高盐沉淀CTAB法提取温室菊花基因组DNA

根据温室菊花植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对CTAB法加以改进:在待沉淀液中加入1/2体积5 mol·L～NaCI.改进后的方法获得的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰.以提取的DNA为模板,用一对引物扩增菊花中18S基因,得到条带单一,大小与已知一致,说明获得的DNA可以进行PCR扩增,EcoR I 酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以满足相关的分子生物学研究.     

四季桔试管苗基因组DNA微量提取方法

本试验以四季桔试管苗为试材,进行基因组DNA微量、快速提取方法的研究。结果表明:采用改良CTAB法,仅需20mg样品、2.5h就能获得高纯度、高质量的DNA,这是目前木本植物样品量最小的DNA提取方法;提取的DNA能直接被限制性内切酶BamHⅠ酶切,也能进行PCR扩增,可用于进一步的分子生物学研究。     

猕猴桃干叶片DNA的提取及叶绿体基因PCR-RFLP反应

采用CTAB法猕猴桃干叶片提取总DNA,运用PCR技术扩增出rbcL和psbA两个叶绿体基因片段,分别用两种限制性内切酶对它们进行酶切分析,实验结果表明,当CTAB提取液体积数为750ul,猕猴桃叶片质量为10mg时,所得到的猕猴桃DNA的质量较为理想：DNA模板量为250ng时,扩增到的特异性条带明亮,无拖尾,2个基因的酶切结果共得到25个限制性位点,其中24个具有多态性,为从cpDNA水平探讨猕猴桃属植物的系统发育打下了坚实的基础。     

改良CTAB法提取番石榴叶片总DNA

目的:从番石榴叶片中快速提取高质量的总DNA。方法:改良CTAB法。主要改进之处在于不用液氮,而是直接研磨硅胶干燥样品;用高浓度CTAB、低浓度乙醇与NaCl盐析相结合等方法去除多糖。结果:应用改良后的方法可以快速提取番石榴叶片总DNA,有效去除组织中的多糖、蛋白质,抑制提取过程中的组织褐变。提取的DNA可用于限制性内切酶酶切和PCR扩增。结论:传统CTAB法经过改良,可用于快速提取番石榴高质量DNA。     

蒙药材阿给(小白蒿)基因组DNA的提取

为获得能用于蒙药材阿给（小白蒿）RAPD分析及其他分子生物学研究的高质量DNA,选用经典的CTAB法、改进的CTAB法和高盐低pH法提取DNA,研究和改进几种DNA提取法。由于蒙药材含有大量的多糖和酚类物质,改进法对样品进行了预处理：先将样品与PVP和VitC共研碎,再用Tfis—HC1缓冲液洗涤样品,离心的沉淀用于进行下一步操作。通过电泳、紫外吸收A260nm／A280nm和PCR扩增检测所得DNA的产量和质量。结果表明,改进的CTAB法和高盐低pH法都能获得高质量的DNA进行PCR扩增,其中以改进的CTAB法效果最好。     

大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定.结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81.与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质.综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法.     

一种简单、快速的苏云金芽胞杆菌基因组DNA提取方法

从培养时间、裂解溶液、抽提和沉淀时间等方面对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因组DNA提取技术进行改进.提取8株对蛴螬有杀虫活性的野生Bt菌株的基因组DNA,分析其纯度,并进行PCR分析与酶切分析.试验结果表明,新的提取方法耗时36 min,明显短于旧方法所用时间(97 min);两种方法提取的基因组DNA A260/A280均大于1.8,无明显区别;琼脂糖凝胶电泳结果显示,上样量相同时,新方法提取的基因组DNA浓度是旧方法的5倍以上;新方法提取的基因组DNA能作为模板灵敏地扩增出测试基因,所提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,证明DNA具有很高的纯度.本研究改进的基因组DNA提取方法耗时短、产量高,并能满足PCR扩增、酶切等分子生物学需要.     

微量植物样本的DNA提取方法研究

为建立一种适于法庭科学实践的植物物证DNA提取优化方法,以期获得高质量的适于PCR分析的模板DNA.用8种方法从不同植物的干叶片中提取DNA,利用线粒体DNA非编码区的PCR扩增结果分析评价提取DNA的质量.结果表明8种DNA提取方法所提取的DNA都可以获得线粒体DNA非编码区的PCR扩增产物,对照紫外波长扫描结果显示,以改进的CTAB方法制备的模板DNA纯度最高,可达到进口试剂盒同等制备精度,OD260/280稳定在1.7～1.9之间.因此改进的CTAB方法适用于微量植物样本的DNA提取,可应用于法庭科学实践.     

