γ-氨基丁酸及其受体在家鸽基底视束核中的作用

采用细胞外记录和微量离子电泳技术,研究了γ-氨基丁酸(GABA)及其拮抗剂荷苞牡丹碱和2-hydroxysaclofen对家鸽基底视束核(nBOR)神经元的作用.实验结果表明,GABA是该核团内的一种抑制性递质或调质,且主要通过GABA_A受体起作用,GABA_B受体则起较小作用.另外,GABA通过GABA_A受体参与nBOR部分神经元的方向选择性调制.     

γ-氨基丁酸受体及其基因研究进展

γ-氮基丁酸(GABA)是脊椎动物脑内一种重要的神经递质.它与其特异性受体(即 GABAR)分子的相互作用,可引起该受体偶联的 Cl^-,K⁺和 Ca²⁺通道传导的改变并产生神经元抑制效应.近年 GABA_AR 基因及其表达的研究,已为不同的种属、不同脑区域和细胞类型中 GABA_AR 的亚基组成、生理功能及其对很多中枢神经系统药物反应的多样性提供了令人信服的依据,可以预见不久这方面深入的探索也必将为有关该受体的神经精神病发病的分子机理研究及其治疗性药物的设计提出新的线索.     

尼氟灭酸对γ-氨基丁酸激活DRG神经元电流的作用

目的:观察尼氟灭酸(NFA)对大鼠背根神经节(DRG)神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流的调制作用。方法:在新鲜分离的大鼠DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术记录NFA和GABA激活电流。结果:部分DRG神经元(21/48,43.75%)外加NFA(0.1～100μmol/L)能引起浓度依赖性的外向电流,而大多数DRG神经元(150/159,94.32%)外加GABA(0.1～100μmol/L)则引起明显的浓度依赖性的内相电流。NFA-(100μmol/L)和GABA-(100μmol/L)激活电流的幅值分别是(0.27±0.06)nA(n=12)和(1.29±0.72)nA(n=53)。然而,预使用NFA(0.1～100μmol/L)能明显的抑制GABAA受体介导的内向电流。NFA的这一抑制作用也具有明显的浓度依赖性。但NFA没有改变GABA激活内向电流的EC50(大约30μmol/L)和翻转电位(大约-10mV)(P>0.05)。结论:预加NFA对GABA激活电流的峰值有明显的浓度依赖性的抑制作用。     

NO参与γ-氨基丁酸促进白三叶种子的萌发过程

白三叶种子用不同浓度γ-氨基丁酸（GABA）处理后,低浓度GABA处理的白三叶种子萌发速率和一氧化氮（NO）含量显著提高;NO清除剂cPTIO和硝酸还原酶（NR）抑制剂叠氮钢（NaN3）显著抑制GABA促进的白三叶种子萌发过程,而一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L-NAME对GABA促进白三叶种子萌发的影响不显著。据此推测,GABA促进白三叶种子萌发过程中可能有NO参与,并且NO的产生主要依赖于硝酸还原酶途径。     

甜菜碱对戊四氮致痫大鼠血清中同型半胱氨酸以及对海马γ-氨基丁酸及其受体的影响

目的 观察甜菜碱对癫痫大鼠血清中同型半胱氨酸以及对海马γ-氨基丁酸及其受体的影响.方法 将健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(腹腔注射生理盐水,1.0 mL生理盐水灌胃),癫痫组(腹腔注射戊四氮,1.0 mL生理盐水灌胃),甜菜碱高、中、低浓度组(腹腔注射戊四氮,甜菜碱灌胃),丙戊酸钠组(腹腔注射戊四氮,丙戊酸钠灌胃),实验结束后大鼠眼眶取血检测血清中同型半胱氨酸的含量;在低温条件下迅速取脑,ELISA实验检测γ-氨基丁酸含量的变化;兔疫荧光和Western bloting检测海马区γ-氨基丁酸受体的变化;取肝组织进行HE染色观察组织形态变化.结果 癫痫组同型半胱氨酸的含量与正常组比较显著降低(P＜0.01),甜菜碱高、低浓度组同型半胱氨酸含量与癫痫组比较明显降低(P＜ 0.05);ELISA结果表明癫痫组γ-氨基丁酸的含量与正常对照组相比显著下降(P＜0.01).甜菜碱高、中浓度组γ-氨基丁酸的含量与癫痫组比较显著增高(P＜0.01);免疫荧光与Western bloting检测结果,癫痫组γ-氨基丁酸受体的表达与正常对照组相比显著降低(P＜0.01),甜菜碱高、中、低浓度组较癫痫组显著升高(P＜0.01);HE染色结果,丙戊酸钠组动物肝脏组织镜下观察可见明显的空泡变性(P＜0.05).结论 甜菜碱具有较好的抗癫痫作用,且无肝毒性.     

