4株苯系物降解菌菌株的筛选鉴定、降解特性及其降解基因研究

分别以苯、甲苯为碳源,从厦门污水处理厂活性污泥中富集筛选获得了2株苯降解菌B1、B2和2株甲苯降解菌J2、J6。16S rRNA基因鉴定结果表明B1、J2属于假单胞菌属(Pseudomonassp.),B2、J6属于不动杆菌属(Acinetobactersp.)。研究表明,这些菌在pH7~10的碱性范围内能很好生长。在以0.1%(V/V)苯或甲苯为唯一碳源的无机盐培养基中,B1、B2菌在72小时内对苯的降解率分别为67.7%、94.2%,J2、J6菌对甲苯的降解率分别为92.4%、84.8%。简并PCR扩增、序列分析表明,这些菌含有相同的苯双加氧酶基因,表明苯降解基因在这些降解菌中可能存在水平转移。此外,J2,J6两株菌还含有甲苯双加氧酶基因,而且J2能在甲苯浓度为70%(V/V)的LB培养基中生长。这些降解菌在苯、甲苯污染的生物治理中有应用前景。     

在浓度为50％的溶剂溶液中有耐性的恶臭假单胞菌变种

在恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)变种菌系中发现了一个含有溶剂抗性基因的遗传片段。日本科学家从日本土壤中分离出抗甲苯的细菌IH-2000。象其他许多有机溶剂一样,甲苯的生物毒性很强,0.1％或更低的浓度便能杀死大多数微生物。因而常被用来给微生物培养基消毒和在细菌酶试验中用来溶解细菌。虽然已经发现有些微生物能够同化甲苯,但其抗性浓度仍低于0.3％。但是,IH-2000菌系能够生长在含50％以上浓度的甲苯或高浓度环已烷、二甲苯、苯乙烯或庚醇的培养基中。     

1株甲苯降解真菌的筛选鉴定及其降解甲苯的特性

从实验室保存的7株真菌筛选到1株能高效降解甲苯的菌株H1,基于形态特征、ITS序列系统学分析,将H1菌株鉴定为毛栓菌（Trametes hirsuta）。利用正交设计实验方法研究了温度、pH值、甲苯浓度和吐温80浓度对H1菌株降解甲苯的影响,研究得出该菌株降解甲苯的最适条件为30℃、pH 5.0、甲苯浓度300mg/L、吐温80浓度0.05%,在该条件下H1对甲苯的最大降解率为85.3%,降解率比未优化之前有了显著提高。比较了H1菌株在3种培养基产生漆酶的能力,H1在土豆葡萄糖培养基产酶能力最强,在第7天达到酶活高峰16 500 U/L。H1在甲苯为唯一碳源的培养基中,漆酶酶活最低,培养7 d时漆酶酶活为589 U/L。     

环境保护及农业废物利用

924252通过脱氮细菌纯培并物厌级降侧甲笨〔英〕/Soh。-eher,R.J.…j Areh.Mierobiol一1991,157(1)一7~12〔译自DBA,1992,11(s),92一04791〕 从各种芳香化合物中分离到几株脱氮的假单胞菌,并试验其在有分子氧时降解甲苯的能力。从苯乙酸(SP)、对一苯基苯乙酸(B‘P)以及苯丙氨酸(FF)中富集并分离的菌株不能够使甲苯无机化。从脱氮、降解甲苯的试验室蓄水柱中分离的假单胞菌(pse:‘o仍o.as)T菌株、从苯酚中富集分离的K170和5100菌株、从水杨酸中富集并分离的52菌株,在有N:O作为唯一电子供体时可降解甲苯。从苯环标记甲苯中50%以上的“…     

化工上的应用

将产生烃类产物的一个生物纯的微生物菌株接种到含各种营养源的液体培养基中,在有通气搅拌的条件下,将该菌在液体培养基中好气培养,培养物至少以气态产生0.1nl/h的烃产物.从液相或气相中回收产物.(郭殿瑞)兜1678用于甲苯和其它苯基化合物微生物转化的方法和材料     