一种改良的启动子序列克隆的染色体步查法

利用染色体步行法,从已知DNA序列克隆侧翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所选用的特定限制性内切酶对目标基因组不能酶解成合适大小的片段,因而受PCR扩增能力的局限,往往扩增不出有效产物. 针对这一点,这里我们介绍一种简单有效的改良方法,它包括以下步骤：首先用不同的限制性内切酶(包括平末端和粘性末端) 酶解目标基因组DNA,接着,选择能将基因组酶切成弥散、分布均匀的限制性内切酶,如DraⅠ和HindⅢ,合成相对应的接头;然后,选择弥散的、分布均匀的限制性内切酶的酶解产物,构建成含相应接头的基因组DNA文库,用作PCR的模板;最后,用接头引物和特异引物,通过巢式PCR扩增目的片段,获得了理想的扩增效果.采用改进后的染色体步查法,有效地从较复杂的棉花核DNA中克隆出6个棉花启动子序列.     

利用CTAB法和子囊孢子破壁法提取冬虫夏草菌DNA

通过CTAB法从冬虫夏草菌株和天然冬虫夏草不同部位提取DNA,并用PCR扩增进行验证,证明了CTAB法适合从冬虫夏草子座、菌核和冬虫夏草菌培养物中提取DNA。首次报道1种将子囊孢子破壁直接进行PCR扩增的方法,并比较了该方法和CTAB法在提取冬虫夏草DNA方面的差异。2种方法获得的DNA用于PCR扩增均能得到较好的结果。     

毛桂和少花桂叶精油的化学成分

湖北省鄂西自治州产毛桂和少花桂叶精油,分别使用Finnigan-4510型毛细管气相色谱/质谱/电子计算机联用(GC/MS/DS)方法进行了化学成分分析。从毛桂叶精油中共检出61个成分,鉴定了其中21个化合物,占精油总量的76.39%,主要成分为1,8-桉叶油素(37.02%)和乙酸龙脑酯(16.24%)。从少花桂叶精油中共检出60余个成分,鉴定了其中33个成分,占全精油的77.85%,含量较高的有α-蒎烯(9.09%)、1,8-桉叶油素(8.27%)、香叶醇(6.03%),香叶醛(5.90%),乙酸香叶酯(4.94%)和黄樟油素(4.43%)等。     

关于油樟叶芳香油化学成分的研究

用毛细管气相色谱——质谱——计算机联用技术、毛细管气相色谱保留指数和毛细管标准品叠加法分析了油樟Cinnamomum lonoepaniculatum叶芳香油的化学成分。从分离出来的49个色谱峰中鉴定出了28个成分,其中主要成分是1,8—桉叶脑(58.55%)、α—萜品醇(15.43%)、香桧烯(14.16%)等。     

台湾牛樟总RNA提取方法的建立

以牛樟Cinnamomum kanehirae根、茎、叶为材料,在RNAprep Pure Plant Kit (Polysaccharides & Polyphenolics-rich)方法的基础上进行改良,建立台湾牛樟总RNA的提取方法。经琼脂糖凝胶电泳、Nanodrop和Aglient 2100检测发现,牛樟根、茎、叶所得RNA的28S和18S比值介于1.7～2.1之间,RNA完整性较好,浓度均在50 ng·μL-1以上,RIN值均大于7。该方法提取的RNA纯度、浓度和完整性均合格,可满足后续分子生物学实验要求。     

樟树水浸液的灭螺效果

研究了新鲜樟树的茎皮、根皮和叶的水浸液对钉螺的杀灭效果。结果表明：通过一定时间的处理,樟树水浸液对钉螺有明显的毒杀作用。其中,0．5％以上的茎皮和根皮的水浸液对钉螺具有35％-100％的毒杀作用;处理时间在72h时,死螺率可达80％-100％。0．5％的樟树根皮水浸液浸泡72h时,死螺率为95％;1％的樟树根皮水浸液浸泡72h时,死螺率为100％。当用同种水浸液浸泡时,钉螺死亡率随水浸液浓度的增加而升高;随着浸泡时间的延长,钉螺的死亡率也升高。     

中国及越南樟科植物新评注

<正> 作者近年来在编写《广西植物志》工作中,对本所收藏的樟科植物标本作了清理,同时也把编写《中国植物志》时搁下的一些疑难标本作了进一步研究,现将结果在本文中报道。所引用的标本,均存本所标本室。     