糖皮质激素的抗痫作用及其与γ-氨基丁酸的关系

为了探讨糖皮质激素的抗癫痫效应和作用机制, 本研究观察了糖皮质激素对戊四氮诱导的慢性点燃型癫痫大鼠的行为和脑电图的影响, 并应用免疫细胞化学双重染色技术探查了大脑皮质神经元内糖皮质激素受体（ＧＲ） 与γ－ 氨基丁酸（ＧＡＢＡ） 的共存情况。结果显示, 在慢性点燃型癫痫大鼠, 在点燃后的第３ 天或第１５ 天, 先经静脉给予地塞米松（４ｍ ｇ／ｋｇ）, 再经腹腔注射戊四氮（３０ｍ ｇ／ｋｇ） 可明显减弱或完全抑制癫痫发作。免疫细胞化学双重染色证明, ＧＲ和ＧＡＢＡ共存于大脑皮质部分神经元。以上结果提示, 糖皮质激素具有抗慢性癫痫的效应, 其作用机制可能与ＧＲ调节同一神经元内ＧＡＢＡ的合成有关。     

产γ-氨基丁酸基因工程重组大肠杆菌的构建及其发酵特性

【目的】构建高产γ-氨基丁酸的基因工程重组大肠杆菌（E.coli）,并研究其发酵特性。【方法】首先通过分子生物学方法构建重组质粒pTrc99a-gadB和pTrc99a-gadB-SNO1-SNZ1,然后分别将它们转入基因敲除菌株E.coli ΔgabPΔpuuE/pTrc99a-gadB在含20 g/L底物l-谷氨酸钠的1 L发酵液中的扩大培养结果表明,重组菌培养24 h时,其发酵液中γ-氨基丁酸的含量达到最高值9.4 g/L。【结论】经基因工程构建的重组大肠杆菌产γ-氨基丁酸的能力明显提高,该研究结果为γ-氨基丁酸的产业化生产提供了良好基础。     

急性低血压对清醒大鼠前庭内侧核区γ-氨基丁酸和甘氨酸含量的影响

为了探讨急性低血压通过外周前庭器官影响前庭神经核活动的部分神经化学机制,本实验利用脑部微量透析法和高效液相色谱法,观察静脉注射硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)诱发急性低血压时,清醒大鼠前庭内侧核(medial vesti-bular nucleus,MVN)内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)和甘氨酸(glycine,Gly)含量的变化。实验选用Wistar雄性清洁级大鼠72只,体重在(250±50)g,随机分为对照组、前庭器官损伤同侧组和前庭器官损伤对侧组。实验观察到,静脉注射SNP使血压平均下降30%时,MVN内GABA和Gly含量明显减少(P0.01)。用对氨基苯胂酸盐破坏单侧外周前庭器官两周后,静脉注射SNP使血压降低30%后,单侧前庭器官破坏同侧MVN内GABA和Gly含量无明显变化;而单侧前庭器官破坏对侧MVN内GABA和Gly含量明显减少(P0.01)。上述结果提示,清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有GABA和Gly的参与。     

马桑内酯对培养的海马神经元γ-氨基丁酸和谷氨酸的影响——免疫细胞化学研究

用免疫细胞化学方法,观察研究了马桑内酯(CL)对培养的海马神经元内γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)神经元的影响.结果表明:CL作用后,GABA免疫反应阳性神经元数目减少,反应强度减弱;Glu免疫反应阳性神经元数目变化不明显,但反应增强.推测:CL可能引起海马神经元兴奋性增高是使动物模型致痫的基础,其机理可能与阻断GABA的合成途径有关.     