甲苯胁迫下有机溶剂耐受菌Anoxybacillus flavithermus ssp．yunnanesis E13T膜脂肪酸的变化

摘要:【目的】探讨目前唯一具有有机溶剂耐受性的嗜热细菌新物种Anoxybacillus flavithermus ssp．yunnanesis E13T甲苯胁迫下膜脂肪酸的变化。【方法】在不同条件下培养菌株E13T,收集细胞,提取脂肪酸,采用气相色谱-质谱(GC-MS)对脂肪酸进行定量测定分析。【结果】0.3% (V/V)甲苯胁迫下生长时,菌株E13T是在从延滞期进入初始生长的时刻显著上调饱和直链脂肪酸含量,然后随着菌体的生长,饱和直链脂肪酸的含量持续减少;在100%甲苯幸存实验中,菌株E13T的饱和直链脂肪酸的增加幅度更为显著。【结论】与常温下的有机溶剂耐受菌一样,A．flavithermus ssp．yunnanesis E13T也是通过调节细胞膜上的脂肪酸,促使细胞膜变硬以抵御甲苯毒性。但是它是通过调节饱和直链脂肪酸,而不是像常温下的有机溶剂耐受菌那样调节不饱和脂肪酸。     

环境保护上的应用

891388以恶臭假单胞菌Fl完整细胞研究甲苯二氧酶对三氯乙烯的降解作用仁英叮W::ekett,L.…了Appl.E,1二iro:,.入11-erobiol一1958,SJ(7)一1703一1708巨译自CBA,1988,(〔z),、}097] 在甲苯诱导!f,恶臭假单胞菌(尸;。-do。;ooa;户u才艺da)士户1可以以高于肠。th夕10:￡-。。:t:ie/l。:少。:‘。;,; OB36的速率从J音少补基上除去二氮乙烯。二抓乙烯浓度为80/‘m、温度为30℃的‘,,迫始速率为1.snmol/min/二g,但降解速率随时间推移急剧下降。三种二氯乙烯异构体被尸.少时ida除去,但四氛乙烯、乙烯华氛和乙烯均不能从培养棍合液,},被除去。…     

蜡状芽孢杆菌菌株Jp-A的分离鉴定及其降解苯酚特性

从某钢铁厂处理废水的活性污泥中驯化分离一株能高效降解苯酚的细菌（Jp-A）.通过形态观察、生理生化实验和16srRNA序列分析,初步鉴定Jp A为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）.在实验条件下,该菌在16、24和32 h内能将浓度分别为5、10和15 mmol·L^-1的苯酚完全降解,而30 mmol·L^-1的苯酚则完全抑制该菌的生长.该菌也能以甲苯、氯酚类和硝基酚类等芳香烃类物质作为唯一碳源和能源生长.双加氧酶检测表明,其通过间位途径开环裂解苯酚,该途径的关键酶邻苯二酚2,3 双加氧酶主要定位在细胞膜上,为诱导酶,补加葡萄糖能抑制该酶的产生.     

环境保护及农业废物利用

922347利用甲笨加单级阵组成性的洋慈很单饱菌处理TCE及降解产物〔会,英〕/S五ields,M.5.了Abstr.Pap.Am.Chem.Soe一1901,202Meet,pt.1一BIOTlig〔译自DBA,1991,10 (23),91一13880〕 开发了一种菌株洋葱假单胞菌(p。。:‘。协。,”ce刀ac‘a)G4,该菌能够降解三氯乙烯(TCE)、一90一顺式及反式二氯乙烯和1.1一二氯乙烯。新菌株相当稳定,经非选择培养100代后未检测到活性的丧失。甲苯加单氧酶对三氟苯甲酚的活性稳定。经测定G4 Phel的TCE降解率为最大野生型G4诱导活性的15~30%。G4 Phei降解TCE有一个广泛的物理条件:4~30℃、pH4~…     

