多;(3)生根培养基为1/2MS+NAA1 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1时,生根率达95%。     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

乌桕不同外植体高效再生探索

以乌桕的成熟胚、胚乳、叶片和茎段为外植体,建立高效、稳定的组培快繁再生体系,并成功获得其再生苗.结果表明:(1)全胚乳带胚的愈伤组织诱导率达90%,其愈伤组织继续在MS+1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 6-BA培养基上培养,不定芽最多达15个/外植体.(2)去胚乳的胚不加调节剂则胚直接萌动成苗,萌动率和成苗率可达100%;去胚乳的胚在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 6-BA最佳培养基中培养,其胚轴处可直接诱导不定芽,最多达6个/外植体.(3)无菌苗叶片在MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 6-BA培养基中诱导的有效不定芽数最高达18个/外植体,诱导率达90%.(4)茎段在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1~0.3 mg·L-1 6-BA培养基上不定芽的诱导率较高(100%),直接诱导的不定芽数最多达17个/外植体.(5)芽苗在1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA上生根率达到100%,但根系较细弱,而在MS+1.0 mg·L-1镧稀土中的生根率达100%,且根系粗壮;生根的小苗练苗移栽后温室内成活率为89.2%,移栽到室外沙质土壤中的成活率为68.9%.     

苦荞胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

以苦荞子叶和下胚轴为外植体,进行了不同浓度激素组合的MS和SH固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生的研究。结果发现,MS培养基比SH培养基更有利于胚性愈伤组织诱导;2,4-D是诱导愈伤组织的有效激素,KT能有效促进胚状体的形成;下胚轴和子叶都能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株。下胚轴在MS 1.5mg·L-12,4-D 1.5mg·L-1BA培养基,子叶在MS 2mg·L-12,4-D 0.5~1.5mg·L-1BA上能高效诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS 2mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1KT培养基中继代,能有效诱导胚性愈伤组织;来自下胚轴的胚性愈伤组织在1/2MS 2.0mg·L-1BA 0.5mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上能够高频再生出芽,来自子叶的胚性愈伤组织在1/2MS 1.0mg·L-1BA 0.1mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上芽诱导率较高;MS 1mg·L-1NAA是适宜的再生苗生根培养基。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

宽叶弹簧草的组织培养与快速繁殖

以宽叶弹簧草Ornithogalum concodianum休眠期的鳞茎为材料,进行离体再生体系研究。结果表明,培养基MS(KH2PO4 加倍)+6-BA 4.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1适宜鳞茎诱导,诱导率达54.2%;对鳞茎增殖的主要影响因素为6-BA,培养基2/3MS(KH2PO4 加倍)+6-BA 4.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+蔗糖2%适宜鳞茎增殖,增殖系数为4.0;培养基1/2MS(大量元素减半,其他成分不变)+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1生根效果较好;适宜的栽培基质为草炭∶园土∶火山岩(体积比)＝5∶1∶1,成活率可达89.6%。     

百合体细胞胚胎发生和植株再生

以切花百合(Lilium)品种‘黄天霸’(‘Manissa’)花器官为外植体诱导体细胞胚胎发生与植株再生。结果表明,不同花器官、不同激素配比对愈伤组织形成均具有显著影响。花丝为最佳外植体,激素对愈伤组织诱导的影响效应为NAA>6-BA>2,4-D,最适培养基为MS+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-16-BA;激素诱导体细胞胚胎发生的影响效应为2,4-D>KT>6-BA,最佳培养基配方为MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1KT+1.0 mg.L-16-BA;MS培养基添加IBA可促进体细胞胚萌发成苗,体细胞胚芽成苗的最佳培养基为MS+0.2 mg.L-16-BA+1.0 mg.L-1IBA。     

软枣猕猴桃‘天源红'离体再生体系的建立

为了建立快速高效的全红型软枣猕猴桃离体再生体系,该研究以果皮、果肉均为红色的软枣猕猴桃新品种‘天源红’( Actinidia arguta)带腋芽茎段和幼嫩叶片、叶柄为外植体材料,采用组织培养的方法,研究适合其离体再生的外植体类型以及最佳植物生长物质组合。结果表明：初春带腋芽的茎段是最好的获得无菌苗的外植体材料,诱导腋芽出芽的最佳植物生长物质组合为MS＋6－BA 0.5 mg·L-1＋IBA 1.0 mg·L-1;研究发现叶柄比叶片更适合进行‘天源红’愈伤组织诱导,叶柄诱导的最佳植物生长物质组合为MS＋ZT 0.5 mg·L-1;同时,研究了不定芽增殖的最佳植物生长物质组合为MS＋ZT 1.0 mg·L-1;此外使用6－BA也可以达到较高的不定芽增殖率,在生产上可以替代ZT进行不定芽分化,即MS＋6－BA 2.0 mg·L-1＋IBA 0.5 mg·L-1;较适宜的生根培养基为1/2 MS＋NAA 0.2 mg·L-1;生根后的组培苗在珍珠岩∶泥炭∶细沙＝1∶1∶1的基质配比中能够达到98％的移栽成活率。该研究结果建立了全红型软枣猕猴桃的离体再生体系,为全红型软枣猕猴桃苗木快繁、工厂化育苗提供了技术支持,同时建立的再生体系为软枣猕猴桃遗传转化研究提供了基础。     

