基因工程

<正> 852571链霉菌噬菌体载体的构建:硫链丝菌肽抗性基因(tsr)引入R4噬菌体[英]/Morino,T.…//Agric.Biol.Chem.-1984,48(8).-1985～1990[译自DBA,1984,3(23),84-10928]用焦磷酸浓缩法从R4-δ-2中分离出R4噬菌体的两个进一步缺失突变体R4-δ-21和     

其它药剂

<正> 853323从头状链霉菌NRRI12508株获得AX-2物质[专,英]/Kyowa-Hakko/EP-110-563 : 28.10.82-JP-189467(13.06.84)27.10.83 as 306551.84-147767/24(16页)[译自DBA,1984,3(17),84-08158]本文介绍了化合物(Ⅰ)。这是一种抗肿瘤制剂,在营养性培养基中培养该菌,特     

抗生素

<正>产生红霉素的红链霉菌3038菌株分离出质粒pPC7和pPC8已有报道,并给出了限制性内切酶的图谱。该菌株在含有甘氨酸的TSB培养基中,在振荡下于30℃培养18-24小时。在相同的培养基中培养40小时就形成原生质体。按以前的方法进行蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)和红链霉菌属的转化。把原生质体加进含有酵母提取物的R_2培     

适合龟裂链霉菌~(13)C代谢通量分析合成培养基的优化及应用

为开发一种适合龟裂链霉菌13C代谢通量分析的合成培养基,以龟裂链霉菌模式菌株M4018为研究对象,比较其在各种有机氮源和无机氮源的生长和土霉素合成特性。首次筛选到以硝酸钾为主要氮源的合成培养基,通过响应面分析法进一步优化,将土霉素合成能力由75.2 mg/L提高到145.6 mg/L。并应用到100%的1-13C葡萄糖标记实验,首次从同位素标记代谢流分析上证实了龟裂链霉菌中不存在2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡糖酸裂解途径(Entner-Doudoroff pathway,ED),为龟裂链霉菌13C代谢通量分析提供了重要基础。     

聚合物纳米微球分离纯化放线菌素D的研究（英文）

本实验考察从链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物中分离制备高纯度放线菌素D的工艺,以聚合物纳米微球为固相载体,对聚合物纳米微球型号、洗脱条件进行优化。最终确立放线菌素D的分离纯化工艺为:采用PS40-300(以聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物为基质,粒径40μm,孔径300)纳米微球作为层析填料;以链霉菌发酵产生的放线菌素D粗提物为上样样品,用适量95%乙醇(V/V)充分溶解,上样量为0.5 g/100 m L,控制洗脱速度为5.0 m L/min,以65%乙醇水(V/V)洗脱,收集纯度95%以上的洗脱液,真空浓缩得到高纯度的放线菌素D。结果表明该分离纯化工艺,纯度与收率都较高,流程简单、可行,为该产品产业化开发奠定基础。     

氮肥添加对青藏高原高寒草甸6个群落优势种生态化学计量学特征的影响

以青藏高原高寒草甸为研究对象, 通过人工氮肥添加试验, 研究6个群落优势种在不同施氮(N)水平下叶片碳(C)、N、磷(P)元素含量的变化以及生态化学计量学特征。结果表明: 自然条件下, 6个物种叶片N、P质量浓度存在显著的差异, 表现为: 黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)最高, 为24.5和2.51 g·kg^-1, 其叶片N含量低于而P含量高于我国其他草地的豆科植物; 其余5个物种叶片N、P质量浓度分别为11.5-18.1和1.49-1.72 g·kg^-1, 嵩草(Kobresia myosuroides)叶片N含量最低, 垂穗披碱草(Elymus nutans)叶片P含量最低, 与我国其他区域的研究结果相比, 其叶片N和P含量均低于我国其他草地非豆科植物。随氮素添加量的增大, 6种群落优势种叶片的C和P含量保持不变; 其他5种植物叶片N含量显著增加, 黄花棘豆叶片N含量保持不变。未添加氮肥时, 6种植物叶片N:P为7.3-11.2, 说明该区植物生长更多地受N限制。随N添加量的增加, 除黄花棘豆外, 其他5种植物叶片N:P大于16, 表现为植物生长受P限制。综合研究表明, 青藏草原高寒草甸植物叶片N含量较低, 植物受N影响显著, 但不同物种对N的添加反应不同, 豆科植物黄花棘豆叶片对N添加不敏感, 其他5个物种叶片全N含量随着N添加量的升高而增加, 该研究结果可为高寒草甸科学施肥提供理论依据。     

