胶体金免疫层析法检测猪链球菌2型的研究

目的:制备胶体金免疫层析试纸检测猪链球菌2型.方法:用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒,标记猪链球菌2型多克隆抗体,通过免疫层析作用对猪链球菌2型进行检测,并对试纸条的敏感性、特异性、稳定性进行评价.结果:每毫升胶体金最佳抗体标记量为22μg/mL,最佳包被抗体浓度为2 mg/mL,最佳BSA封闭浓度为1.5%,建立的胶体金免疫层析试纸条栓出猪链球菌2型的下限为106 CFU/mL,从检测到结果判断时间为5～15 min,与其他常见致病菌及链球菌属中15个群无交叉反应.结论:获得了检测猪链球菌2型的胶体金免疫层析试纸,该法操作简便,灵敏度高,特异性强,可用于猪链球菌的快速初筛和检测.     

胶体金免疫层析法快速检测沙门氏菌

为了建立一种简便快速的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测沙门氏菌,将抗沙门氏菌多抗用抗原吸收法封闭与其他肠道杆菌的交叉反应,标记胶体金溶胶制成探针,采用多膜复合的方法制成免疫层析条。结果表明该层析条灵敏度为2.1×106cfu/ml,不与其他肠道杆菌反应,37℃放置33天,检测结果无差异。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。     

胶体金免疫层析法检测新型冠状病毒IgM/IgG抗体的临床评价与应用

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染暴发流行已成为全球公共卫生事件,急需快速有效的现场诊断试剂。为探讨SARS-CoV-2病毒IgM/IgG抗体胶体金免疫层析法检测效果及临床应用价值,本研究选取304例新冠肺炎临床诊断病例、114例SARS-CoV-2核酸检测阴性的正常人(138)及其他发热伴呼吸道症状病例(64),采用胶体金法对采自上述病例的血浆或血清标本进行IgM和IgG抗体检测,并选取部分病例进行了全血和血浆或血清标本的检测同源性比较,进一步对304例临床诊断病例的病毒核酸、IgM/IgG抗体的时间分布进行了分析。结果显示,304临床诊断病例中,SARS-CoV-2核酸检测阳性病例为105例,胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体的敏感性分别为76.2%(80/105)和86.6%(91/105),IgM/IgG抗体阳性总体符合率为96.1%(101/105);核酸、抗体均为阴性者为73例;其余126例临床诊断病例中,IgM阳性率为69.2%(87/126),IgG阳性率为98.3%(125/126),IgM/IgG总体符合率为100%(126/126)。健康人...     

胶体金免疫层析法视黄醇结合蛋白检测试剂对肾小管功能损伤的诊断价值评价

目的:对胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白(RBP)检测试剂诊断肾小管损伤的价值进行评价。方法:选择上海柏纳生物技术有限公司生产的视黄醇结合蛋白检测试剂盒(胶体金免疫层析法)与上海太阳生物技术有限公司生产的RBP含量测定试剂盒(酶联免疫法)进行对比试验,分别对临床选取的病例组和对照组的尿液样本进行检测。参考临床单位诊断标准,酶联免疫法结果浓度≥300ng/mL为阳性,<300ng/mL为阴性;胶体金免疫层析法检测结果检测线显色为阳性,不显色为阴性。对两组检验结果进行Kappa一致性检验,分析两种检测方法诊断结果的一致性,同时以临床通用诊断方法为参考,计算胶体金免疫层析法诊断肾小管功能损伤的灵敏度和特异度。结果:两种检测方法的诊断结果一致性良好(市一医院:K=0.9070,95%CI:0.8277～0.9863,P<0.01;市六医院:K=0.9391,95%CI:0.8714～1.000,P<0.01)。胶体金方法诊断肾小管损伤的灵敏度和特异度,市一医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:92.45%～100.00%;特异度=91.80%,精确95%CI为:81.90%～97.28%;市六医院:灵敏度=100%,精确95%CI为:91.40%～100.00%;特异度=95.00%,精确95%CI为:86.08%～98.96%。结论:胶体金免疫层析法的视黄醇结合蛋白检测试剂与已批准上市的试剂等效,对肾小管功能损伤的诊断具有重大应用价值。     

免疫胶体金试剂的制备及应用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒

报道了用胶体金免疫电镜技术检测戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的方法。实验采用１０ｎｍ胶体金标记纯化兔抗鼠ＩｇＧ制备了免疫胶体金探针试剂。用本法从戊型肝炎患者粪便提取物中检出ＨＥＶ呈球形,直径３２±５ｎｍ。此方法具有快速、灵敏、直观等特点,在ＨＥＶ生物学性质研究中,有一定的应用价值。     

Asial型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asial型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA).本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带.经条件优化,组装成检测Asial型口蹄疫的诊断试纸条.用该试纸条分别对A、O、c和Asial型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、o、c型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好.用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10-4.该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%.初步实验确定该试纸条在4℃下可保存3个月、37℃和室温下大概可保存1周左右.该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值.     

纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人绒毛膜促性腺激素

目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法研制用于早孕检测的快速定量层析试纸条。方法:应用EDC/NHS法标记纳米磁珠、Biodot喷膜仪喷点NC膜、双抗体加心法建立免疫层析试纸条、对磁信号进行检测并与ELISA实验做对比,并对结果进行评价。结果:建立了HCG纳米磁性免疫层析试纸条,检测到底线为1miu/ml的HCG抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准;用此方法与商品化免疫胶体金试纸条对临床样本进行检测,检测符合率达99%,与ELISA法比较符合率达100%,且检测时间控制在5min以内。结论:该方法简单快速,灵敏度高,不仅可以应用于HCG的检测,同时为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。     

纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人乙型肝炎表面抗原

目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法,研制可应用于乙肝表面抗原(HBsAg)快速定量检测的层析试纸条。方法:用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联的方法标记纳米磁珠,喷膜仪喷点硝酸纤维膜;根据双抗体夹心法原理建立免疫层析试纸条,对HBsAg特异性抗体捕获的磁信号进行检测,并对磁信号检测结果进行统计学分析和评价。结果:建立了HBsAg纳米磁性免疫层析试纸条,最低限度检测为0.1 ng/mL的HBsAg抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准,且检测时间控制在5 min内;经检测临床血清标本证实,该方法可根据磁信号定量检测乙肝患者血清中HBsAg的浓度。结论:HBsAg纳米磁性免疫层析方法具有简单快速、灵敏度高的特点,可应用于临床血清样本中HBsAg的检测;该方法为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。     

Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。     

用免疫胶体金方法检测艰难梭菌

艰难梭菌(Clotsridium difficiles,Cd)系1935年Hall等从新生儿粪便中首先分离出的,Barttelett等通过动物实验及临床证实Cd是与抗生素相关的结肠类(Antibiotic—Associated colitis,AAC)的病原菌[2],AAC是Cd产生的     

免疫亲和层析法纯化单链尿激酶型纤溶酶原激活剂

尿激酶原 (Ｐｒｏ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ,ｐｒｏ ＵＫ) ,也称单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (Ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｓｃｕ ＰＡ) ,与ｔ ＰＡ一样是第二代溶栓药物。给药时 ,保持无活性的酶原状态 ,只激活被纤维蛋白吸附的纤溶酶原 ,而对游离的纤溶酶原没有作用 ,即只在血栓表面才能活化转变为双链尿激酶 (Ｔｗｏ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔｃｕ ＰＡ或ＵＫ) ,因而具有较高的特异性溶血栓作用[1 ] 。尿激酶原…     

用免疫亲和层析法纯化细菌铁蛋白

用细菌铁蛋白免疫家兔,制备抗铁蛋白血清,用进一步纯化的抗铁蛋白抗体作为配基与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,得到亲和免疫吸附剂。以此法纯化的铁蛋白为聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,相对复合抗体作双向免疫电泳显示单峰,并具有较高的免疫活性。     

猪链球菌2型毒力因子研究新进展

猪链球菌是一种传染性革兰氏阳性菌,是严重影响养猪业发展的重要人畜共患病原体,造成人类死亡率在5%~20%。其毒力因子在致病过程中发挥着重要作用。近年来对猪链球菌2型的毒力因子研究有诸多新的进展,对其致病机制的了解和对该病有效防控都有新的认识。对近些年研究2型猪链球菌毒力相关因子,对蛋白质类、酶类研究的新进展,同时对毒力因子基因表达双组分系统、与宿主免疫系统相互作用的Ⅳ型分泌系统的进展进行总结和分析,以期为猪链球菌病的治疗和疫苗的研制提供新参考。     

猪链球菌2型疫苗研究进展

猪链球菌2型可引起人、猪急性败血型、脑膜炎型和关节炎型等传染病,致死率极高,是近年来致病性最强、危害性最大的猪链球菌类型之一。目前因该菌的致病机理不清、抗原类型复杂,限制了疫苗研究的顺利进行。当前在研的猪链球菌2型疫苗类型有死疫苗、弱毒苗、蛋白亚单位疫苗等。     

猪链球菌2型荚膜缺失株生物学特性及其免疫保护性

对前期构建的猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺失株Δcps2B进行相关生物学特性及免疫保护性研究。通过比较野生株05Z33和荚膜缺失株Δcps2B生物学特性发现,Δcps2B株显微形态发生改变,失去与2型荚膜特异抗血清发生凝集反应的能力,突变株更易被全血清除,对上皮细胞HEP-2的粘附能力增强。动物保护性实验结果表明该荚膜缺失株Δcps2B具有良好的免疫保护作用。研究结果提示荚膜在细菌抵抗吞噬和细菌粘附过程中发挥重要作用。     

猪链球菌2型致病机制的研究现状

猪链球菌属革兰氏阳性兼性厌氧菌,是许多养殖业和公共卫生的致病菌.致病性最强的是猪链球菌2型血清型,国内外流行广泛,也称为人畜共患病的病因.近年来,国内外学者运用传统或分子生物技术对猪链球菌2型致病机理所进行大量的研究.本文针对猪链球菌2型的感染途径,毒力因子,突破血脑屏障,细胞因子以及中毒性休克综合征方面的致病机制研究做了系统综述;对存在的问题及前景进行了分析和并展望.     

猪链球菌2型的致病机制

猪链球菌2型是重要的人兽共患传染病病原。通常认为该菌的毒力因子与荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)和溶血素(SLY)等有关。该文介绍2型猪链球菌的感染途径、侵袭和黏附机制,以及对机体产生细胞因子的影响等。     

胶体金免疫层析技术在寄生虫检测中的应用

文章就胶体金免疫层析技术的基本应用原理极其所具有的应用特点进行简要阐述,主要针对寄生虫病检测中胶体金免疫层析技术的应用做出分析。