褐色肉鸭tdTSG4.5-W基因cDNA分子选殖、定序、表达

台湾大学农学院畜产系研究者对褐色肉鸭在产蛋后特定时段比较蛋壳强度不同鸭的输卵管壳腺部粘膜层细胞基因的表达 ,选殖、定序及其他可能涉及蛋壳品质的基因 ,以探讨对蛋壳品质的分子影响机制。开始对两群褐色菜肉鸭分别先在产蛋后 4 .5小时检查其生殖道内存在有一枚蛋形成 ,分     

利用鸡的假受精导入基因已成功

日本名古屋大学农学部教授富田武宣布:1985年底利用假受精育种得到的鸡(白来航鸡)321只母鸡中22只(约7％)开始产红皮蛋。这项研究工作是由富田和爱知县综合农业试验场养鸡研究所研究组共同进行的。研究目的是将产红皮蛋的洛岛红鸡的基因导入产蛋率高的白来航鸡中、育成产红皮蛋的白来航鸡。该鸡种产蛋力强、蛋的价格也高(参阅本刊1986年4月7日号)。新育成的这种鸡开始产的红皮蛋是淡红色,与一般的红皮蛋的颜色不同。根据分析蛋壳     

利用DNA池和测序技术快速筛查SNPs及估算基因频率

选取产蛋性能具有明显差异的4个鸡品种(莱航鸡、阳山鸡、丝羽乌骨鸡和隐性白洛克鸡)构建品种DNA池,采用测序的方法研究鸡催乳素基因5′侧翼调控区远端序列(1028bp)的多态性,快速筛查到8个可能与产蛋性能相关的SNPs(C-2402T、T-2192C、C-2161G、C-2134G、C-2062G、G-2040A、A-1944G和C-1884A)。进一步利用测序图中SNP等位基因峰高的比值估算各鸡品种等位基因的频率,其中C-2402T、C-2161G、C-1884A和C-2062G、G-2040A位点等位基因频率的估算结果分别被PCR-RFLP、PCR-SSCP所验证,说明测序峰高比值估算等位基因频率的方法具有一定的可行性。     

一种高效筛选Mx GTPase效应区SNP方法

[目的]建立高效检测家禽Mx功能区SNP方法 ,改进PCR SSCP。[方法]以引进品种和地方品种为研究对象,筛选引物,优化程序,通过二次PCR改进SSCP方法对Mx基因GTPase效应区SNP进行检测。[结果]SSCP检测引物分型检测及SNP分析,检测结果与测序一致。来航鸡检测到阳性结果,且PA检测的多态位点均由编码区A/G替换引起,济宁百日鸡和来航鸡两个群体PIC为0.2515和0.2628,呈低度多态。[结论]χ~2独立性检验位点基因频率和基因型频率呈Hardy-Weinberg平衡,不同品种间位点8(S631N)基因型分布差异极显著(P<0.01)。改进后的PCR SSCP高效经济简便,为高通量后期检测、新位点筛选奠定基础。     

藏鸡线粒体全基因组序列的测定和分析

通过PCR扩增,测序,拼接,获得藏鸡（Tibetan Chicken）线粒体全基因组序列并进行数据分析处理。藏鸡线粒体全基因组序列全长16783bp,共有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个D-loop区。模拟电子酶切结果显示,藏鸡DraI酶的酶切结果和先前报道的原鸡,茶花鸡,尼西鸡和大理漾濞黄鸡的酶切结果都不相同,为藏鸡特有。基于D-loop区全序列和13个蛋白质编码基因序列,采用N-J算法与原鸡属4个种,3个亚种和3个家鸡品系构建系统进化树：初步确定藏鸡起源于红原鸡,与家鸡中的来航鸡、白洛克鸡亲缘关系最近,但是藏鸡的进化与来航鸡、白洛克鸡这两个家鸡品系又显得相对独立。推测可能原因是藏鸡的祖先在进入高原以后处于相对封闭的环境,从而形成了独特群体遗传特性。     

鸡大肝大脾病毒RT—PCR检测方法的建立及其检测

鸡大肝大脾病(Big liver and spleen disease,BLS)是发生于商品代肉用产蛋母鸡的一种传染性疾病,1980年最先在澳大利亚发现,1988年Handlinger等对该病进行了描述.感染鸡直到性成熟后才出现临床症状,仅表现为精神沉郁、产蛋下降或达不到产蛋高峰.死亡率为1%.剖检患鸡或死亡鸡见肝脏、脾脏肿大,呈现腹膜炎和肠炎.     