锡兰肉桂的化学成分

从锡兰肉桂中分离获得 7个化合物 ,经光谱测定 ,鉴定了其化学结构分别为 :丁香酚 (1) ,大豆脑苷Ⅰ (2 ) ,大豆脑苷Ⅱ (3) ,GingerglycolipidB(4) ,GingerglycolipidC (5 ) ,1 O Hexadecan oyl 2 O (9Z ,12Z octadecadienoly) 3 O [α D galactopyranosyl (1″ 6′) O β D galac topyranosyl]g lycerol(6 ) ,(2S) 1 O (9Z ,12Z octadecadienoly) 3 O β D galactopyranosylgl ycerol(7)。均具有不同程度的抗PAF活性。     

香樟酪氨酸酶对NAA诱导的响应及其生化性质研究

以离体香樟叶片和果实为材料,研究了萘乙酸(NAA)处理对其中酪氨酸酶及其同工酶活性的影响,并对香樟果实中酪氨酸酶进行分离纯化,初步分析了该酶基本生化特征.结果表明:(1)10μmol·L-1NAA处理对香樟叶片同工酶TYRL2有较强的激活作用,对同工酶TYRL1有抑制作用,1.0和0.1μmol·L-1浓度的NAA对同工酶TYRL3有激活作用;(2)在香樟果实的酪氨酸酶同工酶中,TYRF1的活性最高并在果实成熟过程中逐渐增强,100μmol·L-1的NAA对果实成熟以及酪氨酸酶的酶活性都有一定的促进作用;(3)经纯化的香樟果实酪氨酸酶最适pH值为7.5,最适温度为50℃,亚基分子量为43KDa;以L-DOPA为底物时的Km为12.82mmol·L-1,Vmax为80.65U·mg-1蛋白;其在酸性(pH4~7)和高温(40~70℃)条件下较稳定.可见,不同浓度的NAA对香樟叶片和果实中的酪氨酸酶活性有不同程度的激活和抑制作用.     

樟树核糖体失活蛋白在种子成熟过程中的动态变化与特性

樟树种子中存在着ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ两种新的核糖体失活蛋白,电泳分析与Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交结果表明ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ在９、１０、１１月份种子中的含量分别是８．９％,２６．８％和１１．５％,以１０月份种子的含量为最高。ｃａｍｐｈｏｒｉｎ的含量则分别为１．７％,２．５％与４．６％,随着种子的成熟而不断增加。８月份的幼嫩种子中检测不出ｃｉｎｎｍａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ．这表明樟树核糖体失活蛋白的表达受到了发育进程的时态调控．樟树叶片中可能不存在ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ,即两者的合成似乎具有一定的组织特异性．ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ均为糖蛋白。     

脱油油樟叶提取物的体外抑菌活性研究

探讨了油樟叶提取挥发油后的残渣的乙醇浸膏和乙醇浸膏的石油醚萃取相、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水萃取相对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等三种常见致病菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)以及抑菌曲线.结果显示,各提取物对大肠杆菌的抑菌活性为正丁醇萃取相(MIC、MBC:7.813、15.625 mg/...     

Induction of apoptotic but not autophagic cell death by Cinnamomum cassia extracts on human oral cancer cells

Cinnamomum cassia has been widely studied in different fields to reveal its antidiabetic, antidepressive, antiviral, anti-inflammatory, antiosteoporotic, and anticancer effects. Its antimalignant activities have been explored in lung cancer, breast cancer, colorectal cancer, and even oral cancer, but the detailed signaling mechanism and effects of this plant on animal models need to be clarified. In the current study, C. cassia extract (CCE) was used to investigate the antitumorigenesis mechanism in vitro and in vivo. The major constituents of CCE used in this study were coumarin, cinnamic acid, and cinnamic aldehyde. CCE reduced the viability, number, and colony formation of human oral cancer cells, and induced their apoptosis. Caspase-3 activation, Bcl-2 reduction, and phosphatidylserine inversion were involved in CCE-stimulated apoptosis. CCE also enhanced the expression of autophagic markers, including acidic vesicular organelle, microtubule-associated protein 1 light chain 3-I, autophagy-related protein 14, rubicon, and p62. The combined treatment of CCE and caspase inhibitor significantly restored mitochondrial membrane potential (Δ ψ _m) and cell viability. However, the combined treatment of CCE and autophagy inhibitor further reduced the cell viability indicating that autophagy might be a survival pathway of CCE-treated SASVO3 cells. In contrast, CCE treatment for 12 days did not adversely affect SASVO3 tumor-bearing nude mice. CCE also elicited dose-dependent effects on the decrease in tumor volume, tumor weight, and Ki-67 expression. These results suggested that CCE showed the potential for the complementary treatment of oral caner.