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用地高辛标记探针在人染色体上进行了基因定位。使用了酶显色和荧光显色,两者得到了相同的定位结果,特异区阳性率分别为11.6%和19.8%’荧光显色特异性较高,说明基因定位效果受显示系统效率的影响,地高辛标记探针用于基因定位有比放射性探针、生物素探针更多的优越性。又讨论了几个影响效果的因素,提出以SDC代替甲酰胺洗涤;紫外照射于杂交前R显带方法能取得较好的基因定位效果。 相似文献
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热启动PCR快速制备地高辛标记探针 总被引:7,自引:0,他引:7
介绍了一种在热启动PCR中,以Dig-11-dUTP部分代替dTTP,从少量基因组DNA中快速制备大量的地高辛标记的探针的方法,此探针灵敏度达0.03pg,并只和相关的DNA特异杂交. 相似文献
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地高辛标记探针在Southern杂交分析中的技术要点 总被引:3,自引:0,他引:3
外源基因是否成功导入受体材料的基因组中 ,必须从转化植株中找到分子生物学的检测证据。目前 ,PCR、Southern杂交等作为常用检测手段而被广泛采用。虽然 PCR技术可以快速得到结果 ,但是 ,以农杆菌介导的材料必须慎重这一结论 ,以免由于农杆菌污染造成假阳性。而 Southern分析由于操作程序繁琐 ,对植物基因组DNA的提取、纯化、酶切等技术要求较高 ,有时使杂交结果不甚理想。我们在植物基因转化的研究中 ,对荞麦 ,桑树 ,紫景天 ,洋麻等基因组 DNA的提取、纯化、酶切进行了探讨 ,对流程中的有关步骤进行技术改良 ,使酶切后的 PNA在凝胶… 相似文献
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地高辛标记探针电镜原位杂交技术探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
应用LowicrylK4M低温包埋,Dig标记c-foscDNA探针对人肝癌组织进行原位杂交,用金标抗Dig抗体进行检测,银增强放大信号处理。电镜观察表明,免疫胶体金颗粒特异性地标记在肝癌细胞胞浆及核内,呈散在分布,金颗粒大小基本一致,背景清晰。 相似文献
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用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗,重组(CHO细胞)乙肝疫苗,出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,可用于上述生物制品中残余DNA含量的检测。 相似文献
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为制备用地高辛精(Digoxigenin,Dig)标记的酶氨酸羟化酶(TyrosineHydroxylase,TH)RNA探针,本研究用分子生物学技术重组质粒PGEMTHI,即分别将携带T7和Sp6启动子的PGEM-3zf质粒和携带TH基因的PKSTH质粒用限制性内切酶消化并行分离纯化,得到带T7和sp6启动子的DNA片段和TH基因片段;经T4DNA连接酶连接后转入大肠杆菌,得到pGEMTH1重组克隆。经小量提取质粒井用酶切分析检测,证实其确有TH基因且方向正确。将此质粒再经限制性内切酶消化则得到线状DNA片段,用T7RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链RNA探针;经斑点杂交试验证实该探针具有较高的可靠性。这将为基因治疗帕金森氏病动物模型的疗效检测提供有效手段。 相似文献
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PCR法制备地高辛标记探针改良PCR-Select Differential Screening试剂盒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨采用地高辛(digoxin,DIG)标记探针替代PCR-Select differential screening试剂盒中同位素标记探针的方法.方法:抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)所分离的差异表达序列转移至硝酸纤维素膜,以PCR法掺入DIG-11-dUTP制备探针,按DIG标记探针常规操作进行杂交显色,杂交阳性结果采用reverseNorthern blot再度杂交验证.结果:应用DIG标记探针改良PCR-Select Differential Screening试剂盒所得到的阳性结果经reverse Northern blot验证符合率达到90%.结论:DIG标记探针改良PCR-Select differential screening试剂盒在避免了放射污染同时具备很高的特异性,完全可以替代同位素标记探针. 相似文献