Effects of N addition on ecological stoichiometric characteristics in six dominant plant species of alpine meadow on the Qinghai-Xizang Plateau,China

以青藏高原高寒草甸为研究对象, 通过人工氮肥添加试验, 研究6个群落优势种在不同施氮(N)水平下叶片碳(C)、N、磷(P)元素含量的变化以及生态化学计量学特征。结果表明: 自然条件下, 6个物种叶片N、P质量浓度存在显著的差异, 表现为: 黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)最高, 为24.5和2.51 g·kg^-1, 其叶片N含量低于而P含量高于我国其他草地的豆科植物; 其余5个物种叶片N、P质量浓度分别为11.5-18.1和1.49-1.72 g·kg^-1, 嵩草(Kobresia myosuroides)叶片N含量最低, 垂穗披碱草(Elymus nutans)叶片P含量最低, 与我国其他区域的研究结果相比, 其叶片N和P含量均低于我国其他草地非豆科植物。随氮素添加量的增大, 6种群落优势种叶片的C和P含量保持不变; 其他5种植物叶片N含量显著增加, 黄花棘豆叶片N含量保持不变。未添加氮肥时, 6种植物叶片N:P为7.3-11.2, 说明该区植物生长更多地受N限制。随N添加量的增加, 除黄花棘豆外, 其他5种植物叶片N:P大于16, 表现为植物生长受P限制。综合研究表明, 青藏草原高寒草甸植物叶片N含量较低, 植物受N影响显著, 但不同物种对N的添加反应不同, 豆科植物黄花棘豆叶片对N添加不敏感, 其他5个物种叶片全N含量随着N添加量的升高而增加, 该研究结果可为高寒草甸科学施肥提供理论依据。     

发酵条件优化及基因簇加倍对厦门霉素生物合成的影响

【目的】优化发酵培养条件及加倍xim基因簇,提高厦门霉素的产量。【方法】采用单因素添加:C源(鼠李糖、葡萄糖酸)、无机N源(KNO3)、稀有金属元素(Sc Cl3)及A-Factor(γ-丁内酯),优化适宜厦门链霉菌318菌株产生厦门霉素的培养条件;通过位点特异性整合将厦门霉素生物合成基因簇进行加倍,构建高产的基因工程菌株厦门链霉菌318Pls1,并对其培养基进行了正交实验优化。【结果】与初产量(15 mg/L)相比,在GYM培养基中进行单因素添加可使318菌株的厦门霉素产量达到20 mg/L;而基因簇加倍菌株318Pls1在GYM培养基上的厦门霉素产量可达35 mg/L,在正交实验优化后的9#培养基中厦门霉素产量可达76.15 mg/L。【结论】对厦门霉素的发酵培养条件进行了优化,并通过基因簇过表达获得了生物合成能力提高的菌株,为进一步提高其产量奠定了基础。     

藏药镰形棘豆对缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用

探讨藏药镰形棘豆(OFB)提取物对缺氧/复氧(H/R)H_9C_2心肌细胞损伤的保护作用。方法:采用三气培养箱培养法建立H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型。实验分为3组:正常细胞对照组;缺氧/复氧损伤组(H/R);7个药物加缺氧/复氧损伤组(H/R+OFB);于缺氧/复氧开始时分别加入终浓度为0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、1 000 mg/L的镰形棘豆提取物,以细胞活力为指标,利用MTS法测定药物对细胞活力的影响。检测镰形棘豆乙酸乙酯水甲醇压柱组分与氯仿萃取组分不同给药剂量对H_9C_2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。结果:与模型组相比药物处理组显著升高缺氧/复氧H_9C_2心肌细胞活力(p0.05)。结论:藏药镰形棘豆对H_9C_2心肌细胞的缺氧/复氧损伤有保护作用。     