甲醛致炎痛对大鼠远位触液神经元γ-氨基丁酸表达的影响

目的：观察甲醛致炎痛对大鼠远位触液神经元的γ-氨基丁酸（GABA）表达。方法：SD大鼠甲醛致痛后,观察行为学变化,并采用CB-HRP/GABA双重标记技术分别观察大鼠远位触液神经元中GABA表达的变化。结果：甲醛致痛后,6h远位触液神经元内GABA增加,24h最为显著,48h恢复至正常水平。与空白对照组相比有显著差异（P〈0.05）。结论：甲醛致炎痛后大鼠远位触液神经元内在一定时间内GABA表达增加,提示远位触液神经元内GABA这种表达变化可能参与了机体对炎性痛的信息调控。     

γ-氨基丁酸、谷氨酸等对蝙蝠中脑下丘薄片神经元诱发电活动的影响

采用脑薄片细胞外记录法,研究了γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）及其拮抗剂荷包牡丹碱（Ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ）、激动剂氨苯氨丁酸（Ｂａｃｌｏｆｅｎ）和谷氨酸（Ｇｌｕ）及其拮抗剂－２ＡＰＶ、挑动剂ＮＭＤＡ中脑下丘薄片上进行。双股绞合绝缘镍络丝刺激电极,置于下丘外侧核（ＩＣｘ）给予电刺激。五管玻璃微电极微电泳药物和记录细胞诱发场电位（Ｆｉｅｌｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）。在下丘中央核（ＩＣｃ）共记录了１０２例诱发的     

猴和猫初级视皮层细胞方向选择性及其功能组织的比较研究

虽然许多视皮层区内的方向选择性细胞以柱状方式排列组构, 但猴初级视皮层(V1)区方向选择性功能组构仍然不甚明了. 定量地比较研究了猴和猫初级视皮层方向选择性细胞的比例、选择性强度和功能组织, 结果表明, 猴的方向选择性细胞的比例比猫少, 选择性强度和方向功能组织的程度均显著地比猫弱, 提示这些种属差别可能源于其神经通路的不同.     

豆豉中高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及其谷氨酸脱羧酶酶学特性研究

目的从云南传统发酵豆豉中分离和筛选得到高产γ-氨基丁酸（GABA）的乳酸菌,同时研究其分泌产生的GAD酶学特性,以期为GABA的自动化发酵及GAD的固定化生产提供参考依据。方法通过高效液相色谱分析,筛选到一株高产GABA的乳酸菌,并初步研究其GAD酶学特性。结果从云南传统发酵豆豉中筛选得到高产GA-BA的Lactobacillus plantarum YM-4-3（产量高达5.74 mmol/L,即0.592 g/L）,其最适发酵条件为35℃,MSG含量为3%,初始pH 6.0,静置厌氧（5%CO2）发酵96 h;酶学特性研究结果表明,该菌株由来GAD是一种酸性酶,在酸性条件下稳定,最适反应pH为4.0,最适反应温度40℃,辅因子磷酸吡哆醛的最适浓度为200μmol/L。结论云南传统发酵豆豉可作为筛选具有较强GABA转化能力乳酸菌的资源库,该研究将有助于新型乳酸菌发酵豆豉的研发。     

不同强度电针对PCPA失眠大鼠下丘脑γ-氨基丁酸及受体的影响

通过观察不同强度电针对睡眠节律紊乱大鼠下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)及受体(GABRA1)的影响,初步探讨针灸治疗失眠的作用机制及不同强度电针的效应差异.用免疫组织化学技术观察失眠大鼠下丘脑GABA阳性细胞的表达情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测失眠大鼠下丘脑GABRA1 mRNA表达改变.研究发现,对氯苯丙氨酸(PCPA)化失眠大鼠下丘脑GABA阳性细胞染色较浅,且表达量减少,GABRA1mRNA表达明显降低(P＜0.01);经电针治疗5 d后,失眠大鼠下丘脑GABA阳性神经元染色较深,表达量较多,GABRA1 mRNA表达显著升高(P＜0.01),且2 V电针刺激作用比1 V电针刺激更为明显.结果表明电针可增加失眠大鼠下丘脑GABA及受体的表达,调节睡眠-觉醒周期,发挥镇静催眠作用,且2 V电针刺激效果优于1 V电针刺激.     

