藤仓赤霉(Gibberella fujikuroi)分子生物学及发酵工程研究进展

赤霉素是最重要的植物生长调节剂之一,工业化生产是由丝状真菌藤仓赤霉发酵产生.近20年来,随着分子生物学技术的发展,对藤仓赤霉赤霉素生物合成途径中相关基因的分子鉴定和表达调控等研究取得了显著的进展,赤霉素生物合成途径的分子生物学基本研究清楚,使得利用基因工程和代谢工程技术进行赤霉菌改良、提高赤霉素发酵水平成为可能.本文对藤仓赤霉中赤霉素合成机理及其表达调控、关键酶基因功能、外源基因转化系统、发酵技术、利用基因工程技术进行改造等方面的研究进展进行综述.     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测方法的建立

玉米赤霉烯酮具有较强的生物毒性,检测谷物中的玉米赤霉烯酮在食品和饲料安全中具有重要的作用.将玉米赤霉烯酮与牛血清白蛋白的偶联物免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,并建立基于单克隆抗体的酶联免疫法作为检测玉米赤霉烯酮的方法.结果共筛选到4株抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体,3株抗体亚类为IgG1,1株为IgG2b.选择其中的一株杂交瘤细胞2C9制备小鼠腹水,纯化后测定了抗体效价为1/40 000.以此单抗建立的间接竞争ELISA方法,其半数抑制率(IC50)为1.90 ng/mL,检测限(IC10)为0.051 ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.115-13.900 ng/mL;且对玉米赤霉烯酮有很好的特异性.回收率检测在样品含1.46-93.80 μg/kg时回收率为96.5％-113.0％.本实验建立的检测方法可用于多种谷物及饲料样本中玉米赤霉烯酮的检测.     

春化冬小麦的玉米赤霉烯酮结合蛋白(简报)(英文)

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,简称ZEN)是八十年代初从高等植物中鉴定出的一种微量生理活性物质,已证明它在植物成花过程中起重要作用。为了阐明玉米赤霉烯酮的作用机制,我们用放射配体竞争结合分析法研究了春化冬小麦的ZEN特异结合蛋白。结果表明在春化冬小麦胚芽中存在着可溶性的ZEN特异结合蛋白(ZBP)。结合反应的pH范围在6-8,加热、蛋白酶和尿素处理破坏结合活性。玉米赤霉烯酮的同系物α-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇,以及动物雌性激素雌二醇可与ZEN竞争结合ZBP。其它植物激素不能与ZBP发生竞争结合。蔗糖密度梯度离心分析表明ZBP沉降于4-5S区。     

细胞工程

900914 生产对里氏木霉的内葡聚糖酶-Ⅰ和纤维二糖水解酶Ⅱ特异的单克隆抗体[会,英]/Nieves, R. A.…∥Abstr. Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol.-1989, 89 Meet.-305[译自DBA,1989,8(17),89-10405] 里氏木霉(Trichoderma reesei)的纤维素酶系统由纤维二糖水解酶、内葡聚糖酶和β-葡糖苷酶组成。通过这些酶的协同作用可使纤维素降解为可利用的底物。生产     

赤霉病麦中毒研究

关于赤霉病麦中毒,国外于1882年即有报道,我国在很早以前也有记载。但是,关于麦类赤霉病的科学记载,则首见于1936年。以后数十年中,我国许多省都发现过麦类赤霉病。小麦赤霉病于1912年认为由小麦赤霉(Gibberella saubinetii)所致,1936年改称为玉蜀黍赤霉(G.zeae)。现在认为后者并不是前者的异名。被赤霉侵染     

冬性植物春化过程中玉米赤霉烯酮的内源生成及马拉硫磷对它的抑制

Stob等(1962)首先从玉米赤霉菌(Gibberella zeae,其无性世代为禾谷玫瑰镰刀菌[Fusarium roseum ’graminearum’])中分离出玉米赤霉烯酮。此后,Mirocha等(1967),Nelson等(1968)及Caldwell等(1970)先后证明玉米赤霉烯酮是某些真菌     

玉米赤霉烯酮脱毒菌PA26-7的分离鉴定及其应用效果评价

【背景】玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是广泛污染粮谷类作物的一种雌激素类真菌毒素,不仅给农业经济带来巨大损失,还能通过食物链对人和动物健康造成危害。【目的】从微生态制剂中筛选获得能够高效降解玉米赤霉烯酮的菌株,优化其脱毒条件,测定其在饲料中的实际脱毒效果及对饲料中植酸、维生素含量变化的影响。【方法】从微生态制剂中分离出玉米赤霉烯酮降解菌,通过细胞计数试剂盒-8 (cell counting kit-8, CCK-8)测定菌株降解玉米赤霉烯酮产物的细胞毒性和雌激素活性,通过高效液相色谱法测定分离株在培养基和饲料中的解毒效果,以及分离株在霉变的豆粕、麸皮和成品饲料中固态发酵前后维生素的含量变化,通过三氯化铁比色法测定饲料脱毒前后植酸的含量变化。【结果】从微生态制剂中筛选出一株通过分泌胞外酶高效降解玉米赤霉烯酮的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) PA26-7,该菌株在培养基起始pH 4.0-8.0、培养温度25-60℃条件下均可降解玉米赤霉烯酮,产物的细胞毒性和雌激素活性均较ZEN弱。PA26-7经固态发酵72h后,饲料原料(豆粕和麸皮)及霉变的成品鸡...     

