单克隆抗体靶向制剂的研究进展

本文综述了制备单克隆抗体免疫偶合物的三种方法,即抗体与药物直接交联的方法,药物通过小分子与抗体连接的戊二醛法、顺乌头酸酐法、活性酯法、Ｎ－琥珀酰胺基－３－（２－吡啶基二硫）丙酸法（ＳＰＤＰ法）、腙衍生物法和肽键连接等方法,以及用大分子做载体的交联方法,并介绍了葡聚糖、聚谷氨酸、聚赖氨酸和聚合多肽作载体的性质和应用情况。     

尿激酶抗人交联纤维蛋白—D—二聚体单抗化学偶合体的制备

利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂,合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫ．ＭＡ－ＨＩＤ１）并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,获得偶合体产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,其分子量约为２０００００,纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活     

尿激酶抗人交联纤维蛋白-D-二聚体单抗化学偶合体的制备

利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂,合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫＭＡ－ＨＩＤ１）,并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,获得偶合体产物．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,其分子量约为２０００００．纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活为５３０００ＩＵ／ｍｇ尿激酶蛋白,与偶联前的５４３００ＩＵ／ｍｇ蛋白相仿．ＥＬＩＳＡ测试显示,偶合体对人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体有免疫反应性,并且与偶联前的抗Ｄ－二聚体单抗对此抗原的反应性相当     

柱孢菌细胞色素P－450nor2cDNA克隆与表达

在真菌的反硝化作用中,一种独特的细胞色素Ｐ－４５０起着一氧化氮还原酶（Ｐ－４５０ｎｏｒ）的作用。用ｇｔｌｌ构建了柱孢菌（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎｔｏｎｌｅｉｎｅｎｓｅ）ｃＤＮＡ文库。纯化的柱孢菌Ｃ。Ｐ－４５０ｎｏｒ２免疫兔,制备抗体。并用抗体筛选出阳性克隆。回收插入片段（Ｐ－４５０ｎｏｒ２ｃＤＮＡ）克隆到表达载体ｐＹＥＳ２中,并在酵母系统中表达。经Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ分析验证,表达产物能与抗体反应产生特异性杂交带。酶分析结果表明：表达产物具有一氧化氮还原酶细胞包素Ｐ－４５０ｎｏｒ２的活性,能以ＮＡＤＨ或ＮＡＤＰＨ为供体,使ＮＯ还原先成Ｎ２Ｏ。     

甲型副伤寒菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备 …

以脱毒后去除类脂Ａ的甲型副伤寒杆菌高分子量Ｏ－ＳＰ１和低分子量Ｏ－ＳＰ２为特异笥抗原,以破伤风类毒素（ＴＴ）为蛋白质载体,用已二酸二肼（ＡＤＨ）作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示单独注射Ｏ＿ＳＰ１或Ｏ－ＳＰ２免疫小鼠后,均不能刺激小鼠产生抗ＬＰＳ抗体;而用Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ和Ｏ－ＳＰ２－ＴＴ结合物免疫后,小鼠血甭中均产生了特异性抗－ＬＰＳ－ＩｇＧ抗体,且Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ免疫组     

乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后,插入表达载体ＰＳＢ－９２中,使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ,约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证,能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定,ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP—1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应,采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

狗和大鼠回肠壁丛内5－羟色胺能神经元免疫组织化学观察

狗和大鼠回肠壁丛内５－羟色胺能神经元免疫组织化学观察邓成国,李林,林传友,殷光甫,茹立强（同济医科大学神经生物学教研室,武汉４３００３０）应用５－羟色胺（５－ＨＴ）抗体的免疫组织化学改良ＰＡＰ法对正常小狗（２只）回肠切片标本,正常大鼠（８只）和５－羟...     

乙肝病毒表面抗原抗体可变区基因的克隆及人－鼠嵌合抗体重链基因的表达

本文采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,从鼠抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）单克隆细胞中克隆到了该抗体重、轻链可变区（Ⅴ区）基因,并分别将其与人的恒定区基因Ｃγ３,Ｃｋ相拼接,构建人－鼠嵌合抗体基因。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析结果证实嵌合抗体重链基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了表达。间接ＥＬＩＳＡ法免疫测定的结果表明该表达产物具有与乙肝表面抗原结合的能力。     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

基因免疫和蛋白免疫制备抗P16抗血清

蛋白免疫,是传统的抗体制备法,基因免疫是新型的抗体制备法。为了制备抗这Ｐ１６抗血甭以及比较基因免疫和蛋白免疫制备抗体,分别以融合谷胱甘肽２－转移酶－Ｐ１６５和克隆有ｐ１６肿瘤抑制基因相关ｃＤＮＡ的裸露真核表达载体ｐＣＭＶ－ｐ１６经皮内多点注射接种家兔,制备抗Ｐ１６抗血清,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测到蛋白免疫的抗Ｐ１６抗血清滴度为１：６２５,明显高于基因免疫制备的Ｐ１６抗血清滴度。     

