全自动密闭式组织脱水机在石蜡切片组织处理中的应用

全自动密闭式组织脱水机问世以来,以其安全、高效和良好的处理效果等优点,深受病理学、解剖学、动物实验和组织胚胎等技术人员的青睐。我科自2002年使用全自动密闭式组织脱水机处理组织以来,组织的处理效果明显改观,石蜡切片质量显著提高,现将应用经验简介如下。材料和方法1·材料1·1标本组织来源于我院手术的活检标本。1·2仪器和设备樱花VIP-E150型全自动密闭式组织脱水机为日本原装进口,附带不锈钢脱水篮1只,可容150个包埋盒;塑料包埋盒为国产。1·3试剂冰乙酸,甲醛原液,95%乙醇,无水乙醇,二甲苯,石蜡(58-60℃)均为国产试剂。AAF固定…     

病理石蜡制片中试剂标准化操作的应用体会

近年来,随着经济的发展,蜡块制作由人工操作转向全自动密闭式脱水机的广泛使用,组织的固定、脱水、透明、浸蜡已进入恒温、恒湿化操作,有效地提高和稳定了病理制片的质量,但在各实验室石蜡HE制片中的试剂使用尚未统一实现标准化操作,影响了制作的蜡块质量稳定性。现将石蜡切片试剂标准化使用问题作如下探讨：     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

自动组织脱水机控制程序的编制与应用

自动组织脱水机 (Automated Tissue Processor)是为组织学标本的固定、脱水、透明及浸蜡所设计的一种全自动化处理仪器 ,集微机和机械为一体 ,采用全封闭的编程处理过程。此类仪器另设计有温度、真空压力循环、搅拌等参数 ,比机械式脱水机和手工脱水方法更能满足多种组织处理要求。为了使组织标本在整个过程中达到最优化的处理及考虑到实施质量控制 ,我们经过一个时期不断摸索 ,建立了一套适应日常外检工作需要的操作程序 ,介绍如下 :仪器的构成和参数我科采用 10 5 0型自动组织脱水机 ,该机可选择十道试剂和三道石蜡 ,可设置 1.脱水时间 …     

人胎肝组织制作蜡块脱水时间的探讨

目的:探讨人胎肝组织制作蜡块的适宜脱水时间.方法:应用16印象例不同发育阶段的人胎肝组织标本,通过HE石蜡制作技术进行探索性研究肝组织适宜的脱水时间.结果:人胎肝组织蜡块内组织浸蜡充分,与周围石蜡紧密相连.经HE染色后,在光镜下可见肝组织结构清晰,肝细胞形态完整.结论:人胎肝组织适宜的脱水时间是优质蜡块制作的关键环节.     

脂肪组织石蜡切片制作方法探讨

目的探讨脂肪组织石蜡切片制作方法,改善和提高其切片质量。方法将送检的脂肪组织切开固定于中性甲醛液中;取材后将标本放入脱水机中,调整脱水机设置程序,在常规方法的基础上适当增加组织再固定及脱水、透明时间;包埋时采取挤压组织等改进方法。结果通过改进和调整后制作的脂肪组织蜡块平整无塌陷,石蜡切片优良,厚薄均匀,完整,无空洞、无挤压、镜下组织结构完整清晰,细胞无挤压、重叠等现象。细胞形态清晰,着色均匀艳丽。结论通过上述方法的改进,能尽可能多地减少脂肪组织的脂滴,增加脂肪组织的硬度,使组织和石蜡能很好的融合在一起,有利于切出完整的厚薄均匀的石蜡切片,提高制片质量。     

几种实验动物组织石蜡制片的改进

根据多年教学经验 ,现将小鼠、大鼠、家兔等几种常见实验动物的石蜡制片的一些研究方法、出现问题及矫正方法做简要介绍。1)不同种属的动物组织 ,在脱水、透明、浸蜡时应尽量单独处理。有条件时同属的不同脏器组织最好也分批处理 ,以利于条件的掌握。2 )动物组织块较小、质地较细嫩 ,脱水时应从 5 0 %或 6 0 %乙醇较低浓度开始。据报道 ,脱水的低浓度酒精时间长短均可。低浓度酒精的时间应视材料的大小、被膜是否完整而定 ,各段时间不能操之过急 ,总的不能少于 3h。最好在 70 %酒精中过夜 ,否则在无水酒精中会引起组织骤然收缩 ,切片出现裂…     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