假单胞菌甲苯双加氧酶在手性亚砜合成中的活性分析

[目的]从蒙氏假单胞菌CCTCC M2013683中克隆出甲苯双加氧酶基因,通过基因克隆与重组表达,获得重组酶,初步探讨其在手性亚砜合成中的活性。[方法]利用基因克隆技术获得甲苯双加氧酶基因的重组质粒,通过热激法转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行可溶性蛋白的诱导表达,用SDS-PAGE凝胶电泳检测可溶性蛋白的表达情况。将表达有重组蛋白的整细胞作为催化剂,催化氧化苯甲硫醚,用气相色谱检测苯甲亚砜的产率。[结果]基因tod-c1和基因tod-c2成功地连接在了p ETDUET-1载体上,重组表达菌株表达出了大量可溶性蛋白(Tod-C1/C2)。甲苯双加氧酶催化氧化2 mmol/L苯甲硫醚底物,最终得到了产率为0.6%的苯甲亚砜。[结论]获得了甲苯双加氧酶重组蛋白,并应用该蛋白催化获得了产率为0.6%的苯甲亚砜。     

苯系物降解菌Pseudomonas putida SW-3的筛选及其降解苯的研究

【目的】以苯、甲苯和苯乙烯为唯一碳源,从工业石油废水中筛选苯系物降解菌,分析其降解特性,探讨底物间相互作用对降解情况的影响。【方法】经生理生化和16S r RNA基因分析进行菌种鉴定,采用顶空气相色谱法测定苯系物含量,通过细胞的疏水性、乳化能力、排油圈及透射电镜观察分析菌株降解特性。【结果】经鉴定该菌为Pseudomonas putida,命名为SW-3菌株。最适降解条件下,单位菌体对苯、甲苯和苯乙烯的最大降解速率分别为0.072、0.035和0.019 g/(L·h),苯系混合物的总降解率达79.99%。底物降解实验表明,苯可促进甲苯和苯乙烯的降解,而苯乙烯则能抑制甲苯的降解。菌株的吸附、摄取和降解特性的研究发现,菌株SW-3在自身分泌的表面活性剂的协助下以耗能的方式运输苯。【结论】菌株SW-3具有产生表面活性剂和降解苯系物的能力,且底物间的相互作用能够显著影响菌株对不同底物的降解。     

新组合欧氏拟木层孔菌——“西方拟木层孔菌”的合法名称

拟木层孔菌属Phellinopsis是最近从木层孔菌属Phellinus中独立出来的一个属。拟木层孔菌属的全部4个种中,只有西方拟木层孔菌P. occidentalis在中国没有分布。简要回顾了西方拟木层孔菌这一名称的历史,其基元异名西方层孔菌Fomes occidentalis属于无效发表,因此将西方拟木层孔菌处理为无效名称,并将该名称所代表种的合法名称欧氏木层孔菌Phellinus overholtsii组合为欧氏拟木层孔菌Phellinopsis overholtsii。     

1株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)1217石油降解特性及相关基因分析（英文）

从石油污染土壤中分离得到1株石油降解菌1217,经细菌形态学、生理生化及16S rD NA序列分析初步鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。在温度5~65℃,pH 2~10,盐度0~9%的条件下菌株能很好生长,在以正十二烷、正十八烷、苯、甲苯、二甲苯和萘为唯一碳源的培养基中生长良好。在10℃和30℃条件下培养7 d,对原油的降解率分别为21.57%和15.15%。菌株产生的生物表面活性剂可以将表面张力从72.20 mN/m降至35.14 mN/m。利用特异性PCR扩增,在菌株中检测到烷烃单加氧酶、甲苯双加氧酶、联苯双加氧酶、芳香烃双加氧酶和氧化还原酶基因,并成功克隆出烷烃单加氧酶和芳烃双加氧酶基因,同相关基因比对分析,与铜绿假单胞菌PAO1的相应基因相似度分别为99.91%和99.22%。研究表明,菌株在生物修复和石油烃污染环境中具有潜在的应用价值。     

多隔镰刀菌的分类研究

多隔镰刀菌(Fusarium decemcellulare Brick)属于镰刀菌属(Fusarium)的拟穗霉组(Spicarioides),以往的镰刀菌分类文献都将它作为单个种组成这一组,由于Wollen-weber & Reinking系统及其后镰刀菌诸分类系统中一直没有改变它作为镰刀菌属独立     

