烷化溶血磷脂对U266 细胞作用的实验研究

为研究烷化溶血磷脂(ET—18-OCH3)对骨髓瘤细胞系U266的体外杀伤作用。通过台盼蓝拒染法和克隆形成率来反映ET—18-OCH3对U266细胞的抗增殖效应;通过荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解片段,流式细胞仪作DNA倍体分析来观察ET—18-OCH3诱导U266细胞凋亡的作用;通过RT—PCR检测bcl-2、c—myc mRNA水平,流式细胞仪检测Bcl-2、C—myc蛋白的表达来初步探讨其相关的作用机制。结果显示．U266细胞经ET—18-OCH3处理后细胞生长明显受抑,呈时间和剂量依赖性;荧光显微镜,电镜下观察均可见凋亡形态学改变,7．5μg／ml ET—18-OCH3作用24小时后出现典型的DNA降解片段。流式细胞仪检测凋亡率为17．53％;RT—PCR显示bcl-2、c-myc mRNA表达均随ET—18-OCH3作用时间的增加而减弱,ET—18-OCH3作用24小时后,bcl-2、c—myc mRNA分别减少了86％、72％;流式细胞仪检测Bcl-2蛋白、C-myc蛋白分别减少了原来的17％、60％。研究结果表明,ET—18-OCH3对U266细胞的生长具有明显的抑制作用,并可诱导细胞的凋亡,具有明显的抗肿瘤效应。     

IL——3和羟基脲协同诱导K562细胞凋亡

The effect of IL-3 and hydroxyurea on human erythroleukemia cell line (K562 cells) was demonstrated by using the electro-microscopy and flow cytometry. Our data showed that neither IL-3 nor hydroxyurea could induce the apoptosis of K562 cells alone. However, the IL-3 and hydroxyurea could induce the apoptosis of K562 cells cooperatively. Analysis with flow cytometry showed that the percentage of apoptotic cells was about 31.90% after K562 cells were induced by IL-3 and hydroxyurea cooperatively for 5 days, and the sub-G1 peak (apoptotic peak) was detected in the induced K562 cells. Meanwhile, the percentage of S-phase in the IL-3 and hydroxyurea induced K562 cells was increased, and the proliferation of the induced K562 cells was inhibited significantly. Furthermore, the IL-3 and hydroxyurea induced K562 cells showed chromatin condensation with regular crescents at the nuclear edges and apoptotic bodies. It suggested that IL-3 could enhance the sensitivity of K562 cells to hydroxyurea and the apoptosis of K562 cells could be induced by IL-3 and hydroxyurea cooperatively.     

反义寡核苷酸对K562细胞的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的研究bcr-abl硫代磷酸反义寡脱氧核糖核酸(Aspo)作用于K562细胞后,对细胞mRNA、蛋白水平的影响,以及诱导细胞凋亡情况。方法Aspo与K562细胞共培养后,用流式细胞仪检测P210蛋白表达及细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测bcr-ablmRNA表达情况,电镜观察细胞凋亡的形态学改变。结果K562细胞经浓度大于5μmol/Lbcr-ablAspo处理24h,流式细胞仪检测细胞P210蛋白表达下调甚至完全受抑制,10μmol/Lbcr-ablAspo作用48h,细胞bcr-ablmRNA下降45%左右,当细胞初始浓度为1×104/ml时,Aspo作用120h细胞凋亡率20%～30%,当细胞数增加至1×105/ml时,Aspo作用48h即可使30%细胞发生凋亡,电镜下观察到典型凋亡细胞形态学改变。结论bcr-abl反义核酸对K562细胞mRNA水平具有抑制作用,同时还可诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷对K562细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。方法：以As2O3作为耐药逆转剂,用台盼兰排染法,噻唑兰(MTT)还原法,Hoechst 33342和PI荧光染色法,流式细胞仪技术和荧光分光光度法,观察了不同浓度的As2O3(0．2—5．0μmol/L)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。结果：As2O3对K562细胞具有明显生长抑制和凋亡诱导作用,其作用强度在一定范围内均具药物浓度和时间依赖性。结论：As2O3主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其毒性作用。     