马尾松胚乳愈伤组织发生的初步研究

为获取马尾松(Pinus massoniana)单倍体材料，建立其胚乳组织培养体系，对马尾松胚乳不同的消毒方法进行筛选，并分析不同基本培养基、生长调节剂配比和热激处理对愈伤诱导的影响。结果表明，胚乳的最佳消毒方式为75%酒精处理30 s+2% NaClO消毒15 min，外植体污染率为0，死亡率仅为15.56%；生长素可促进愈伤诱导且是必需的；细胞分裂素浸泡种子可代替培养基中的细胞分裂素，并能取得比较好的胚乳愈伤诱导效果，1.0 mg·mL-1 6-BA浸泡30 min处理的效果最佳，在培养基WPM+NAA 2.0 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1中，愈伤诱导率高达87.78%；培养基DCR+NAA 2.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1的胚乳愈伤诱导率最高(68.75%)；热激处理可提高胚乳愈伤的诱导率和质量，以相对湿度85%下45 ℃热激10 min最佳，总愈伤诱导率为66.25%，成团愈伤诱导率达8.75%；增殖培养以培养基WPM+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1最佳，增殖率达83.33%。     

黑莓品种‘Arapaho’离体叶片不定芽诱导影响因素分析及再生体系建立

以黑莓(Rubus spp.)品种‘Arapaho’无菌苗叶片为外植体,通过正交和单因素实验分别研究了基本培养基类型、6-BA和1BA质量浓度以及暗培养时间、外植体的叶位和接种方式对不定芽诱导的影响,并研究了IBA质量浓度对不定芽生根的影响;在此基础上,初步建立了黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系.正交实验结果表明:基本培养基类型对叶片不定芽诱导率及平均不定芽数的影响最大,而IBA质量浓度对叶片不定芽诱导率及6-BA质量浓度对平均不定芽数的影响较小;适宜‘Arapaho’叶片不定芽诱导的最佳培养基为含有2.0mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基.单因素实验结果表明:暗培养时间、外植体的叶位及接种方式对不定芽诱导率有显著影响;最适宜的暗培养时间为21 d;植株中、上部叶片的再生能力较强,其中第3和第4位叶的不定芽诱导效果最佳;叶面朝上接种更有利于不定芽的诱导.在含0.2 mg·L-1 IBA的MS培养基中,不定芽生根率达100.0％,且根数多、长势良好.黑莓品种‘Arapaho’离体叶片的再生体系为:以无菌苗的第3和第4位叶为外植体,经过适当修剪后叶面朝上接种于含有2.0 mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1IBA的MS培养基上,暗培养21 d后置于光照条件下培养30 d;将不定芽转接到含有0.5 mg·L-16-BA和0.3mg·L-1 NAA的MS培养基上进行继代培养;当不定芽高约2 cm时转接到含有0.2 mg·L-1IBA的MS培养基上进行生根培养,最终获得完整植株.     

锡金海棠子叶再生体系的建立

锡金海[Malussikkimensis（Wenz．）Koehne]是我国稀有植物和优良苹果砧木种质资源。本研究探讨了影响锡金海棠离体再生的条件,建立了锡金海棠子叶高效离体再生体系。结果表明,子叶再生体系的最佳诱导培养基SC＋0．1mg·L-1 NAA＋2．0mg·L-1 TDZ,最佳分化培养基SC＋0．1mg·L-1 NAA＋1．5mg·L-1 TDZ,最佳继代增殖培养基SC＋2．0mg·L-1 6-BA＋0．2mg·L-1 NAA,最佳生根培养基为1／2MS＋I．0mg·L-1 IBA。炼苗后,移入珍珠岩、花生壳与草炭（1：1：1）的基质中,20d移栽成活率高达90％。     

柠檬醛猴樟茎段组织培养技术研究

柠檬醛猴樟是重要的园林绿化、用材、油用树种。以柠檬醛猴樟一年生枝条为材料,研究采集季节、消毒时间、激素对柠檬醛猴樟茎段组织培养的影响。结果表明：5月中旬,柠檬醛猴樟半木质化茎段组织培养用浓度为0.1% HgCl₂消毒5 min,茎段腋芽萌芽率最高,褐化率和污染率较低。猴樟茎段萌芽适宜培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.05 mg·L^-1 IBA,萌芽率为60%。增殖适宜培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 IBA,增殖系数为4.33、株高为3.67 cm、地径为1.04 mm。生根培养11 d基部出现不定根,生根适宜培养基为MS+1.5 mg·L^-1 IBA,生根率75.00%、根长5.06 cm、根数3.50、根粗0.82 mm。根数大于3的组培苗,移栽成活率80%以上。     

三倍体枇杷的茎尖培养及诱导生根

以三倍体枇杷为材料, 研究了不同消毒方式、MS培养基浓度、植物生长调节剂及浓度配比对茎尖培养及诱导生根的影响。结果表明, 初代培养时, 选择生长饱满、健壮的顶芽及适宜的消毒方式, 外植体剥离长度0.5-0.8 cm, 能显著提高茎尖培养的成活率; MS培养基浓度的变化对外植体的褐化没有明显的影响; 最适茎尖的启动培养基为MS＋1.0 mg·L-1 6-BA＋0.5 mg·L-1 NAA, 成活率高达84.8%; 最适组培苗生根培养基为1/2MS＋0.1 mg·L-1 NAA＋0.01 mg·L-1 IAA＋0.3%活性炭, 生根率达66.7%, 每株平均生根2.83条。该研究结果将为三倍体枇杷再生体系的建立及利用转基因技术对三倍体无籽枇杷进行遗传改良奠定基础。