玉米赤霉烯酮的生理作用（简报）

玉米赤霉烯酮抑制种子萌发和出苗;经玉米赤霉烯酮浸种后播于田间的春小麦三叶期至四叶期间,叶长和叶绿素含量以及最后的产量性状均高于对照;低浓度的玉米赤霉烯酮有促进萝卜黄化了叶增重和变绿的作用。     

赤霉烯酮的微生物还原

用Rhodtorula sp.Saccharomyces sp.Arthorbacter sp.和Candida sp．四属20株菌对由Fusarium graminearum 产生的类雌激素——赤霉烯酮(Zearalenone)的还原转化进行了研究。实验结果证明,Rhodotorula sp和 Arthrobacter sp．的还原产物主要是α-赤霉烯醇(α-Zearalenol,经HPLC鉴定含量分别为96％和84％)。Saccharomyces sp．和Candidasp.的主要还原产物是β-赤霉烯醇(β-Zearalenol,经HPLC鉴定含量分别为91％和92％)。产物均经HPLC、13C—NMR和MS鉴定确证。     

玉米赤霉烯酮生物合成和降解的研究进展

介绍了玉米赤霉烯酮及其6个衍生物的分子结构,以及玉米赤霉烯酮的生物合成途径。阐述了玉米赤霉烯酮生物合成的基因序列群以及基因簇的表达方式。论述了玉米赤霉烯酮钝化和降解过程, 探讨了玉米赤霉烯酮水解酶在基因工程中的应用研究, 并为今后玉米赤霉烯酮生物工程降解研究提出了建议。     

环境保护及农业废物利用

941643三种真菌在家禽脂肪或牛油脂中的生长[英]/Bednarski.W.…∥J.Microbiol.Biotechnol.-1993,9(6).-656～659[译自DBA,1993,12(25),93-14772] 将黑曲霉、自地霉(Geotrichum cundidum)以及米黑毛霉(Mucormiehei)在装有含牛油脂或家禽脂肪的培养基的Roux瓶、摇瓶或发酵罐中,于28℃培养5天,产生0.4～3.2g/l脂质。     

丛赤壳类真菌8个新组合（英文）

按现行的国际命名法规和肉座菌目名称提案委员会对属名的处理建议,对生赤壳科和丛赤壳科4个属中8个种的名称进行了命名上的订正,建立8个新组合:蜜黄枝穗霉Clonostachys mellea、平截枝穗霉C.truncata、囊胞枝穗霉C.vesiculosa、竹镰孢菌Fusarium bambusae、庐山新赤壳Neocosmospora lushanensis、平铺假赤壳Pseudocosmospora effusa、河南假赤壳P.henanensis和炭团假赤壳P.nummulariae。     

玉米赤霉烯酮产生菌在我国的分布及其特性

从全国29个省、自治区和直辖市分离到的镰刀菌中,随机抽取335株分别接种到大米培养基上,进行变温培养。用薄层扫描法定量检测培养物在不同温度阶段的玉米赤霉烯酮含量。检测结果表明,50.7%的受检菌株具有产生玉米赤霉烯酮的能力,分布广泛,产量范围为0.3—5143.8mg/kg大米.玉米赤霉烯酮产量与低温无必然相关性。125株菌株(占产生菌的73.5%)在常温下即可产生玉米赤霉烯酮。经低温处理后,它们之中仅有41.6%的菌株显著增加了产量。产生菌分属7个种:禾谷镰刀菌(F.graminearum)大刀镰刀菌(F.culmorum),燕麦镰刀菌(F.avenaceum),半裸镰刀菌(F.semitectum),木贼镰刀菌(F.equiseti),紧密镰刀菌(F.compactum)和克地镰刀菌(F.crookwellense)。其中,禾谷镰刀菌占85.3%。     