慢病毒载体导入种蛋内鸡胚技术研究

种蛋内鸡胚含有潜在的胚胎干细胞(BCs)或原生殖细胞(PGCs),是目前主要的转基因鸡研究方法。采用绿色荧光蛋白(GFP)基因的pLenti6/v5-DEST-GFP慢病毒表达载体,白来航鸡与伊萨鸡种蛋,结合种蛋赤道面开窗专利技术,对含这两种细胞胚的转基因技术进行了比较研究:转染白来航鸡囊胚,孵化13天时,GFP基因的PCR检出率为64.7%,孵化率极低;转染孵化72h伊萨鸡胚血液循环中PGCs,实验蛋孵化率为35.0%,在出壳后死亡的3只小鸡肝脏中,GFP基因的PCR检出率为100%,存活的4只鸡中有3只在12月龄的血液样品中,经PCR扩增出了GFP基因;转染孵化72～79h白来航鸡胚PGCs,7批次实验的平均孵化率为21.1%,能在赤道面窗口注射胚的种蛋比率,以73～77h胚龄的最高,为75.0%～92.9%,注射病毒组出壳雏鸡血液DNA中,GFP基因PCR检出率为44.4%。两种方法比较,PGCs方法在实验蛋孵化率、胚定位在赤道面窗口率等方面有较强优势。因此为种蛋内胚细胞的转基因鸡技术研究提供了系统、可操作性强的方法。     

鸡FSH β基因5’调控区单核苷酸多态性分析

促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素.运用PCR-SSCP法检测鸡FSH β基因5'调控区的单核苷酸多态性.检测发现该区域存在6个SNP位点,即G-494A,T-470A,A-464G,-450处插入碱基A,A-405G,A-361G.同时分析了SNPs与文昌鸡早期产蛋性能的相关性.结果显示,FSH β基因调控区SNPs位点与鸡的早期产蛋性能显著相关.     

鸡大肝大脾病毒RT-PCR检测方法的建立及其检测

鸡大肝大脾病(Big liver and spleen disease,BLS)是发生于商品代肉用产蛋母鸡的一种传染性疾病,1980年最先在澳大利亚发现,1988年Handlinger[1]等对该病进行了描述.感染鸡直到性成熟后才出现临床症状,仅表现为精神沉郁、产蛋下降或达不到产蛋高峰.死亡率为1%.剖检患鸡或死亡鸡见肝脏、脾脏肿大,呈现腹膜炎和肠炎.     

鸡催乳素基因序列多态及生物信息学分析

选择繁殖性能具有明显差异的4个鸡品种（莱航鸡、阳山鸡、丝羽乌骨鸡和隐性白洛克鸡）构建品种DNA池,采用测序的方法快速筛查鸡催乳素基因（chicken prolactin,cPRL）5′侧翼调控区、外显子区和部分内含子区约4500 bp范围内可能与产蛋性能相关的序列多态,共检测到13个SNPs和两个短片段（24 bp和15 bp）插入/缺失多态,其中在5′侧翼序列筛查到9个SNPs及两个短片段插入/缺失多态,在第2外显子筛查到1个SNP,在第5外显子筛查到两个SNPs,在第2内含子筛查到1个SNP;进一步利用生物信息学分析cPRL基因的5′侧翼调控序列,发现24 bp短片段的插入使莱航鸡比阳山鸡多出了1个Evi-1可能的结合位点（93分）,C-2402T的变异则使阳山鸡比莱航鸡多出了1个C/EBPbeta可能的结合位点（94分）,这两个结合位点是否影响cPRL基因的表达,影响鸡的就巢性和产蛋性能,还需要进一步研究。Abstract：Four chicken breeds (White Leghorn, Yangshan, Taihe Silkies, White Recessive Rocks) with different reproduction were applied to screen potential SNPs related to laying performance in the 5′flanking region, exon region and partial intron region of chicken prolactin (cPRL) gene. Totally almost 4500 bp were screened rapidly based on DNA pooling and sequencing, and thirteen single nucleotide polymorphisms (SNPs) and two indels (24 bp and 15 bp) were found, including nine SNPs and two indels in the 5′flanking region, one SNP in Exon 2, two SNPs in Exon 5 and one SNP in Intron 2 respectively. Furthermore, 5′flanking region of cPRL gene was analyzed by the website of http://motif.genome.ad.jp/. A possible Evi-1 binding site (score 93) was found in White Leghorn cPRL gene because of the 24 bp insertion, another possible C/EBPbeta binding site (score 94) was found in Yangshan cPRL gene because of the variation of C-2402T. Further studies need to be carried out to verify their effects on the expression of cPRL gene, the broodiness and laying performance of chickens.     

