石斛总RNA提取方法的研究

采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

大青杨叶片总RNA的快速提取方法

目的:寻求快速提取大青杨叶片总RNA的方法。方法:分别用改良CTAB法、改良SDS法、改良TRIzol法及某公司总RNA提取试剂盒提取大青杨叶片总RNA,并用紫外光谱分析、凝胶电泳方法对提取的总RNA进行鉴定。结果:用改良CTAB法和改良TRIzol法能有效地去除蛋白及多糖,提取到的总RNA纯度高,D260nm/D280nm分别为2.05和1.78,RNA的完整程度优于试剂盒法。结论:改良CTAB法为大青杨叶片总RNA的最佳提取方法。     

甜菜单体附加系M14的RNA提取方法比较

目的:对甜菜无融合生殖单体附加系M14品系的叶和花总RNA提取方法进行对比,消除其提取产量低、RNA降解、DNA干扰、多糖干扰、蛋白质干扰和杂质干扰等缺陷.方法:采用6种方法进行RNA提取分析.结果:在RNA提取过程中加入约1/3倍体积柠檬酸钠等除糖剂,能够有效去除多糖干扰,大大提高所提RNA的质量.获得最佳RNA提取方法.     

两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较

目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Vira lRNA Min iKit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus,MNV）的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT—PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAampViralRNAKit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。     

一种高效提取杨树发病树皮总RNA的方法及应用

对杨树发病树皮总RNA的高效提取是开展杨树抗溃疡病基因表达调控的基础,为了探讨杨树发病树皮RNA的高效提取方法,本研究以欧美杨细菌性溃疡病菌侵染后的‘中林46’杨为材料,比较了包括本研究提出的RNA提取新方法（RNA试剂盒改良法）在内的6种方法提取的总RNA的质量和浓度。结果显示,通过RNA试剂盒改良法提取的总RNA 28S rRNA条带亮度约为18S rRNA条带亮度的2倍且浓度高,表明该方法更适合感染欧美杨细菌性溃疡病的‘中林46’杨发病树皮总RNA的提取。为了验证RNA试剂盒改良法对健康杨树树皮及不同胁迫处理、组织RNA提取的适用性,进一步用该方法提取了‘中林46’杨、‘107’杨、‘北京’杨健康树皮,低氮、低磷处理的毛白杨组培苗以及白玉兰花的总RNA。结果表明,用RNA试剂盒改良法均能获取高质量的总RNA。所提取的总RNA已成功用于感染欧美杨细菌性溃疡病的杨树树皮转录组测序,以及低氮处理的毛白杨组培苗RT-PCR和荧光定量PCR实验,表明用RNA试剂盒改良法提取的总RNA可以用于后续分子实验。     

柠檬总RNA提取方法研究

为了获得高质量的柠檬RNA,本研究从操作时间、成本、所得RNA的纯度与浓度等方面比较了5种方法提取香水柠檬不同组织总RNA的效果,并筛选最适合提取柠檬组织样品RNA的方法。结果表明:改良的RNA试剂盒提取法效果最好。该方法极适合提取香水柠檬总RNA。利用此方法可以成功提取白花柠檬、广西土柠檬和金柑的总RNA,也可以提取高质量的芒果总RNA。     

一种高效经济的高质量植物RNA提取方法

建立了一种高效经济的植物RNA提取方法.在提取缓冲液中加入蔗糖、氯化钾和镁离子以提供对RNA分子的保护.破碎后的细胞于提取缓冲液中裂解后,用酚/氯仿变性并去除内源RNA酶和其他蛋白质,而后用pH 5.6 的NaAc沉淀RNA.用该方法提取RNA的得率较高,经电泳检测,RNA的完整性很好.RNA印迹分析和RT-PCR也都得到很好的结果.该方法还使实验成本大大降低.     

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较.结果表明,Trizoi法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法.     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.     

一种适用范围广的总RNA提取方法

介绍一种RNA提取方法,该方法以SDS、氯仿和Tris苯酚为主要提取试剂,以LiCl和乙醇为RNA沉淀试剂。分别以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛（昆虫）、酿酒酵母和白腐菌（真菌）为RNA提取材料,用该方法成功地提取出了它们的总RNA。获得的RNA条带清晰,A₂₆₀/A₂₈₀ 在1.8以上。通过对LiCl和乙醇沉淀RNA的效果分析表明,该方法可在10 min内完全沉淀RNA,同时也可以同时获得纯度较高的DNA。提取的RNA质量可满足cDNA文库构建,基因芯片探针标定和RT-PCR等对RNA质量要求较高的分子生物学操作,说明这是一种应用范围广的RNA提取方法。     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。     

从血液中提取总RNA的一种快速高效方法

血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA .     

用改良CsCl密度梯度离心法提取石蒜叶片和鳞茎总RNA

石蒜[Lycoris radiata（L’Her．）Herb．]是重要的药用植物,其次生代谢产物加兰他敏（galantamine）在临床上的应用非常广泛,是治疗阿尔茨海默氏病的首选药物之一。尽管有关加兰他敏化学合成途径已有许多报道,但由于纯化学合成的成本太高,目前仅限于实验室合成,尚不能用于工业化生产。提高石蒜本身的加兰他敏含量是获得加兰他敏最为经济和环保的方法。因此,研究加兰他敏生物合成的分子机制对于提高其含量具有重要意义。     

一种用矽石快速提取总RNA的方法

根据矽石能与核酸结合的特性,建立了用矽石提取细胞和组织总RNA的方法,方法简便、快速,所得RNA适用于各种研究。     

Introduction of ribonucleic acids into cells by means of liposomes.

A method of ultramicroinjection of nucleic acids into cultured cells by means of liposomes is described. Messenger RNA, ribosomal RNA and transfer RNA were entrapped in large unilamellar liposomes and subsequently the liposomes were fused with cells. The uptake of RNA by the cells was stimulated 6--8 times by our method. Possible applications of microinjection of RNA by means of liposomes are discussed.     

RNA extraction from human articular cartilage by chondrocyte isolation

We report an optimized method for RNA extraction from human articular cartilage that does not require the use of specialized equipment or column purification. To maximize RNA yield while minimizing degradation and contamination, chondrocytes are isolated from the extracellular matrix and the traditional TRIzol protocol is modified to include two RNA-DNA-protein phase separations. We compared RNA extracted using this modified method with the traditional TRIzol method by spectrophotometry, Bioanalyzer, and real-time polymerase chain reaction (PCR). With the modified method, RNA recovery is increased by nearly 1μg per 100mg of cartilage, and RNA integrity number (RIN) is improved from 2.0 to 7.5.     

An effective method of completely removing contaminating genomic DNA from an RNA sample to be used for PCR

A simple method for removing contaminating genomic DNA from an RNA preparation is presented. The method involves digestion of the RNA with RNase-free DNase I at room temperature followed by inactivation of the enzyme at 65°C in presence of EDTA. This method produces an RNA sample that is negative for genomic DNA by PCR.