烟曲霉无性产孢的调控机制研究

烟曲霉是侵袭性曲霉菌病的重要病原菌之一,它通过产生无性分生孢子进行感染。孢子的生存能力极强,能在多种微生物培养基上和环境条件下生长。现对烟曲霉无性产孢的基因调控机制的研究进展作一阐述。     

阴道白色念珠菌致病株与携带株两相性与毒力关系研究

目的探讨阴道白色念珠菌致病株和携带株菌丝相和酵母相分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶活性以及与其毒力的关系。方法分别采用牛奶平板和卵黄培养基法检测白色念珠菌致病株和携带株200株分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力,分别将致病产酶株的菌丝相和孢子相菌悬液（5×10^6CFU／ral）注射小鼠尾静脉,1个月内观察小鼠死亡率及平均存活时间,以平均存活时间评价菌株毒力。结果白色念珠菌致病株和携带株分泌型酸性蛋白酶检出率分别为83．3％和35．7％（P〈0．01）;细胞外磷脂酶阳性率分别为87．5％和39．3％（P〈0．01）。动物实验结果表明,白色念珠菌致病株菌丝相分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶的活力均显著高于孢子相（P〈0．01,P〈0．005）;注射菌丝相白色念珠菌的小鼠死亡率高于注射孢子相的小鼠（P〈0．01）,且平均存活期短于注射孢子相的小鼠（P〈0．01）。结论分泌型酸性蛋白酶和细胞外磷脂酶是白色念珠菌重要毒力因子,致病株毒力高于携带株,菌丝相毒力高于酵母相。     

两株毒力不同的核盘菌产草酸、果胶酶的比较

对强弱毒力不同的核盘菌Ep-1PNA5和Ep-1PN的主要致病因子草酸和果胶酶的产生进行了比较研究。结果发现强毒力的Ep-1PNA5和弱毒力Ep-1PN都可产生草酸,并且在发病油菜活体组织上,弱毒力Ep-1PN的病组织中的草酸含量高于Ep-1PNA5病组织;两个菌株在发病油菜活体组织上的果胶酶产量没有差异,但在诱导培养基中Ep-1PN菌株比Ep-1PNA5的果胶酶产量高。这一结果表明弱毒力Ep-1PN菌株毒力的衰退并不是因为其所携带的dsRNA因子抑制了草酸和果胶酶所产生的。     

4株球孢白僵菌对红火蚁毒力的生物测定

在室内筛选了对红火蚁Solenopsis invicta敏感的4株球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株,分别为Bbl501,5974,prl-6和prl::chi,通过生物测定研究了它们对红火蚁的毒力.实验采用喷雾法并在25±1℃和12L:12D条件下饲养观察10 d.实验结果表明,所选的4株F1僵菌对红火蚁都有较强的毒力,红火蚁的死亡率随着所用白僵菌浓度的加大而升高.所得实验数据输入时间-剂量-死亡率模型,模拟的模型均可通过Hosmer-Lemeshow拟合异质性检验,表明模型拟合良好.由模型得到各个菌株的时间效应和浓度效应瓦相相关,即菌株浓度越高,所用的杀虫时间就越短;而随时间的延长,所需要的致死中浓度(LC50)就越来越低.取模型输出的第10 d的LC50值,将所选4株白僵菌的毒力由强到弱排序,依次为:prl-6、prl::chi、5974和Bbl501.它们的LC50分别为:3.16×105、8.01×105、2.4×106和1.57×107孢子/mL.这4株菌在红火蚁的生物防治中具有一定的潜力.其中,菌株5974的致死速度最快,综合考虑时间效应和浓度效应,该菌株值得进一步研究和开发为生物农药并用于红火蚁的防治.     

蚧镰孢菌的生长及产孢研究

蚧镰孢菌孢子萌发及产孢的最适温度是 2 8℃ ,菌生长的适温是 2 4℃～ 2 6℃。孢子萌发受 pH值影响较小 ,菌生长以 pH6.5～ 8.5为最适 ,而 pH8.5时产孢最多。菌的生长也可以调节培养液的pH值 ,使其达到最适生长的 pH范围。光照对该菌的生长及产孢也有一定影响。蚧镰孢菌能利用多种碳源和氮源 ,也能以几丁质为唯一碳源和氮源生长 ,但生长很差。Ca2 、Fe2 等金属离子以及硫胺素、核黄素、叶酸等维生素的加入可使产孢量增加 ,而维生素的作用更明显。该菌的产孢高峰期一般在 2 1天左右 ,而且在相同条件下 ,接种量越大 ,产生最大量孢子所需的时间越短。     