基于BAC重组酶系统构建莱航鸡多位点基因打靶载体的研究

以莱航鸡重复的rDNA基因间的间隔序列为靶位点,利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体,为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料。首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GID表达载体。将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GID表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过其Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GID质粒,采用归位内切酶I-SceⅠ切除pYLVS质粒骨架,利用接头LS使之环化,构建成莱航鸡大容量多位点基因打靶载体BAC-TDN-GID。每次克隆均经酶切或PCR、测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向。以该载体为材料的多位点基因打靶技术将提高基因定点整合效率,解决外源基因不能稳定表达、安全性等部分问题,突破了DNA重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。     

基于BAC重组酶系统构建莱航鸡多位点基因打靶载体的研究

以莱航鸡重复的rDNA基因间的间隔序列为靶位点,利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体,为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料。首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GID表达载体。将BAC—TDN筛选我体和pYLVS-GID表达我体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过其Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GID质粒,采用归位内切酶I-SeeⅠ切除pYLVS质粒骨架,利用接头塔使之环化,构建成莱航鸡大容量多位点基因打靶载体BAC-TDN—GID。每次克隆均经酶切或PCR、测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向。以该载体为材料的多位点基因打靶技术将提高基因定点整合效率,解决外源基因不能稳定表达、安全性等部分问题,突破了DNA重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。     

微卫星座位与丝羽乌骨鸡蛋用系开产性状相关分析

采用多重PCR扩增结合荧光标记全自动电泳检测技术, 对鸡基因组1号染色体和Z染色体上20个微卫星座位与丝羽乌骨鸡BM、BF两个蛋用新品系180个个体的开产性状进行相关性分析。结果表明: 位于1号染色体上的MCW0068、MCW0200与开产蛋重相关显著(P<0.05); 位于1号染色体上的MCW0068、MCW0208和位于Z染色体上的MCW0128与开产体重相关显著(P<0.05); 而位于Z染色体上的MCW0154与开产体重相关极显著(P<0.01)。     

基于BAC重组酶系统构建莱航鸡多位点基因打靶载体的研究

以莱航鸡重复的rDNA 基因间的间隔序列为靶位点,利用BAC重组酶系统构建含人干扰素基因的多位点基因打靶载体,为建立莱航鸡多位点基因打靶技术获得关键材料。首先构建BAC-TDN筛选载体,然后构建pYLVS-GID表达载体。将BAC-TDN筛选载体和pYLVS-GID表达载体共转化至大肠杆菌NS3529中,通过其Cre重组酶的作用形成BAC-TDN-VS-GID质粒,采用归位内切酶I-SceⅠ切除pYLVS质粒骨架,利用接头LS使之环化,构建成莱航鸡大容量多位点基因打靶载体BAC-TDN-GID。每次克隆均经酶切或PCR、测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向。以该载体为材料的多位点基因打靶技术将提高基因定点整合效率,解决外源基因不能稳定表达、安全性等部分问题,突破了DNA重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。     