植物内生放线菌Lj20的鉴定及其抗真菌物质的合成

[目的]菌株Li20是从辣椒植株根部分离得到的一株有抗真菌活性的植物内生放线菌.为了进一步开发利用这一放线菌,对其进行了鉴定及抗菌活性物质的研究.[方法]根据Lj20的形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分和16s rDNA序列对其进行鉴定.结合GC-MS分析,合成了代谢产物中所含的抗真菌活性物质,并用菌丝生长抑制法测定其生物活性.[结果]Lj20菌株属于链霉菌属,与娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)极为相似.代谢产物中含有2,6-二叔丁基对甲酚和3,5-二叔丁基-4-羟基-苯甲醚.两种化合物对番茄灰霉病菌的EC<,50>值分别为237.04 mg/L和186.48 mg/L.[结论]菌株Li20鉴定为娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei).2,6-二叔丁基对甲和3,5-二叔丁基-4-羟基-苯甲醚对番茄灰霉病菌都有较强的抑制作用.     

链霉菌HP-S-01降解高效氯氰菊酯的特性及其动力学

研究不同接菌量、温度、pH、装液量和农药初始浓度对链霉菌HP-S-01降解高效氯氰菊酯的影响。结果表明,在接菌量为0.6 g/L、28°C、pH 7.5和装液量为50 mL/250 mL三角瓶条件下培养3 d,该链霉菌对100 mg/L高效氯氰菊酯降解率达到96%以上。链霉菌HP-S-01还能明显降解高效氟氯氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、右旋苯醚菊酯和胺菊酯等拟除虫菊酯农药,且降解过程符合一级动力学模型,降解半衰期分别为0.78、0.88、1.08和1.24 d。采用Andrews方程对链霉菌HP-S-01降解高效氯氰菊酯的过程进行拟合,其动力学参数为qmax=1.826 3 d?1,Ks=58.951 3 mg/L,Ki=359.378 2 mg/L,该链霉菌降解高效氯氰菊酯最佳的初始浓度为145.553 5 mg/L,试验数据与该动力学方程拟合较好。     

聚-ε-赖氨酸补料发酵的初步研究

在5L自动发酵罐中,通过分批发酵和补料分批发酵,对白色链霉菌(Strepomyces albulus)生物合成聚-ε-赖氨酸(ε-PL)进行了初步研究。结果表明,在分批发酵中,利用pH控制策略,ε-PL产量从0.6 g/L提高到2.4 g/L。在分批补料发酵中,采用pH控制策略,当糖浓度在10g/L以下,补加葡萄糖和硫酸铵,则菌体大量生长,ε-PL产量提高到16.81 g/L,为分批培养的27倍。     

生物转化法合成16α-羟基泼尼松龙的发酵工艺研究

目的:研究1株玫瑰产色链霉菌(Streptomyces roseochromogenes)的发酵培养基和底物转化条件,以提高16α-羟基泼尼松龙的转化率。方法:采用紫外与氯化锂复合诱变获得目的菌株TS-58,利用正交实验等方法考查摇瓶发酵条件,研究不同浓度的碳源、氮源对玫瑰产色链霉菌生长的影响,以及不同底物浓度、底物加入时间、装液量、金属离子和添加助溶剂等条件对转化生成16α-羟基泼尼松龙能力的影响。结果:获得最佳转化培养基为葡萄糖10 g/L、可溶性淀粉50 g/L、蛋白胨10 g/L、黄豆饼粉25 g/L、磷酸二氢钾0.2 g/L、硫酸镁0.5 g/L硫酸锌0.5 g/L。在底物投料量5 mg/mL添加0.8 mg/ml PEG助溶剂的最优条件下,16α-羟基泼尼松龙的转化率达到了13.8%。结论:突变株Streptomyces roseochromogenes TS-58能有效地在泼尼松龙上引入16α-羟基羟基,为工业生产16α-羟基泼尼松龙奠定了基础。     

抗生素和干扰素

924355能产生曲张链菌素复合物的链霉菌种〔英万Vesse-linova,N.…了Folia Mierobiol一1901,56 (6)。一535~541〔译自DBA,1992,11犷11),92一06133〕 研究了链霉菌菌株1000的形态学、培养和生理生化特性及其抗生素的产生。在菌丝体和培养滤液中均产生抗生素一1011和一1012,4天后抗生素的生物合成达最大值(4 109/1)。菌株1。。o的变种1011能产生10oomg/1抗生素一1021,将之与亲本菌株10。。的生产水平(41mg/l)进行比较。经鉴定抗生素一1011为曲张链菌素。在相同培养条件下,2株链霉菌的产物组分有不同。菌株100。和壮观链霉菌(5.。户ec‘ab￡…     