球孢白僵菌不同分离株对西花蓟马的毒力测定

【背景】西花蓟马是我国重要的一种入侵性害虫,已对多种化学农药产生了抗性。【方法】采用孢子悬浮液喷雾处理生测法,研究了8个球孢白僵菌菌株BbKM030716、BbCG051229、BbJS080625、BbQJ031121、BbXW060615、BbSM090521、BbYY090613和BbMZ051230对西花蓟马成虫的毒力,并用＂时间—剂量—死亡率＂模型进行了分析。【结果】供试球孢白僵菌各菌株对西花蓟马成虫侵染致病的剂量效应参数值分别为1.43、0.87、0.93、0.98、1.23、0.92、1.07和0.86。用1.25×104～1.25×108个·mL-1孢子悬浮液接种后,连续10d内西花蓟马的校正死亡率分别为44.13%～98.49%、12.63%～78.90%、30.36%～96.92%、51.36%～98.74%、26.14%～98.59%、7.27%～78.71%、49.06%～98.74%和27.67%～87.36%。球孢白僵菌对西花蓟马成虫的致死剂量是时间的函数,各菌株对西花蓟马成虫的致死中时随孢子浓度的增大而逐渐减小。【结论与意义】球孢白僵菌菌株BbKM030716、BbJS080625、BbQJ031121和BbXW060615对西花蓟马成虫具有较强毒力,可作为西花蓟马生防制剂开发的潜力菌株。     

白色念珠菌蛋白酶与其毒力关系的研究

目的 探讨白色念珠菌蛋白酶活动与其毒力关系。方法的采用牛奶平地检测５４株白色念珠菌蛋白酶的分泌能力,然后选择６侏菌分别经摇瓶培养测定其蛋白酶活力,并以静脉内注射方式感染小鼠进行毒力试验,以小鼠平均生存时间来评价菌株毒力。结果 ５４株白色念珠菌全部能分泌蛋白酶,检出率为１００％。动物试验表明蛋白酶活力愈高的菌株,相应小鼠平均生存时间愈短;蛋白酶活力与菌株毒力直接正相关（γ＝０．９３４,Ｐ＜０．０１）     

一株凝结芽孢杆菌的分离筛选及产孢条件优化

【背景】凝结芽孢杆菌除了具有一般乳酸菌的益生功能外,还具较强的耐酸、耐胆盐、耐高温、易贮存等生物特性。【目的】从泡菜中筛选一株性能优良的凝结芽孢杆菌用于微生态制剂的制备,并对其产孢率进行优化,为该菌株的进一步工业化生产提供参考依据。【方法】采用选择性培养基通过特定的培养条件,筛选到一株抑菌效果良好的产酸芽孢杆菌,并对其进行特异性引物的鉴定、16S rRNA基因序列分析及生理生化实验。通过单因素及正交试验对菌株的产芽孢条件进行优化。【结果】筛选得到一株凝结芽孢杆菌BC01,该菌株对大肠杆菌(Escherichia coli CVCC 1527)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium CVCC 2228)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens CVCC 46)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CVCC 503)等均有较强的抑制作用;模拟胃液处理120 min存活率达到94%;0.3%的胆盐存活率达到84.3%。单因素及正交试验优化后的最适培养基配方:糖蜜10.0 g/L,酵母浸出粉20.0 g/L,NaCl 5.0 g/L,K_2HPO_4 5.0 g/L,MnSO_4 10.0 mg/L;最适培养条件:接种量4%,温度45°C,初始pH 7.0,转速200 r/min,培养时间36 h。在该优化条件下,其活菌数最高达到6.7×10~9 CFU/mL,产孢率达到89.2%。【结论】筛选得到一株可用于微生态制剂的菌株——凝结芽孢杆菌BC01,对其产孢率进行了优化,为工业化生产奠定了基础。     

亚洲产Clavicorona的形态学及亲和性研究

中国产的Clavicorona pyxidata与北美的种样本间配对实验结果显示该种在不同的地理分布区内的种群之间完全性亲和或具有相同的交配型等位基因,表明中国产与北美产的该形态学种同属于一个生物种。日本产的标本与C. pyxidata在子实体外部形态及孢子尺度上有差异,虽然在日本被鉴定为该种。日本产的菌株与C. pyxidata菌株间配对实验证明二者之间完全不亲和,即属于不同的生物种。生殖隔离拌随着形态学变异。     