来源于麦氏喙枝孢霉的玉米赤霉烯酮水解酶在毕赤酵母中的高效表达及活性分析

【背景】玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是一群具有雌激素活性的霉菌毒素,广泛存在于被霉菌污染的谷物中,造成食品业和畜牧业的巨大损失。利用专一性高的水解酶进行生物转化可有效去除玉米赤霉烯酮。【目的】构建高效表达玉米赤霉烯酮水解酶的酵母系统,以促进玉米赤霉烯酮水解酶的研究和工业应用。【方法】将来源于麦氏喙枝孢霉(RhinocladiellamackenzieiCBS650.93)的Rmzhd基因转入毕赤酵母中,筛选获得高效表达菌株,通过高效液相色谱分析发酵液中重组酶的性质。【结果】发酵液中Rm ZHD对ZEN的酶活力为16.67 U/m L,对α-ZOL的酶活力为9.85 U/m L。SDS-PAGE检测表达产物的分子量,与理论值30.7k D符合,且发酵上清液蛋白纯度高。Rm ZHD的最适p H值为9.6,最适温度为45°C,并具有较好的耐热性。【结论】研究结果为玉米赤霉烯酮水解酶的异源表达及其潜在的工业应用提供了一定的指导。     

玉米赤霉烯酮的放射免疫分析

将玉米赤霉烯酮转变成玉米赤霉烯酮-6’-羧甲氧肟,通过混合酸酐法将其与牛血清白蛋白结合并用以免疫兔获得抗体。抗体效价可达1:4×10~4,亲合常数为4.25×10~(10)L/mol,灵敏度提高为3.5pg。样品平均回收率达92％。批内与批间变异系数分别为6.1％和8.6％。     

玉米赤霉烯酮在组织培养中的生物效应（简报）

玉米赤霉烯酮在组织培养中具有以下生物效应:1.低浓度(0.01～1ppm)促进、高浓度(1～10ppm)抑制愈伤组织的形成和生长;2.抑制愈伤组织和切芽生根:3.促进愈伤组织芽发端和胚状体形成;4.促进再生植株和切芽的营养生长,推迟开花。玉米赤霉烯酮的浓度范围和作用强度因实验材料不同而异。     

粘鞭霉属2个中国大陆新记录种

分离得到2个粘鞭霉属中国大陆新记录种-禾谷粘鞭霉[G.CERALIS(P.Karst.)C.H.Dickinson]和墙粘鞭霉费利变种[G.murorum vat.felina (Marchal) S.Hughes].二者均为土壤真菌,分别采自湖北神农架自然保护区和贵州雷公山自然保护区.文中提供了详细的形态结构描述并绘...     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体和免疫酶技术研究

采用蛋白质连接技术合成玉米赤霉烯酮抗原,免疫Balb/c鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术建立六株分泌抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体杂交瘤细胞株。间接酶联免疫吸附试验测定细胞上清抗体效价为1:2084(4H8)、1:256(6H9、4H3、2H5、2C8)、1:16(3F10);腹水抗体效价为10~9(4H3、4H8)、10~8(2H5)、10~7(6H9)、10~5(3H10)。竞争间接酶联免疫吸附试验测定六株单克隆抗体对玉米赤霉烯酮的敏感度为0.3—0.8ng/ml。六株抗体与玉米亦霉烯醇的交叉反应率为1.3—9.0％。六株单克隆抗体均属IgG类。细胞体外传代培养和冻存复苏后分泌抗体稳定。纯化抗体在37℃保存12天稳定,-30℃保存90天抗体滴度不变。用该抗体建立竞争间接酶联免疫吸附试验检测掺合玉米赤霉烯酮的玉米、小麦、饲料,平均回收率分别为105％、90％、103％,平均批间变异系数为5.8％、2.8％、6.8％,批内变异系数为3.8％、12.7％、15.7％。样品中玉米赤霉烯酮掺合量与竞争间接酶联免疫吸附试验检出量有良好相关性(r≥0.9996)。     

春化冬小麦的玉米赤霉烯酮结合蛋白（简报）

玉米赤霉烯酮是八十年代初从高等植物中鉴定出的一种微量生理活性物质,已证明它在植物成花过程中起重要作用。为了阐明玉米赤霉烯酮的作用机制,我们用放射配体竞争结合分析法研究了春化冬小麦的ＺＥＮ特异结合蛋白。结果表明在春化冬小麦胚芽中存在着可溶性的ＺＥＮ特异结合蛋白（ＺＢＰ）。结合反应的ＰＨ范围在６－８,加热、蛋白酶和尿素处理破坏结合活性。玉米赤霉烯酮的同系物α－玉米赤霉醇和β－玉米赤霉醇,以及动物雌性激     

冬小麦种子萌发过程中的结合态玉米赤霉烯酮

冬小麦种子萌发过程中的结合态玉米赤霉烯酮陈新建（河南农业大学农学系,郑州１５０００２）孟繁静（北京农业大学生物学院,北京１０００９４）关键词结合态玉米赤霉烯酮,冬小麦玉米赤霉烯酮（ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ）是玉米赤霉菌（Ｇ～ｔｈｅ－）的一种次生代谢产物...