疫苗

<正> 853255 由cDNA进行脊髓灰质炎3型病毒株的基因组的分子克隆:R N A杂种方法[英]/Stanway,G.…//Arch.Virol.-1984,81(1—2).-67～78[译自D B A,1984,3(20),84-09595]脊髓灰质炎Ⅲ型病毒的2个神经毒力     

固氮作用

<正> 852758 固氮酶钼铁蛋白和铁蛋白解离动力学停流的研究[会,英]/Thorneley,R.N.F.…//第五届固氮研究进展国际会议文集(Adv.Nitrogen Fixation Res.).-1984.-164[译自DBA,1984,3(21),84-10183]用停流分光光谱和电子自旋共振谱于23     

具抗菌活性海洋放线菌菌株JMC 06001的分离和鉴定

从湛江硇洲岛高盐泥样中分离到一株微嗜盐放线菌JMC 06001,该菌株的发酵产物具有很强的抗菌活性.菌株JMC 06001在多数培养基上生长良好,气生菌丝白色,基内菌丝淡黄色至浅棕色.在燕麦琼脂(ISP 3)、甘油-天门冬酰胺琼脂(ISP 5)、葡萄糖-天门冬酰胺琼脂及马铃薯浸汁琼脂上产生黄色可溶性色素,在酵母膏-麦芽膏琼脂(ISP2)、蛋白胨酵母膏铁盐琼脂(ISP6)和营养琼脂上产生棕色可溶性色素.生长温度范围为4℃～40℃,最适生长温度28℃.生长pH范围为6.0～9.0,最适pH 7.0.能在含0～1.5 mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长盐浓度为0.2～0.5 mol/L NaCl.根据其形态学特征、生理生化特征、细胞化学分类特征和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析结果,菌株JMC 06001被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的有效发表种波赛链霉菌(S.peucetius)的一个菌株.     

单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因在变铅青链霉菌中的高效表达及其稳定性研究

通过三步亚克隆 ,将单点突变葡萄糖异构酶 ( GIG1 38P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒p IJ40 83,构建重组表达质粒 p IJ40 83- GI1 .用重组质粒转化变铅青链霉菌 TK54原生质体 ,经硫链丝菌素抗性 ( Th R)筛选 ,获得重组菌株 TK54/p IJ40 83- GI1 .酶活力测定和 SDS- PAGE分析表明 ,GIG1 38P基因在变铅青链霉菌中得到高效表达 ,GI1粗酶液比活力为 1 5U/mg,GI1表达量约占菌体可溶性蛋白的 2 5% .同时也研究了重组质粒的遗传稳定性 .重组菌株在无选择压力条件下经液体连续传代培养 ,GI1比活力和 GI1表达量在 2 0 0 h传代时间中呈平缓下降趋势     

一株链霉菌菌株NCPC-1020中棘白霉素B脱酰基酶基因的克隆与功能分析

【目的】从一株土壤放线菌来源的野生型链霉菌菌株NCPC-1020中克隆一个具有棘白霉素B脱酰基酶活性的新基因。【方法】采用Degenerate和TAIL PCR两种方法,从链霉菌菌株NCPC-1020基因组中快速克隆获得了该基因序列,然后将基因在变铅青链霉菌TK24中进行异源表达,并进行全细胞催化底物脱酰基反应,采用LC-MS检测反应产物。【结果】LC-MS检测证实,棘白霉素B结构中脂肪链被酶促水解,从而证实该基因具有脱酰基酶活性。【结论】采用Degenerate以及TAIL PCR的方法能够快速获得未知功能的新基因。此基因的克隆,奠定了进行半合成棘白霉素类药物的研发基础。     

农杆菌介导生防棘孢木霉菌转化体系的优化

目的:实现棘孢木霉菌T4的遗传转化并优化其转化体系.方法:以潮霉素抗性为选择标记,利用农杆菌转化法介导转化棘孢木霉菌.结果:潮霉素基因成功整合到受体菌基因组中,转化子抗性基因可稳定遗传.结论:最优的转化体系和条件为:IM和CM培养基中AS浓度为200 μg/mL,棘孢木霉T4孢子浓度为106/mL,农杆菌浓度为200 μL( OD600约0.8),共培养时间为48 h,转化效率约为50个转化子/106个孢子.