氯化高铁血红素诱导K562细胞中β-珠蛋白基因表达的研究

以绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报道基因,构建了在β－珠蛋白启动子驱动及HS2元件调控下的重组表达载体HG,用脂质体转染法将其转染到K562细胞中,并用RT－PCR方法及流式细胞仪检测氯化高铁血红素（Hm)对K562细胞中β－珠蛋白基因表达及重组载体HG在K562细胞中瞬时表达的影响。结果显示：用30μmol/L Hm诱导K562细胞24、48及72h后,不仅其γ－珠蛋白mRNA水平升高,其β－珠蛋白mRNA水平也明显上升,而且这种诱导作用在诱导24、48h后比较明显;Hm还可增强重组表达载体HG在K562细胞中的瞬时表达。提示Hm诱导红系分化的机理可能与γ→β珠蛋白基因的转换机制相关。     

ZnPcH1介导的光动力疗法对K562细胞的作用及其机制研究

探讨新型光敏剂ZnPcH1介导的光动力疗法对K562细胞的杀伤效应及其杀伤机制.应用MTT比色法检测光动力疗法对K562细胞增殖能力的影响;采用AO/EB荧光染色法、DNA片段化分析、TUNNEL、AnnexinV-FTTC/PI双染法等检测ZnPcH1-PDT诱导K562细胞的死亡方式;以RT-PCR法检测ZnPcH...     

人参总皂苷对K562细胞促红细胞生成素受体的作用

目的:研究人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562)促红细胞生成素受体(EpoR)的作用.方法:以50、100、200、300、500mg/L TSPG刺激K562细胞24h,采用流式细胞仪检测细胞膜EpoR表达的变化;Elisa检测K562细胞膜、细胞浆EpoR表达量的改变;激光共聚焦显微镜观察K562细胞EpoR表达的分布.结果:以不同剂量,TSPG作用K562细胞24h,流式细胞仪检测显示K562细胞膜表面EpoR呈剂量依赖性下降;细胞Elisa实验结果也显示K562细胞膜表面EpoR表达呈剂量依赖性下降,而细胞浆内EpoR表达呈剂量依赖性增加;激光共聚焦显微镜观察可见K562细胞经200mg/L TSPG作用24h后其膜上的EpoR数量明显减少,荧光强度明显减弱.结论:TSPG可使K562细胞浆EpoR的表达增强,且随着剂量的加大更加明显,而使细胞膜中EpoR的表达减少,这可能是,TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一.     

DADS 上调K562 细胞p21WAF1 表达对细胞生长阻抑和凋亡 的实验研究

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对体外培养的人白血病细胞系K562细胞生长阻抑和凋亡作用及机制。方法:采用MTT分析法检测细胞活性、流式细胞术分析细胞周期及凋亡率、免疫组化检测p21WAF1基因表达。结果:1).DADS在10mg/L～80 mg/L范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖效应;2).不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,细胞周期发生了变化:DADS可以将K562细胞阻滞于G2/M期;3).DADS浓度在10mg/L～80mg/L时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,有显著的统计学意义(P<0.05或P<0.01);4).用浓度分别为0mg/L,20mg/L,40mg/L,80mg/L处理K562细胞24h后,p21WAF1蛋白表达上调,有统计学意义(P<0.05或P<0.01),溶媒组和阴性对照组无差别(P>0.05)。结论:DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用。其作用的可能机制与上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21WAF1表达,从而诱使k562细胞阻滞于G2/M期有关。     

川芎嗪与β-榄香烯联合应用对K562/ADM细胞的生长抑制作用

目的：探讨川芎嗪与β－榄香烯联合应用对K562/ADM的生长抑制作用。方法：以耐阿霉素细胞株K562／ADM为实验模型。结果：1．两者对K562／ADM及K562细胞的IC50接近,即耐药细胞K562／ADM对两种中药制剂不具有耐药性。2．非细胞毒性剂量的川芎嗪（TMP350μg/ml)及β－榄香精（β－elemene 4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P＜0．01）,提高细胞对ADM的敏感性,抗药性逆转分别为2．03倍及2．18倍。3．进一步将上述两种药物联合应用,发现其对ADM的抗药性逆转为4．65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和,并且其对升高该细胞内ADM的浓度也具有协同作用。结论：川芭嗪与β－榄香烯联合应用能够抑制K562／ADM的的生长,并且具有协同性。     

芜菁块根汁对~(60)Co-γ致小鼠损伤的防护效应

用清洁级ICR小鼠为实验动物,探讨芜菁块根汁对~(60)Co-γ射线辐照损伤的防护和修复效应。测定血象、白细胞分类计数、脾指数、胸腺指数和小鼠PCE的微核试验等方法。结果表明:辐照前给芜菁汁组、辐照后给芜菁汁组和连续给芜菁汁组分别使小鼠体重、免疫器官指数、血象、PCE微核率等明显高于~(60)Co-γ辐照组,其中免疫器官指数、红细胞、白细胞和血小板、PCE微核率等数据与~(60)Co-γ辐照组的差异极为显著(P<0.001)。说明芜菁块根汁对小鼠机体造血和免疫系统受到电离辐射损伤时不仅具有明显的防护作用,而且对辐射损伤具有一定的修复作用。     