小肠腺三色染色法

我们采用三色染色的方法对小肠肠腺细胞进行染色,杯状细胞、潘氏细胞、胞质和肠腺基膜呈现三种不同的颜色。细胞形态清晰,对比鲜艳,收到了理想效果。材料和方法1·材料人小肠为手术切除新鲜标本。10%甲醛固定24-48h,常规脱水,石蜡包埋。2·方法石蜡切片厚4-6μm,切片脱蜡,蒸馏水洗2m in,复合染液染3-5m in,70%乙醇分色,蒸馏水洗1m in,阿利新蓝染5m in,蒸馏水轻洗;0·2%光绿复染胞质、肠腺基膜20s;70%盐酸乙醇分色;梯度乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。3·染液配制(1)复合染液:1%伊红(1g伊红,70%乙醇100m l)40m l,2%偶氮桃红(2g偶氮桃红甲…     

关于改革石蜡切片工艺的试验

众所周知,在石蜡切片的制作过程中,历来是用苯类(尤其是二甲苯)作为透明剂和石蜡的有机溶剂。组织块经酒精脱水后,必须再用二甲苯作为中间媒剂将酒精取代出来,然后才能进行透蜡。否则,虽然水分除尽,但组织内部积蓄酒精,石蜡仍难透入。同样,切片染色前和染色后,也需用二甲苯脱蜡和透明。因此,在整个制片过程中,不但要多次用到二甲苯,手续繁琐,而且组织块在二甲苯中浸渍时间较难掌握,久浸会使材料松脆,影响切片质量;时间不足又会影响透蜡效果。另外,苯类是有毒药品,且有致癌作用,对人体极为有害,国外组织学实验室     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法

石蜡包埋植物材料在去除石蜡之前的番红──快绿染色法染色步骤：ＦＡＡ固定液固定植物材料,乙醇一正丁醇系列脱水,植物材料呈透明体状态被包埋,切片厚度１０微米。用蛋白或明胶粘片剂粘贴蜡带,切片放在４０～４５℃烫板上烘干。不脱蜡直接进行染色,过程如下：（１）...     

三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析

研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA .     

乳腺恶性肿瘤标本固定方法比较

目的 通过对比3种乳腺根治术标本的取材方式和固定时间,摸索制备高质量乳腺根治术标本切片的最佳固定方法。方法 随机收集上午、下午接收乳腺根治术标本50例,上午每例标本各取一块肿物、腺体组织和淋巴结组织,固定9 h后放入脱水机;下午每例肿物、腺体和淋巴结各取2块,1块固定4 h后放入脱水机,另1块固定28 h后放入脱水机。各组织常规脱水、石蜡包埋、切片后,进行HE染色、E-cadherin酶标法免疫组织化学检测和Her-2荧光原位杂交染色。比较3种固定方法的制片质量,探讨乳腺根治术标本最佳固定方法。结果 固定4 h即开始脱水的肿物和腺体组织的切片不完整发生率显著高于固定9 h和28 h;固定4h和9h的淋巴结切片不完整发生率高于固定28 h;固定4 h、9 h、28 h肿物、腺体HE染色质量无明显差异,但固定9 h与28 h的肿物、腺体E-Cadherin酶标法免疫组织化学正常率高于固定4 h,固定28h淋巴结染色质量高于固定4 h与9 h;固定4 h肿物Her-2荧光原位杂交成功率低于固定9 h与28 h。结论 乳腺根治术标本的肿物与腺体固定9 h后即可放入脱水机,淋巴结则需延长固定时间...     

超声快速石蜡切片在脱落细胞学诊断中的应用

目的 探讨新型环保超声处理试剂配合超声快速组织处理仪应用于脱落细胞学诊断中的可行性.方法 收集湖北省中西医结合医院病理科2020年3月到2021年3月之间临床送检的胸水、腹水的脱落细胞学标本各30例.每例标本取材2块,同时进行超声快速石蜡处理(快蜡组)和常规石蜡处理(常规组).分别将其石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学...     

不同因素对包埋质量的影响

目的 改良包埋操作细节,以期提升包埋质量。方法 比较采用不同包埋模具温度、不同第一次注蜡量、冷台添加水与否、不同加盖包埋底盒方式、不同二次注蜡角度在组织包埋合格率、撬出蜡块甲级率、HE切片组织结构完整性、细胞显示效果、免疫组织化学染色效果的差异。结果 通过预热包埋模具至70℃、减少第一次注蜡量、在冷台上加入少量的水、待模具侧壁的石蜡稍凝固后再加盖包埋底盒、二次注蜡时将包埋模具连同包埋盒倾斜10°～25°等条件可显著提高包埋合格率、蜡块质量甲级率、切片组织结构完整性、细胞显示效果和免疫组化染色优良率。结论 通过在包埋过程中延缓或加速石蜡凝固,控制注蜡量、调整注蜡角度等可显著提升包埋质量。     