磁分离仪分离磁性细菌的新方法

磁性细菌胞内可以产生磁性颗粒,因此具有趋磁性,基于这种特性,利用磁分离的原理,本研究开发了一种磁性细菌分离仪,提供了一种分离磁性细菌的新方法。以氧化亚铁硫杆菌为例,使用磁性细菌分离仪进行分离,可以得到强磁菌和弱磁菌。利用透射电镜观察,强磁菌胞内磁性颗粒明显多于弱磁菌;半固体平板磁泳实验也表明强磁菌趋磁性明显强于弱磁菌。各项实验结果表明磁性细菌分离仪可以有效地分离磁性细菌,这是一种分离磁性细菌的新方法,将促进磁性细菌分离培养的研究。     

双歧杆菌包埋保存技术工艺研究

采用一种全新的思路和方法,从将双歧杆菌活菌完全隔绝空气和降低其对温度的敏感性出发,运用制备微囊的方法,采用一种药用成膜材料,将包埋与冷冻干燥有机结合起来,在冷冻干燥的同时迅速在双歧杆菌活菌体周围形成一层类似微囊的保护膜,即将双歧杆菌活菌体包埋在保护膜内,从而达到减少甚至避免菌体冻干损伤,提高活菌存活率和收率,延长活菌常温保存期,提高活菌常温稳定性的目的。同时,这种包埋保存技术完全去除了常规冻干辅料——脱脂奶粉,能有效减少冷冻干燥菌粉的吸湿性,更利于活菌保存。用双歧杆菌包埋保存技术制备出的冻干菌粉,其含菌量比用常规冻干保护剂作冻干辅料的冻干菌粉高几百亿个／克,双歧杆菌活菌在37℃的保存期达四个月(相当于常温下保存一年以上),有效地解决了双歧杆菌活菌制剂常温保存期短的技术关键问题。     

伊蒙菌病与不育大孢子菌病

伊蒙菌是一种双相真菌,可引起不育大孢子菌病和伊蒙菌病。这两种病临床较为少见,但近年来有报道伊蒙菌成为南非HIV感染人群主要的致病性双相真菌,引起高度关注。自1991年我国首报1例不育大孢子菌病后,2014年广州市新现2例皮肤播散性伊蒙菌病。故现将伊蒙菌感染的病原学、流行病学、临床表现、实验室诊断和治疗作一综述,以引起国内同行重视。     

用透性化细胞技术合成海藻糖

建立了一种渗透处理微球菌细胞的方法,得到的透性化细胞可多批使用并能长时间保持胞内酶的活力,极大地提高了单位菌体的利用率,降低了成本,为海藻糖实现工业化开辟了新的思路。实验结果表明:菌悬液用5％(v/v)甲苯处理40min,得到的菌体即为透性化细胞,再以10％淀粉液化液为底物进行海藻糖转化实验,转化率可达70％;该透性化细胞至少可连续进行6批酶反应(12h/批),酶活基本保持稳定。     

三种致病性耶尔森氏菌噬菌体的分离鉴定研究进展

3种致病性耶尔森氏菌包括鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌,其噬菌体可用于耶尔森氏菌的诊断、防治和生态进化学研究。本文重点分析3种致病性耶尔森氏菌噬菌体的分离鉴定史。将3种耶尔森氏菌噬菌体基因组进行比较分析,并对各菌的噬菌体受体进行总结,为研究及利用3种耶尔森氏菌噬菌体提供思路。     

鞘氨醇单胞菌PY3菲降解基因的克隆及序列分析

将菲降解菌鞘氨醇单胞菌(Sphingomanas sp.)PY3的DNA片段与pUC119质粒连接后,转化大肠杆菌JM109,经筛选得到两个质粒,分别命名为pUp1(带有23kb外源DNA片段)和pUp2(带有39kb外源DNA片段)。pUp 1的DNA含有2个ORF。ORF 1由275个氨基酸组成,与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)F1的甲苯水解酶及菌株Pseudomonas CF600的甲苯水解酶在氨基酸水平上有47%的同源性。ORF 2由327个氨基酸组成,与嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的邻苯二酚双加氧酶(phe B)及紫红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)CTM的邻苯二酚双加氧酶(C23O)在氨基酸水平上分别有57%和44%的同源性。