ASGP受体介导的体内基因转移

我们针对肝细胞特异的ＡＳＧＰ（去唾液酸糖蛋白）受体,构建了一种具有肝细胞特异导向性的基因转移载体系统,该载体包括两种共价结合的功能成分：一种为ＡＳＧＰ,作为配体,与肝细胞表面特异的ＡＳＧＰ受体结合;另一种为多聚左旋赖氨酸（ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ）,与ＤＮＡ以强静电作用相结合。小鼠尾静脉注射３２Ｐ－ＤＮＡ－ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ－ＡＳＯＲ（去唾液酸ａｌ酸性糖蛋白）或等量的３２Ｐ－ＤＮＡ、ＡＳＯＲ、ｐｏｌｙ－ＤＬ－ｌｙｓｉｎｅ单体混合物,２０小时后,小鼠肝、脾、肾各组织的放射性计数结果表明该载体系统具有较强的肝组织特异性。     

重组逆转录病毒载体GTK的构建及HyTK基因转移的研究

用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物９（１,３－二羟基－珍氧基－甲基）鸟嘌呤选择性地杀死肿瘤细胞,将ＨｙＴＫ基因替换逆转录病毒载体ＧｌＮａ中的ｎｅｏ基因,构建成重组逆转病毒载体ＧＴＫ,转染混合包装细胞（双噬性ＰＡ３１７细胞和单噬性ＧＰ＋Ｅ－８６细胞）,通过“乒乓效应”获得高滴度重组病毒,用该重组病毒转染不鼠恶性黑色素瘤细胞系Ｂ１６细胞,用ｙｇｒｏｍ     

顺铂及其水解产物与红细胞膜相互作用的动力学研究

顺铂（ＤＤＰ）和顺式二水二氨合铂（Ⅱ）（ＡＡＰ）与人红细胞膜的相互作用已经用荧光及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法研究,实验结果表明,ＤＤＰ和ＡＡＰ与人红细胞膜蛋白相互作用属双阶段一段反应动力学,而且ＡＡＰ的反应速率比ＤＤＰ大。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究表明,ＤＤＰ和ＡＡＰ不仅可引起膜蛋白的交联或聚合,形成新带,也能使某些膜蛋白降解,对于ＤＤＰ,各膜蛋白带结合铂量首先随反应时间增加而下降,而后增加,最后达到饱和结合;     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白（LMP）基因免疫的初步研究

利用基因免疫技术,将重组质粒ＰＢＳ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ直接注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中,于第２、４、８周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠（５／５）均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

人红细胞生成素乳腺特异性表达载体构建及其可行性检验方法的建立

将大鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的上游调控序列与人红细胞生成素基因组ＤＮＡ融合,构建了ｐＷＡＰ－ＥＰＯ－ＷＡＰ３乳腺特异性表达载体,该载体经脂质体包裹后,通过显微外科技术,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达。经ＥＬＩＳＡ检测,大鼠乳汁中有ＥＰＯ表达,外周血网织红细胞计数法测定表达的ＥＰＯ具有体内生物活性,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异性表达载体可行性方法     

人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究

应用抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗体细胞内免疫方法,研究在人Ｔ细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗ＨＩＶ－１基因治疗的可行性。克隆抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗抗体（ｓＦｖ）基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人ＣＤ４阳性Ｔ－细胞株ＣＥＭ和ＳｕｐＴ１,以及ＨＩＶ－１阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞（ＰＢＭＣ）,再分别用不同剂量（ＭＯＩ）的ＨＩＶ－１病毒株ＰＮ     

三种方法检查食蟹猴血清STLV-1抗体的研究

本文用乳胶凝集试验（ＰＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）和蛋白印迹试验（ＷＢ）对１０３份食蟹猴血清作了ＳＴＬＶ－１抗体检查。结果表明,１３份ＷＢ检查为ＳＴＬＶ－１抗体阳性的血清,ＰＡ和ＩＦＡ检查均为阳性,而９０份ＷＢ检查为ＳＴＬＶ－１抗体阴性的血清,ＰＡ检查有３份为阳性,ＩＦＡ检查有１份为阳性结果。     

狂犬病毒aG株糖蛋白在pET原核系统中的表达及纯化

在狂犬病的临床诊断和基础研究中都迫切需要大量纯度高且价廉的狂犬病毒糖蛋白抗原。本文应用带有Ｈｉｓ６尾的ｐＥＴ原核表达系统对狂犬病毒（ＲＶ）ａＧ株的糖蛋白（ＧＰ）进行表达和纯化。构建的融合表达载体ｐＥＴ－ａＧ１和ｐＥＴ－ａＧ２（－５７ｂｐ）分别含有ＲＶａＧ株ＧＰ基因的全序列及删除了为ＧＰ信号肽编码的５８个碱基的序列。用ＳＤＳ 聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、间接ＥＬＩＳＡ检测都证明表达产物为ＲＶＧＰ,且位于菌体中的包涵体内。经固定化金属螯合层析（ＩＭＡＣ）提纯,ｐＥＴ－ａＧ１表达产物有较高的特异性和纯度,可用作测定ＲＶＧＰ抗体的免疫诊断试剂。     

抗结肠癌相关抗原单链抗基因的构建和表达

通过ＰＣＲ扩增和酶切分别得到抗结肠癌相关抗原抗体的重链可变区序列,轻链可变区序列及连接肽序列,将它们构建成为ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬ形式的单链抗体基因片段,并在大肠杆菌中进行了表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,以ｐＣｏｍｂ３为载体,在大肠杆菌ＪＭ８３中,ｓｃＦｖ未获得有效表达,而以ｐＥＴ－２２ｂ（＋）为载体的ｓｃＦｖ在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,３０℃诱导培养获得了高效表达,表达水平占全菌蛋白