水稻籽粒胚乳的石蜡切片方法改良及其结构发育观察

以杂交水稻保持系‘岗46B’授粉后不同天数的籽粒为材料,利用PAS反应原理,通过对传统石蜡切片技术中材料固定、染色、脱水、浸蜡等环节的改进,即采用FAA和FPA相结合方式固定材料,先用热配法席夫(Schiff)试剂进行整染,再以稀释和氨水蓝化后的埃利希氏(Ehrlich)苏木精复染,中间以70%、83%、95%质量分数梯度乙醇进行脱水和复水处理,渐进式浸蜡与把握时间等实验环节,对水稻胚乳结构发育进行观察研究,结果授粉后第2~10天籽粒胚乳的石蜡切片完整,且染色分明,结构显示完整清晰。观察发现,随着授粉后天数推移,胚乳内部逐渐由游离胚乳核期向细胞化过渡,细胞层数增加并趋向充满子房,淀粉粒开始累积,胚乳细胞进一步增大。授粉后第5~10天是胚乳细胞淀粉粒从开始到大量累积的重要时期,同时胚乳细胞向无核化发展,不同部位胚乳细胞和淀粉粒的排列分布也逐渐表现出一定的差异。表明改良后的石蜡切片方法适合于授粉后第0~10天的水稻胚乳结构发育研究。     

美国红叶石楠的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　美国红叶石楠 (Photiniafrascri)。2　材料类别　顶芽。3　培养条件　诱导丛生芽培养基 :(1)MS +6 BA 1mg·L- 1(单位下同 ) +NAA 0 .5 +0 .6 %琼脂 +3%蔗糖 ;增殖培养基 :(2 )MS +6 BA 2 +NAA 0 .2 +0 .6 %琼脂 +3%蔗糖 ;生根培养基 :(3) 1/ 2MS +NAA0 .1+2 %蔗糖 +0 .6 %琼脂。培养基 pH值为 5 .8,培养温度为 (2 5± 1)℃ ,光照度为 15 0 0lx ,光照时间12h·d- 1。4　生长与分化情况4 .1　无菌材料的获得　取顶芽 ,洗净后用 70 %～75 %的乙醇处理 2 0s ,无菌水冲洗 2次 ,再用 0 .1%升汞灭菌 6～ 8min ,无菌水冲洗…     

翠菊的组织培养

1　植物名称　翠菊 (Callistephuschinensis)。2　材料类别　幼嫩茎段。3　培养条件　基本培养基为MS。 ( 1 )愈伤组织诱导培养基 :MS + 6 BA 1 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .2 ;( 2 )分化培养基 :MS + 6 BA 2 .0 +NAA0 .1 ;( 3)生根培养基 :MS +NAA 0 .1。上述培养基均添加 3%蔗糖、0 .65 %琼脂 ,pH 5 .8。培养温度2 5～ 30℃ ,光照度 30 0 0lx ,光照时间 1 2h·d- 1 。4　生长与分化情况4.1　初代培养　翠菊种子田间播种 ,1个月后取旺盛生长植株的幼嫩茎段 ,用自来水冲洗 30min ,在超净工作台上 ,用 70 %的乙醇浸泡 30s,再用…     

四株蜡蚧轮枝菌对桃蚜的侵染力及对其生殖力的影响

通过研究来自不同寄主的 4株蜡蚧轮枝菌菌株对桃蚜的侵染致死力、发病强度指数、以及对无翅成蚜生殖力及子代的影响 ,综合探讨病菌的侵染致病力及其潜力。试验 (2 4℃ ,10 0 % RH,5× 10 6孢子 /ml)结果表明 ,蜡蚧轮枝菌对无翅成蚜的侵染致死力和发病指数总体上是一致的 ,但二者在 4菌株间有明显差异 ,强弱依次为 VL FNL 95≥ VLNTV94 >VL ASA87>VLKTV79;对不同虫态 ,二者也有较大差异 ,对无翅成蚜明显高于有翅若蚜和 2～ 3龄若蚜。上述 4菌株对无翅成蚜的感染死亡高峰 ,依次为 4～ 5天、4～ 7天、4～ 8天和 5～ 9天 ,感染死亡分别为 84 .2 1～ 10 0 %、75.0 0～ 10 0 %、4 8.2 8～ 10 0 %和 2 9.6 3～ 77.78%。其中对 2～ 3龄若蚜 ,菌株间差异不很大。前 2个菌株 6天可达最高发病指数 ,虫体表面布满菌丝和分生孢子。与对照相比 ,可明显抑制无翅成蚜的生殖力。处理后 3天 ,产仔蚜量明显减少 ;4～ 5天锐减 ;8天种群产仔蚜量降低 39.59～ 4 8.37%。