NMDA对GABAA受体的抑制作用由钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ介导

应用制霉菌素(nystatin)穿孔全细胞记录方法,研究了N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)对新鲜分离的大鼠骶髓后连合核(SDCN)神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活的全细胞电流的调控.实验结果如下:(ⅰ) 在无Mg2+及含1 μmol/L甘氨酸的标准细胞外液中,当钳制电位为-40 mV时,NMDA(100 μmol/L)可抑制GABA和muscimol (Mus)在SDCN神经元激活的全细胞电流(IGABA和IMus),且NMDA受体的竞争性拮抗剂D-2-amino-5-phosphonovalerate(APV,100 μmol/L)可完全阻断NMDA激活的电流,并可消除NMDA对IGABA的抑制作用.(ⅱ)当细胞外液中无Ca2+及待测神经元被Ca2+螯合剂BAPTA AM预处理2 h后,NMDA对IGABA的抑制作用消失;而用电压依赖性钙通道阻断剂Cd2+(10 μmol/L)或La3+(30μmol/L)预处理后,NMDA对IGABA的抑制作用仍然存在.(ⅲ) NMDA对IGABA的抑制作用可被钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的抑制剂KN-62所阻断.提示在大鼠SDCN神经元,NMDA对IGABA的抑制作用为一Ca2+依赖性的过程,这一过程的"下游"机制与细胞内CaMKⅡ有关.揭示了Ca2+和CaMKⅡ分别作为细胞内第二信使和第三信使将NMDA受体和GABAA受体的功能联系起来.     

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法,观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后,大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少;γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下,可转变为Ｇｌｕ,因此,以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ,而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。这些变化可能与癫痫的发病机理有关     

钠钾氯共转运体在γ-氨基丁酸引起的肠神经元兴奋中的作用（英文）

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)是成年个体中枢神经系统(central nervous system, CNS)的一种抑制性神经递质,但对未成熟CNS神经元有兴奋作用。出生后GABA对CNS神经元的作用由去极化逐渐转为超极化,这种转变主要是由于大脑Na⁺-K⁺-2Cl^-共运体1 (Na⁺-K⁺-2Cl^-symporter 1, NKCC1)表达逐渐减少和K⁺-Cl^-共运体2 (K⁺-Cl^-cotransporter 2, KCC2)表达增加。与CNS神经元不同,肠神经系统(enteric nervous system, ENS)中未成熟和成体神经元都可被GABA去极化。GABA激发ENS神经元兴奋的分子机制尚不清楚,但与ENS神经元内的高Cl-浓度有关。本研究目的是检验一个假设,即ENS神经元的细胞内高Cl-浓度是由NKCCs活动维持的...     

大鼠旁巨细胞外侧核呼吸神经元的类型及其对某些递质类药物的反应

目的和方法用细胞外记录法和多管微电极微电泳法在36只麻醉自主呼吸的SD大鼠,系统探查旁巨细胞外侧核尾半侧(cPGCL)呼吸神经元(RNs)的类型及该区的递质受体情况。结果在14只大鼠系统探查,记录到39个RNs,包括吸气神经元24个、呼气神经元12个和跨时相神经元3个。在另22只大鼠,观察到微电泳谷氨酸钠(L-Glu)使12／14个RNs兴奋,γ-氨基丁酸(GABA)使全部受试RNs抑制(n=22);对NMDA受体拮抗剂DL-2-氨基-5-磷酸戊酸(AP     

一株重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建及其高效生产γ-氨基丁酸转化条件的优化

为实现微生物法高效率生产γ-氨基丁酸(GABA),从一株经多次诱变筛选的具有较高谷氨酸脱羧酶(GAD)活力植物乳杆菌GB 01-21全基因组DNA中PCR扩增获得GAD酶基因lpgad,构建重组质粒pET-28a-lpgad,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中高效诱导表达。并采用Ni柱亲和层析纯化获得重组GAD,并对其酶学性质进行初步研究,为改良转化工艺提高GABA产量提供可靠理论依据。结果显示,重组大肠杆菌中GAD酶活显著提高,可达8.53 U/mg,是植物乳杆菌GB 01-21中GAD酶活的4.24倍。将该重组菌应用于转化L-谷氨酸生产GABA,5 L发酵罐水平转化24 h产量可达143.5 g/L,摩尔转化率为97.32%,是植物乳杆菌GB 01-21的2.19倍。纯化后酶学性质进行初步研究表明:其最适pH为4.8;最适温度为37℃;Ca2+、Mg2+对其有较强的激活作用,将上述实验结果用于转化条件的优化,最终5 L发酵罐上进行转化实验,批次添加底物L-谷氨酸共600 g,转化24 h,GABA累计浓度可达204.5 g/L,摩尔转化率为97.92%,与最初转化条件相比,GABA浓度提高了42.5%,为其工业化应用打下了良好的基础。