Inhibition of cell division but not nuclear division by 1-O- octadecyl-2-O-methyl-Sn-glycero-3-phosphocholine

1-O-Octadecyl-2-O-methyl-glycero-3-phosphocholine (ET-18-OCH(3)) selectively inhibits the growth of cancer cells. Here we show that in some cell types ET-18-OCH(3)and liposome-associated ET-18-OCH(3)inhibit cell division without concurrent inhibition of nuclear division, leading to multinucleate cell formation, and cell death through apoptosis. Cell cycle analysis revealed that ET-18-OCH(3)-treated U-937 cells continued to move through the cell cycle, but many cells were not able to divide and instead accumulated as tetraploid cells or octaploid cells in the G0/G1 phase of the cell cycle. Inhibition of cytokinesis has been shown to be paralleled by activation of U-937 cells, including upregulation of some cell-surface markers, acquisition of phagocytic activity, and secretion of tumor necrosis factor (TNF)-alpha (Pushkareva et al., 2000). Furthermore, treatment of cells with ET-18-OCH(3)results in the accumulation of apoptotic cells in time- and dose-dependent manner. It is possible that inhibition of cytokinesis may be related to cytoskeletal effects.     

银杏叶提取物对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究银杏叶提取物（EGb761）对H2O2所致星形胶质细胞氧化损伤的保护作用。方法 用不同浓度的EGb761预处理细胞,再加入H2O2,通过噻唑蓝（MTT）实验、线粒体跨膜电位（△ψm）及细胞色素C释放实验、DNA损伤实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）活性测定,观察EGb761对细胞存活率、线粒体膜通透性、DNA氧化损伤及Caspase-3活性的影响。结果 EGb761能明显降低Hz02对星形胶质细胞的氧化损伤,提高细胞的存活率;维持线粒体膜的完整性,抑制跨膜电位的耗散和细胞色素C的释放;抑制Caspase-3的活化和DNA的降解。结论 EGb761具有清除活性氧,减轻H2O2所致星形胶质细胞的氧化损伤,对星形胶质细胞有保护作用。     

厌氧棒状杆菌与双歧杆菌抗小鼠腹水瘤活性的比较

厌氧棒状杆菌和双歧杆菌分别制成死菌苗,在相同实验条件下观察两菌对小鼠腹水瘤的抗瘤效果。结果显示,两种菌苗均有显著的抗瘤活性,而厌氧棒状杆菌抗瘤作用更强于双歧杆菌,特别在延长观察期尤为显著。应用两菌苗后,脾指数均有不同程度升高,未见明显毒性作用。     

抗氧化剂对HeLa细胞在竹红菌甲素（HA）光敏损伤下的保护作用的研究

通过细胞台盼兰拒染检测、电镜观察以及＾３Ｈ－Ｔｄｒ同位素掺入等方法,分别从细胞水平及分子水平上,定性定量测定了维生素Ｅ、丁羟基甲苯（ＢＨＴ）、阿魏酸钠（ＳＦ）三种抗氧化剂对于竹红菌甲素（ＨＡ）光敏所致ＨｅＬａ细胞损伤的抑制。结果表明：三种抗氧化剂对于细胞的损伤均有不同程度的抑制作用,其中ＶｉｔＥ的抑制作用最明显,ＢＨＴ及ＳＦ的抑制作用则较弱,提示脂质过氧化在细胞膜和细胞核损伤中起着重要的作用。     

抗氧化剂对HeLa细胞在竹红菌甲素（HA）光敏损伤下的保护作用的研究

通过细胞台盼兰拒染检测、电镜观察以及３Ｈ—Ｔｄｒ同位素掺入等方法,分别从细胞水平及分子水平上,定性定量测定了维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）、丁羟基甲苯（ＢＨＴ）、阿魏酸钠（ＳＦ）三种抗氧化剂对于竹红菌甲素（ＨＡ）光敏所致ＨｅＬａ细胞损伤的抑制作用。结果表明：三种抗氧化剂对于细胞的损伤均有不同程度的抑制作用,其中ＶｉｔＥ的抑制作用最明显,ＢＨＴ及ＳＦ的抑制作用则较弱,提示脂质过氧化在细胞膜和细胞核损伤中起着重要的作用。     