选择作用下家鸡淀粉酶的遗传多态性研究--基因频率分化、相关效应估计和标记辅助选择试验

对“三黄”鸡4个品系的血液淀粉酶（Amy-l）基因频率进行了估计,结果表明：Amy-l基因频率具有明显的品系特异性,父系Amy－lA高;母系Amy-lB频率高．人工选择可能是导致两个具有相同遗传来源的品系（Ⅱ系和Ⅲ系）Amy-l基因频率发生分化的原因．利用线性模型估计了Amy－l基因的加性效应,结果表明：Amy-lB有利于产蛋性能,而Amy－l4有利于体重和蛋重的提高。标记辅助选择试验结果表明,选择Amy-l传型来改变家禽品系类型是可能的,但效果有限,因此,对Amy-l的选择应结合于综合的选择方案之中．     

家禽的性别鉴定方法

现代家禽生产,祖代鸡通过翻肛鉴定性别,父母代鸡以羽速(快慢羽)判定公母,而商品代鸡则以羽色自别雌雄.常规性别鉴定方法耗资费力, 且慢羽基因(K)与内源病毒基因(ev-21)紧密连锁,导致慢羽鸡群免疫反应降低,成活率和产蛋性能下降.以鉴定W染色体上性连锁DNA序列或基因为基础,从分子水平上鉴定家禽性别的研究有望填补家禽性别鉴定空白.     

家禽的性别鉴定方法

现代家禽生产,祖代鸡通过释肛鉴定性别,父母代鸡以羽速（快慢羽）判定公母,而商品代鸡则以羽色自别雌雄。常规性别鉴定方法耗资费力,且慢羽基因（K）与内源病毒基因（ev-21）紧密连锁,导致慢羽鸡群免疫反应降低,成活率和产蛋性能下降。以鉴定W染色体上性连锁DNA序列或基因为基础,从分子水平上鉴定家禽性别的研究有望填补家禽性别鉴定空白。     

转基因鸡—方法与其潜在应用

自八十年代初第一只转基因小鼠诞生以来,许多实验室已开始着手研究这一技术在家禽上的应用。转基因技术对于家禽而言不仅仅往于对生产性状的改良,还有其它一些新应用,例如利用转基因技术导入抗病基因;转基因鸡可以在其蛋中生产异源蛋白质。 生产转基因动物的常规操作在家禽上还行不通,这主要是因为鸡的独特的繁殖系统有别于哺乳动物。对鸡无论是采取天然交配方式还是人工授精,约每十天产一枚受精蛋。在正常情况下,鸡每天排出一     

外源促性腺激素处理后鸡产蛋及孵化研究

目的:探讨促卵泡素(FSH)对低产期肉用种母鸡在产蛋数量和孵化的影响,寻求较佳的用于提高低产期母鸡产蛋的激素剂量。方法:本试验采用同种激素不同剂量的处理方式,比较实验组和对照组产蛋量和孵化情况。结果:注射不同剂量的激素对鸡的产蛋有一定的影响,实验组一的平均产蛋数与对照组接近,其它四组均显著低于对照组(P<0.05),孵化率与健雏率与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:小剂量激素处理对鸡产蛋量没有太大的影响,但大剂量会引起鸡生殖系统萎缩,激素处理对受精卵孵化及雏鸡生长并无负面影响。     

外源促性腺激素处理后鸡产蛋及孵化研究

目的：探讨促卵泡素（FSH）对低产期肉用种母鸡在产蛋数量和孵化的影响,寻求较佳的用于提高低产期母鸡产蛋的激素剂量。方法：本试验采用同种激素不同剂量的处理方式,比较实验组和对照组产蛋量和孵化情况。结果：注射不同剂量的激素对鸡的产蛋有一定的影响,实验组一的平均产蛋数与对照组接近,其它四组均显著低于对照组（P〈0．05）,孵化率与健雏率与对照组无显著差异（P〉0．05）。结论：小荆量激素处理对鸡产蛋量没有太大的影响,但大剂量会引起鸡生殖系统萎缩,激素处理对受精卵孵化及雏鸡生长并无负面影响。