中国仓鼠细胞和人胃腺癌细胞间期染色质凝聚的变化

染色体组在整个细胞周期中是连续存在的。但在光镜下观察,绝大多数真核细胞的间期核仅能见到网状的结构——染色质,只有当细胞进入有丝分裂期才出现凝聚和盘绕成棒状的染色体。然而,运用体细胞融合技术使有丝分裂的细胞和问期细胞相融合,将会导致间期核的染色质凝聚为染色体样的结构。1970年     

染色质凝聚与细胞凋亡

细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡方式。现已知体内多种组织的细胞通过凋亡途径实现自身代谢转变;如胚胎细胞、胸腺细胞、T和B淋巴细胞、晶状体细胞、肠上皮、乳腺上皮、前列腺上皮以及成纤维细胞等。细胞凋亡不但在个体发育、免疫细胞的增殖、分化、成熟等生理过程中具有独特的意义,而且对机体自身监测清除突变细胞和肿瘤细胞等方面也有重要     

高尔基体在人胃腺癌细胞诱导分化过程中的变化

MGc 80-3细胞高尔基体呈发育差、结构不典型状态,但经dBcAMP诱导后,细胞内高尔基体组数增多、分布集中、体积增大,高尔基囊数目增多、排列规则,囊的膜内颗粒增多、分布较为均匀,恢复为与其相应正常细胞相似、发育良好的典型高尔基体结构。这种变化不仅抑制了胃癌细胞的恶性分泌活动,同时对细胞表面成份的变化也起着一定的调节作用。认为高尔基体结构与功能向典型方向的转??变是癌细胞恶性表型逆转的一种重要表现,对于癌细胞由恶性向正常方向的分化具有重要影响。     

人胃腺癌细胞系BGC-823

1982年3月从手术切除的62岁男性胃腺癌标本,在体外培养生长80余代,细胞生长旺盛,形态呈单层重叠生长,命名为BGC-823。 BGC-823细胞表面具有HLA抗原性,以及染色体核型为人癌细胞染色体特征,从光镜     

人淋巴毒素基因在中国仓鼠细胞中表达

将人淋巴毒素(HuLT)基因插入哺乳动物细胞表达载体质粒p91023,经磷酸钙-DNA共沉淀法转入中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷型(CHO-DHFRˉ)细胞,获得了DIIFR 细胞克隆。RNA点渍杂交分析和MTT染料还原测定淋巴毒素的生物活性,均证明HuLT基因在DHFR 细胞里巳被转录和转译,并被分泌到细胞外。其杀伤靶细胞——L929细胞的生物活性不低于每毫升培养液200单位。     

正丁酸钠对人胃腺癌细胞染色体数目和DNA含量的影响

培养的人胃腺癌MGc 80-3细胞经过正丁酸钠处理7天后,生长抑制率达50.7%,约有90%的细胞形态发生分化,其超微结构亦有显著改变。而且,在染色体数目上,超二倍体细胞由对照组的78%增加到实验组的96%,超三倍体和超四倍体细胞则分别从6%和14%下降至2%。同时应用~3H-TdR放射自显影和福尔根细胞光度法测定未标记细胞(G_1期)DNA含量,结果显示实验组比对照组降低了。而且在实验组的同一制片中,未分化细胞DNA含量平均为超六倍体值(DI=3.67和3.56),其中90%的细胞超过6C;分化细胞DNA含量则平均为近四倍体值(DI=2.03和1.99),其中近60%的细胞少于4C。两者差异统计显著,表明形态分化的人胃腺癌细胞的遗传物质含量明显减少,但这些细胞并非就是正常二倍体细胞。     

正丁酸钠对人胃腺癌细胞染色体数目和DNA含量的影响

After treatment with n-sodium butyrate for 7 days, the inhibition of growth rate of human gastric adenocarcinoma cell (MGc 80-3) in culture reaches 50.7%. About 90% of the cancer cells treated with the drug undergo obvious differentiation, and their ultrastructure is also changed. Moreover, the cancer cells which have hyperdiploid chromosomes increase from 78% to 96%; on the contrary, the percentage of hypertriploid cells decreases from 6% to 2%, while that of hypertetraploid cells diminishes from 14% to 2%. By using the combination of 3H-TdR autoradiography and Feulgen cytophotometry to measure the cellular DNA content of unlabelled cells (G1), it is shown that the DNA amount in the experimental group is lower than that in the control group. Furthermore, the DNA content of undifferentiated cells in the unlabelled cells (G1) of the experimental group is hyperhexaploid in amount (D1 = 3.76 and 3.56), and about 90% undifferentiated cells have a DNA value of over 6 C. On the other hand, the differentiated cells in the unlabelled cells on the above same slide have near-tetraploid DNA values (D1 = 2.03 and 1.99), and a DNA content below 4 C is found in about 60% differentiated cells. The difference in DNA amount between these two categories of cells is statistically significant. The results mentioned above suggest that although the amount of genetic material in the morphologically differentiated cells has markedly decreased, these cells still do not represent normal diploid cells.     