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用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;、同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛素标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性 相似文献
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一种从鱼类卵巢制备地高辛标记mtDNA探针的简易方法 总被引:5,自引:1,他引:4
一种从鱼类卵巢制备地高辛标记mtDNA探针的简易方法*ASIMPLEMETHODFORGETTINGDIGOXIGENINLABELINGPROBLEOFmtDNAFROMOVARYOFFISH关键词鱼类,线粒体DNA,地高辛标记KeywordsFi... 相似文献
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目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。 相似文献
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地高辛标记探针检测重组人干扰素β_(1b)中DNA残留量 总被引:1,自引:0,他引:1
为检测注射用重组人干扰素β1b半成品中外源性DNA残留量,以重组人干扰素β1b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,并以此探针进行点杂交。结果证明,该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素β1b制备过程中的质量监控及半成品的检定。 相似文献
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PCR制备地高辛素标记的探针检测轮状病毒核酸 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了轮状病毒第9基因部分片段的地高辛标记的cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针具有轮状病毒A组的特异性,可检出10pgHRV-RNA。实验中选择了粪便标本提取核酸后点膜和粪便上清直接点膜进行斑点杂交,两种方法的结果一致;同时将斑点杂交法与PAGE法的结果进行了比较。实验结果表明用PCR技术直接制备地高辛索标记的cDNA探针具有方便、快速、标记率高、特异性强的特点,具有一定的应用前景。 相似文献
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地高辛标记反意RNA探针检测脑组织切片生长抑素mRNA 总被引:2,自引:0,他引:2
本实验采用含大鼠生长抑素基因的pSP65cDNA质位通过转化至噬菌体内大量扩增,经提取,纯化后,用限制性内切酶进行酶切使质枝线性化,并将其作为模板,用地高辛(DigoxigeninDig)作为标记物,体外转录合成生长抑素反意RNA(cRNA)探针。实验动物选用wistar新生大鼠。冰冻切片,端、间脑切片经杂交前用Dig-UTP标记的cRNA探针杂交,杂交后用抗Dig-碱性磷酸酶复合物进行酶联免疫反应。X-磷酸盐-NBT显色。结果显示新生大鼠脑内生长抑素mRNA神经元着紫蓝色。杂交反应物集中于核周的胞浆及短小的突起内。胞核不着色。胞体轮廓清晰,周围背底浅淡。结果表明Dig标记cRNA探针不仅具备非同位素标记探针的优点而且能快速和准确检测组织细胞内mRNA的表达。 相似文献
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在基因探针制备过程中,常通过琼脂糖电泳分离目的DNA片段和载体,然后采用电洗脱、冻融等方法回收并纯化目的片段,再作同位素或非同位素标记。为减轻非特异性本底,往往还需要分离出标记探针,以去除游离标记物,整个过程比较繁琐费时。我们在工作中尝试了一种简便的方法,将探针的制备、回收、纯化 相似文献
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随着现代生物技术的发展 ,核酸杂交技术已成为分子生物学和细胞生物学领域中研究基因及其表达的重要手段。其中 ,原位杂交技术能对生物体整个基因组中单一的基因拷贝或其转录物进行探测 ,能从染色体组数百万个核苷酸序列中识别某个基因的转录物以了解基因的表达状态及表达情况 ,从而在基因定位、细胞分化调控、肿瘤遗传学等研究中得到了极其广泛的应用[1 ] 。但是 ,生物组织标本极易被DNA酶或RNA酶 (尤其是RNA酶 )污染 ,从而造成标本中的核酸降解 ,导致假阴性结果甚至误导某些实验研究的结论。近年来发展的dT探针及Alu探针有… 相似文献
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基因工程人β干扰素工程菌经发酵培养、纯化后获得纯的制品,采用斑点杂交技术,用非放射性地高辛标记超声裂解的全工程菌DNA作为探针,检测基因工程人β干扰素纯品,结果显示:基因工程人β干扰素纯品中的外源DNA含量小于100pg/剂。 相似文献