继发肺结核合并两株不同表型烟曲霉感染病例1例

患者,男,69岁,因反复咳嗽、咳痰8个月,加重伴咯血4 d就诊。患者7年前曾患肺结核,抗痨治疗1年后治愈。就诊后第1次纤支镜灌洗液标本宏基因组二代测序检出结核分枝杆菌,血清和纤支镜灌洗液曲霉抗原半乳甘露聚糖试验阳性,第2次纤支镜灌洗液真菌培养出两种形态的烟曲霉(白色株和蓝绿色典型株),两株烟曲霉药敏试验结果相同且具有高度同源性。临床诊断继发肺结核合并侵袭性烟曲霉感染,予抗痨、伏立康唑抗真菌治疗,出院后继续抗痨,抗真菌治疗,定期随访复查胸部CT及痰涂片查抗酸杆菌。     

长蠕孢菌产孢条件的研究

对番茄褐斑病原菌—长蠕孢菌产孢条件进行了研究,结果表明燕麦片琼胶培养基、Czapek培养基和PDA＋番茄叶片能促进产孢子,V8汁、PSA和番茄汁培养基抑制产孢;碳源果糖明显促进产孢,甘露醇抑制产孢子;氮源氯化铵促进产孢,蛋白胨和硫酸铵抑制产孢;光照和紫外线照射对长蠕孢菌产孢有明显促进作用,特别是紫外线照射60～80min时产孢量达到最大;偏低温或偏高温以及微碱性环境能促进长蠕孢菌产孢,温度为15℃或30℃,pH8～9时最有利于产孢。     

两株戴氏霉对水稻秸秆的降解及产酶研究

本文旨在构建能够高效降解水稻秸秆的戴氏霉组合菌。通过兼容性试验,选取木质素降解菌灰戴氏霉H57.1菌株与纤维素降解菌合川戴氏霉H08.1菌株组合发酵降解水稻秸秆,以失重法和范氏洗涤剂法检测其对秸秆的降解效果,用胞外酶活测定法探索其产酶规律。结果表明,菌株H57.1和H08.1具有良好的兼容性;组合菌H57.1+H08.1对水稻秸秆的降解能力明显高于单一菌株,秸秆失重率高达55.7%,木质素、半纤维素和纤维素降解率分别为48.9%、72.6%和57.0%;对发酵过程产酶情况的分析进一步表明,组合菌H57.1+H08.1降解水稻秸秆的能力与其产酶能力密切相关。     

两株低温沼气产酸细菌的分离鉴定及产酸特性

摘要:【目的】分离筛选低温沼气产酸细菌并研究其发酵特性。【方法】利用筛选培养基分离产酸细菌;通过形态学观察、16S rRNA进行鉴定;利用糖发酵、淀粉水解、明胶液化、过氧化氢酶等实验考察发酵特性;采用气相色谱法测定挥发性脂肪酸(Volatile fatty acid,VFA),对菌株的产酸特性进行研究。【结果】从霍林河市户用沼液中分离出两株在4 ℃产酸较高的菌株FJ-8和FJ-15,经16S rRNA系统发育树分析分别属于Pseudomonas sp．和Shewanella sp.。两株菌均能够水解淀粉、液化明胶,且过氧化氢酶反应均呈阳性。它们最适的产酸温度分别是15 ℃和20 ℃,在4 ℃液体发酵10 d后所产总VFAs分别为2593 mg/L和2687 mg/L。其中乙酸含量分别为792 mg/L和966 mg/L。另外,相同条件下5 L模拟发酵结果显示处理组(添加所筛两株菌混合发酵液)的周产气量比对照组高出59%。【结论】分离出的两株产酸细菌FJ-8和FJ-15在低温条件下具有较好的产酸性能,在提高低温条件下沼气产气量方面具有很强的应用前景。     

两株产生免疫抑制剂的小双孢菌分离株的鉴定

从江苏无锡土壤中分离到两株玫瑰小双孢菌SIPI226和SIPI207,经形态、化学分析、Ribotyping及16S rRNA分析,两菌株细胞壁含meso\|DAP、磷酸类脂PIV、无枝菌酸,醌为MK9(H0,H2,H4),G+C mol%分别为683和694。经初步鉴定为玫瑰小双孢菌的两个新亚种：玫瑰小双孢菌无锡亚种(Microbispora rosea subsp. wuxiensis)和玫瑰小双孢菌鼋头渚亚种(Microbispora rosea subsp. yuantouzhuensis)。菌株SIPI226和SIPI207分别为玫瑰小双孢菌无锡亚种和玫瑰小双孢菌鼋头渚亚种的典型菌株。     