改造中国仓鼠卵巢细胞

原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比,中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象,因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、细胞无限度增殖以及细胞凋亡等很多难题。所以除了在培养基、培养条件和表达载体方面下功夫优化该系统外,对CHO细胞本身进行改造已成为优化CHO表达系统的另一热点。      

三氧化二砷对人胃腺癌细胞株SGC-7901细胞核及线粒体作用的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As203)对人胃腺癌细胞株SGC-7901的生物效应及其对线粒体和半胱氨酸蛋白酶家族-3(caspase-3)的作用.方法:通过MTT比色实验检测不同浓度As2O3对该细胞株的生长抑制作用;经Hoechst 33258染色后用荧光显微镜观察细胞核的形态变化;经过细胞线粒体膜电位检测区分凋亡细胞与正常细胞,并经流式细胞仪分析;caspase-3吸光度检测法测定As2O3组caspase-3的活化程度.结果:As2O3明显抑制SGC-7901人胃腺癌细胞的生长,抑制作用的强度呈时间依赖性(方差分析,P<0.01);Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核固缩碎裂边集呈强蓝色荧光;线粒体膜电位检测法,流式细胞仪检测法,caspase-3吸光度检测法均检测到胃腺癌细胞的凋亡.结论:As2O3破坏线粒体跨膜电位和激活caspase-3活性可能是As2O3诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的重要机制.     

小麦细胞分裂间期外源染色质的检测

以野生种基因组ＤＮＡ为探针，用荧光原位杂交研究了间期细胞核里黑麦，中间偃麦草，燕麦和簇毛染色体在普通小麦背景下的行为，易位的黑麦１ＲＳ染色体襞在间期表现为不连续的线状杂交信号贯穿细胞核，代换和附加的１Ｒ染色体在间期却呈现点状杂交信号，通过易位进入小麦的中间偃麦草和燕麦染色体片段也是点状。     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体γ亚单位的影响

目的:了解Ach对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(nAchRs) γ亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上nAchRs γ亚单位的数量.结果:Ach使胃粘膜上皮细胞nAchRs γ亚单位的数量、数密度和面密度显著增加(P<0.01),但对胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位无影响.结论:胃粘膜上皮细胞nAchRSs对不同浓度的Ach反应性不同,胃腺癌细胞nAchRs γ亚单位对Ach的敏感性降低.     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞 N受体β亚单位的影响

目的:了解乙酰胆碱(ACh)对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(N受体)β亚单位的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上N受体β亚单位的数量、数密度和面密度的变化.结果:胃腺癌细胞N受体β亚单位数量、数密度明显高于而面密度低于胃粘膜上皮细胞(P＜0.05).10-6mol/L ACh使胃粘膜上皮细胞N受体β亚单位的数目、面密度和数密度增加(P＜0.01),该作用未被阿托品阻断.两种浓度的ACh对胃腺癌细胞N受体β亚单位未见显著性影响.结论:低浓度ACh使培养的胃粘膜细胞N受体失敏,但对胃腺癌细胞N受体β亚单位的作用不明显.     

中国仓鼠卵巢细胞表达新技术

中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）是基因工程药物生产的最佳表达系统之一,在生物制药中被广泛应用。传统的获得高表达CHO细胞株的方法费时、费力。近年来出现了一些CHO细胞高效表达新技术,它们从克服位置效应,提高基因转录效率、mRNA翻译效率及稳定性、筛选高表达细胞的效率等不同层次调控外源基因在CHO细胞中的高效表达。与MTX加压扩增基因获得高效表达外源基因的方法比较,能够节约时间、减少工作量,不易丢失高表达细胞株。     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞N受体α亚单位的影响

目的:了解Ach对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞烟碱型胆碱能受体(N受体)α亚单位数量的影响及两者间的差异.方法:采用免疫组化法检测培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞膜上N受体α亚单位的数量.结果:胃腺癌细胞N受体α亚单位数量、数密度明显高于胃粘膜上皮细胞(P<0.01).Ach使胃粘膜上皮细胞N受体α亚单位的数目、面密度和数密度增加(P<0.01),却使胃腺癌细胞N受体α亚单位数量及面密度减少(P<0.01).结论:Ach对正常细胞和肿瘤细胞的作用机制可能不同.     

小麦间期集缩染色质的超微结构研究

本文以普通小麦(Triticum aestivum L.)根端分生组织为材料,在透射电镜下对间期细胞核内的集缩染色质的高层次结构进行了研究。在其中观察到直径约为20—25nm、50nm及110—120nm 的不同等级染色线,并且发现直径110—120nm 的染色线是由50nm 的染色线组成的,而直径约50nm 的染色线是由20—25nm 的染色线组成的。对这三个层次染色质结构之间的集缩方式进行了讨论。     

斑马鱼胚胎细胞和中国仓鼠卵巢细胞远缘杂交融合条件的优化

以斑马鱼胚胎细胞(ZEM-2s)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO-k1)为实验材料,采用聚乙二醇(PEG)作为促融剂,从PEG的相对分子质量、浓度、作用温度和时间等方面进行单因子实验,以期寻找两种细胞融合的最佳条件。实验结果表明,融合的最适条件是融合温度为37℃,浓度为40%,分子量为2 000的PEG处理斑马鱼胚胎细胞和中国仓鼠卵巢细胞100sec,平均融合率高达25.3%,与未加入PEG的细胞相比,最佳条件下处理的两种细胞融合现象明显(p<0.05),表明该条件下的处理能够显著促进细胞的融合。     

人绒毛膜促性腺激素β—亚基在中国仓鼠卵巢细胞中…

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体,构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体,转染ＣＨＯ－ｈｆｒ＾－细胞后,挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ＾＋）细胞,结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达,不分泌到培养液中,通过氨甲喋（ＭＴＸ）加压后,表达量逐渐提高,０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０＾６细胞．２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣ     

人绒毛膜促性腺激素β－亚基在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体，构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体，转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞后，挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ－）细胞，结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达，还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤（ＭＴＸ）加压后，表达量逐渐提高，０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０６细胞·２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣＧ，其分子量与天然制品一致，放射免疫测定的免疫原性为天然制品的８４．９％。