红毛五加茎皮多糖对体外培养人白血病粒细胞生物学效应的研究

本文采用体外培养方法就红毛五加茎皮多糖对癌细胞生物学效应及其抗癌机制进行了初探。实验结果证明,红毛五加茎皮多糖具有良好的抗癌效果,能使体外培养的人白血病粒细胞形态明显改变,癌细胞生长受抑制,细胞生长曲线下降,细胞死亡率上升,流式细胞分光光度计测定分析,提示癌细胞合成ＤＮＡ的前期受到抑制,阻断ＤＮＡ的合成。     

脂连素对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察脂连素对刀豆蛋白A（ConA）所致小鼠急性肝损伤的干预作用,并对其机制进行初步探讨。方法雄性BALB／C小鼠17只,随机分为3组：ConA组6只：尾静脉注射ConA。脂连素组5只：在静脉注射ConA前腹腔内注射脂连素。对照组6只：尾静脉注射生理盐水。注射ConA后8小时留取血清检测各组ALT和TNF-α水平,肝组织进行HE染色,并检测NF-κB活性及肝细胞凋亡率。结果HE染色可见ConA组肝细胞水肿、变性,肝组织内淋巴细胞浸润、淤血等,脂连素组上述病理变化减轻（P〈0．01）。脂连素组ALT和TNF-α水平、NF-κB活性、肝细胞凋亡率均低于ConA组（P〈0．01或P〈0．05）。结论脂连素具有抗炎作用,其机制可能与减少TNF-α的产生、抑制肝组织NF-κB活性及抗肝细胞凋亡有关。     

Increased cell-surface receptor expression on U-937 cells induced by 1-O-octadecyl-2-O-methyl-sn-glycero-3-phosphocholine

Association of the ether lipid, 1-O-octadecyl-2-O-methyl-sn-glycero-3-phosphocholine (ET-18-OCH₃) with liposomes (ELL-12) reduces acute toxicity while maintaining or enhancing anticancer activity in experimental tumor models. ELL-12 has been shown to induce apoptosis by a cytochrome-c-dependent caspase-mediated pathway, which results in proteolytic cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase and lamins, but the antitumor effects of ET-18-OCH₃ or ELL-12 could result from tumor cell differentiation or activation. Here we compared the effects of ET-18-OCH₃ and ELL-12 on the expression of cell-surface proteins associated with cell differentiation and/or activation in U-937 cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate and all-trans-retinoic acid, which induce differentiation in U-937 cells, up-regulated CD11b (MAC1 α-integrin) and CD82 and down-regulated CD71 (transferrin receptor) in a time- and dose-dependent manner. In contrast, ET-18-OCH₃ and ELL-12 up-regulated both CD71 and CD11b and did not have any effect on expression of CD82 in U-937 cells, suggesting that the ELL-12 may activate these cells rather than induce differentiation. Further evidence of activation was that ET-18-OCH₃ and ELL-12 strongly induced tumor necrosis factor α production by U-937 cells. Received: 25 February 1999 / Accepted: 4 August 1999     

生长抑素对白血病细胞增殖影响的免疫组织化学研究

目的　研究生长抑素 (somatostatin ,SS)对人红白血病K5 6 2细胞和白血病患者骨髓单个核细胞 (BMM NC)增殖的影响。方法　将 8肽生长抑素 (奥曲肽 ,octreotide ,SMS)在体外作用于K5 6 2细胞和BMMNC ;用原位末端标记 (TUNEL)技术、免疫组织化学方法在光镜下随机计数阳性细胞数 ,并用图象分析系统分析bcl 2蛋白和CD34 抗原表达的光密度值 (OD值 )。结果　与对照组比较 ,用SMS 10 -6mol/L处理的K5 6 2细胞组TUNEL检测凋亡细胞明显增多(P <0 0 1)。在加SMS 10 -8mol/L～ 10 -6mol/L处理的白血病患者BMMNC组 ,bcl 2蛋白的表达与未加SMS组比较 ,阳性细胞数明显减少 (P <0 0 1) ;OD值P <0 0 1。CD34 抗原表达在SMS10 -6mol/L和 10 -7mol/L处理的白血病患者BMMNC组 ,阳性细胞数比与未处理组明显减少 (P <0 0 1) ;OD值明显低于对照组 ,分别为P <0 0 1和P <0 0 5。结论　SMS可抑制K5 6 2细胞和白血病患者BMMNC增殖 ,诱导凋亡 ;减少bcl 2蛋白和CD34 抗原的表达 ;SMS对白血病细胞具有抑制增殖的作用。