两株海洋放线菌的产色素特性

【背景】生物产生的天然色素在工业、农业和纺织工业上有潜在应用价值。【目的】通过对产色素海洋放线菌的分离与筛选,为开发细菌所产生的天然色素在纺织与食品工业中的应用奠定基础。【方法】筛选胞外产可溶性色素的放线菌,并通过16S rRNA基因序列测定和分析构建其系统发育树,并对影响色素产量的因素和色素稳定性进行实验。【结果】获得了一株产蓝色色素的放线菌Q2N-42和一株产黄绿色色素的放线菌X4C-5,16S rRNA基因序列分析表明它们分别与天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)或紫红链霉菌(Streptomycesviolaceoruber)和普拉滕斯链霉菌(Streptomyces pratensis)的16SrRNA基因序列存在较高的相似性。通过研究不同碳源和氮源对放线菌Q2N-42和X4C-5产色素的影响,发现甘油和硝酸钠能明显地增加天蓝色链霉菌(S. coelicolor) Q2N-42的色素产量,而淀粉和硝酸钠能明显地增加普拉滕斯链霉菌(S.pratensis)X4C-5的色素产量。这两种色素对不同浓度的氧化剂、还原剂、盐和pH都表现出良好的稳定性;色素的红外...     

两种虫草无性型的微循环产孢确证

从贵阳地区采得两种虫草,古尼虫划Ｂｅｒｋ．和布氏虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｂｒｏｎｇｎｉａｒｔｉｉ Ｓｈｉｍａｚｕ。经诱发它们子囊孢子的微循环产孢再次确证了古尼虫草无性型是经拟青霉Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｇｕｎｎｉｉ Ｌｉａｎｇ,布氏虫草的无性型是布氏白僵菌ＢｅａｕｖｅｒｉａｂｒｏｎｇｎｉａｒｔｉｉＰｅｔｃｈ。     

两种虫草无性型的微循环产孢确证

从贵阳地区采得两种虫草,古厄虫草Cordycepsgunnii（Bark．）Berk．和布氏虫草CordycepsbrongniartiiShimazu。经诱发它们子囊孢子的微循环产孢再次确证了古尼虫草的无性型是古尼拟青霉PaecilomycesgunniiLiang,布氏虫草的无性型是布氏白僵菌Beauveriabrongniartii（Sacc．）Peteh。     

一株产ε-聚赖氨酸的白色链霉菌遗传转化体系

为了更好地研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)生物合成的分子机制以及构建ε-PL高产基因工程菌株,拟建立一株ε-PL产生菌株Streptomyces albulus PD-1的遗传转化体系。通过对培养基类型、孢子预萌发处理、培养基中Mg2+浓度等条件进行考察,以Escherichia coli ET12567(p UZ8002)为供体菌,成功地将p IB139质粒导入S.albulus PD-1中。结果表明:质粒转化效率达到(3±0.4)×10-6个接合转化子/受体。接合子传代实验和PCR结果发现,p IB139质粒能够稳定整合在S.albulus PD-1染色体的att B位点上。本研究建立了一株ε-PL生产菌株的遗传转化体系,为从分子水平上研究ε-PL的合成及ε-PL高产菌株的构建奠定了基础。     

一株产T-2毒素镰孢菌的分离、鉴定及其产毒条件的研究

【目的】从青海大骨节病区小麦麦穗中分离的内生真菌中筛选产T-2毒素的菌株,并研究影响其合成该毒素的条件。【方法】采用种子胚芽抑制试验和抑菌试验从分离所得的菌株中筛选产毒菌株;利用薄层层析和高效液相检测待测菌株产物,复筛出产T-2毒素的菌株。通过显微形态学观察及ITS序列分析对筛选出的菌株5-5m-1进行鉴定。应用单因素筛选方案研究固体培养时间、温度以及液体培养转速、初始p H等对其产T-2毒素的影响,并采用正交试验进一步优化。【结果】菌株5-5m-1的显微形态与梨孢镰孢菌(Fusarium poae)相似;ITS序列分析显示,该菌株与F.poae的相似度也较高。其产T-2毒素的最佳条件为:玉米固体培养基、日温25°C/夜温15°C、光暗交替。【结论】5-5m-1菌株为梨孢镰孢菌,培养条件对其产T-2毒素能力有很大影响。实验结果将为进一步研究T-2毒素产生的机制和防止真菌毒素污染提供参考。