植物激素研究中的遗传学和分子生物学方法

综述了植物激素突变体的遗传分析、植物激素作用基因及其转基因技术和反义基因技术在植物激素生物生成、生理作用和作用机理研究上应用的研究进展。     

反义基因治疗

除了反义核酸和核酶外,最近又发展了一种新型的反义药物———反义肽核酸(PNA)。反义治疗的经典策略是阻断异常基因的表达;随着研究的深入,又发现了以反义药物调整基因表达比例(即调控基因治疗)的反义治疗途径。本文对反义基因治疗的策略、反义药物的设计及稳定性等方面的新思路和该领域的发展与应用前景作了概括介绍。     

反义基因治疗

除了反义核酸和核酶外,最近又发展了一种新型的反义药物－反义肽核酸（ＲＮＡ）。反义治疗的经验策略是阻断异常基因的表达;随着研究的深入,又发现了以反义药物调整基因表达比例（即调控基因治疗）的反义治疗途径。本文对反义基因治疗的策略,反义药物的设计及稳定性等方面的新思路和该领域的发展与应用前景作了概括介绍。     

反义基因操作及反义分子的设计原则

和突变不同,反义基因操作能在不破坏目标基因的前提了调控基因的表达。因此,它既是阐明基因功能的新手段,又拓宽了通过基因工程改变植物品质和治疗疾病的途径。受天然反义RNA调控机理的启示,人们已能设计出更有效的人工反义分子。     

反义RNA在基因调控中的作用

反义RNA是指与靶RNA具有互补序列均调节RNA,它通过与靶RNA的碱基配对而起负调控作用,转录产生反义RNA的基因称为反义基因。 向1981年Tomizawa等首先报道了反义RNA在质粒ColEl DNA复制中的调控作用以来,这方面研究进展较快。     

抗病毒基因治疗的新技术

以转基因置换和靶基因表达为特征的基因疗法,在某些遗传疾病和恶性肿瘤的治疗中已显示良好的前景.近年来,病毒基因治疗的研究也取得了很大的进展,除了反义基因治疗、基因疫苗、显性失活突变体、单链抗体外,还出现了如RNA干扰等新的基因技术.本文就病毒性疾病基因治疗的策略及研究现状进行综述.     

特异性启动子调控甜瓜ACC氧化酶反义基因载体构建及对烟草的转化

以甜瓜ACC氧化酶反义基因抑制水果成熟过程中内源乙烯的合成为基础,建立甜瓜特异性启动子调控下ACC氧化酶反义基因表达载体。以pCB-ACO1载体为基础,进行平末端连接加入特异性启动子pCAM-ACO1-promoter,对转基因甜瓜表达载体的构建进行特异性启动子的研究,通过叶盘法转化的烟草经过PCR检测已转入含有特异性启动子promoter调控下ACC氧化酶反义基因表达载体,为下一阶段用该反义基因载体转化甜瓜栽培品种奠定基础。     

反义RNA及其在植物基因工程领域的应用

随着反义RNA的发现及对其研究的深入,反义RNA技术已被广泛应用于基因调控的研究中。本介绍了反义RNA的概念,并就反义RNA的作用机理和在植物基因工程领域的应用进行了综述。其作用机理包括：在原核生物中反义RNA与引物RNA前体及mRNA分子5′的不同区域进行互补,从而抑制其复制、转录和翻译;在其核生物中反义RNA影响mRNA前体拼接、转移及mRNA分子5′和3′正常修饰。在植物基因工程领域,反义RNA主要应用于抑制果实成熟、抗病、作为反向筛选标记基因、控制花色、控制淀粉合成、控制油料种子中脂肪酸的合成、控制雄性不育等方面。     

高温胁迫对转反义LeGPAT番茄PSⅡ光化学活性的影响

以冷敏感植物番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)为材料,研究高温胁迫下转反义番茄甘油-3-磷酸酰基转移酶基因(LeGPAT)的番茄叶片膜脂含量、光合速率、荧光参数和叶黄素循环等的变化,以探讨LeGPAT表达与番茄植株耐热性的关系.结果表明:转反义基因株系磷脂酰甘油(PG)的饱和脂肪酸含量(16∶0+16∶1+18∶0)显著高于野生型;但不饱和脂肪酸含量(18∶1+18∶2+18∶3)却显著低于野生型.在45℃高温处理过程中,野生型和转反义基因的番茄植株净光合速率(Pn)、暗中最大光化学效率(Fv/Fm)和实际光化学效率ΦPSⅡ都显著降低,但野生型番茄降低幅度更大;同时野生型和转反义基因株系的非光化学猝灭(NPQ)及叶黄素循环脱环氧化状态(A+Z)/(V+A+Z)都增加,但反义株系比野生型增加更明显.研究发现,转基因番茄植株LeGPAT的表达被抑制,其饱和脂肪酸含量升高,而不饱和脂肪酸含量降低,高温胁迫下PSⅡ受到的伤害较轻光化学活性更高,植株抵抗高温的能力更强.     

猪瘟病毒反义基因在培养细胞上的效应研究——反义基因对猪瘟病毒的抑制作用

应用免疫荧光抗体技术检测了整合有猪瘟病毒反义基因的PK-15细胞克隆对猪瘟病毒的抑制效应。结果表明,五个不同的反义基因片段对猪瘟病毒的抑制效率存在很大差异,其中A片段的抑制效率最高(94％～98％),B片段次之(58％～76％),C片段再次(～64％),D片段和E片段未见明显的抑制效应。抑制效率的差异可能与反义基因片段的位置、长短以及反义RNA表达质粒载体的差异有关。