大鼠卵巢不同功能阶段时c-fos表达的动态变化

目的和方法：本文用免疫组织化学方法检测了成年大鼠卵巢于不同的功能阶段和未成年大鼠外源性激素诱导的卵巢于不同的功能阶段c-fos表达的变化以及与血清E2和P含量的相关关系。结果：在成年大鼠动情前期、动情期卵巢的间质腺和基质中及动情间期和妊娠期卵巢的黄体细胞和基质中有c-fos表达,c-fos蛋白阳性信号的表达范围和表达强度在动情前期卵巢较大,动情间期和动情期卵巢较低,妊娠期卵巢最大,这种变化与血清E2和P含量的变化呈明显的正相关关系。未成年大鼠,用DES使卵泡发育至窦前期时,在卵巢中未检测到有c-fos蛋白的表达,用PMSG使贸泡发育至排卵前期时在卵巢的间质腺和基质中有c-fos表达,用PMSG和hCG后4天形成的早期黄体化卵巢c-fos在黄体细胞和基质中的表达明显升高,而于用hCG后9天形成的晚期黄体化卵巢c-fos表达明显下降,这种变化也与血清E2和P含量的变化呈明显的正相关关系。结论：c-fos与卵泡发育、排卵、黄体形成和退化等功能密切相关。     

大鼠躯体感觉皮质即早基因c-fos表达的研究

选择性地对大鼠单根触须刺激后,通过原位杂交组织化学检测相应的躯体感觉皮质内即早基因c-fos的表达、局部定位以及与刺激强度的关系。结果表明,触须的刺激导致了相应皮质内即早基因c－fos表达增加。脑皮质第4层基因表达最明显。且基因表达量与刺激强度成正比。从脑皮质细胞组成方面证实了c-fos表达主要在皮质第4层的星形细胞;在最强的刺激后,星形细胞邻近的神经元也被标记上了。结果提示：感觉输入可影响即早基因c-fos的表达,即早基因的表达受神经元活动的调节,这种基因调节是神经元整体功能所必需的一部分。     

糖皮质激素对癫痫大鼠海马c-fos表达的影响

用免疫组织化学方法观察了糖皮质激素对马桑内酯致痫大鼠海马c-fos的影响。侧脑室注射马桑内酯2h后。导致动物急性癫痫样发作。海马内出现c-fos的高度表达。单纯向侧脑室注射糖皮质激素100μg以后,动物不出现癫痫行为。海马内也几科无c-fos表达,但先向侧脑室注射糖皮质激素100μg1h,再向侧脑室内注射马桑丙酯2h后,海马内c-fos表达明显减少。除双侧肾上腺一周,再向侧脑室注射马桑内酯2h后,动物癫痫发作更明显,海马内c-fos表达较单纯且马桑内酯致痫动物更强。结果提示：糖皮质激素对马桑内酯致痫有明显的抑制作用,为临床应用糖皮质激素治疗癫痫提供了形态学参考。     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos阳性神经元表达的影响。方法采用免疫组织化学方法观察并比较c-fos阳性神经元在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠丘脑网状核的表达。结果眼镜蛇毒组大鼠丘脑网状核c-fos阳性神经元比生理盐水组、正常对照组表达明显增强(P0.01)。结论眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-fos表达有上调作用。     

9-羧酸蒽诱导心肌细胞表达c-fos及其胞内影响因素的研究

近来发现Cl^-通道抑制剂9－羧酸蒽（9－AC）有是一种新型的磷酸酶抑制剂。本研究观察了蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶C（PKC）及非特异性磷酸酶抑制剂对9－AC诱导的新生大鼠培养心肌细胞c-fos表达的影响。同时利用放免法测定了细胞内cAMP和cGMP的变化,旨在探讨影响9－AC诱导c-fos的胞内因素。结果显示,9－AC（0.5mmol/L）可显提高心肌细胞FOS样免疫阳性细胞数及染色强度。该作用不PCK抑制剂Chelerythine(1μmol/L）预处理的影响,而用PKA抑制剂H－89（10μmol/L）预处理心肌细胞,可减弱9－AC的作用,但FOS蛋白的表达量仍显高于基础水平。与之相比,相同条件下异丙肾上腺素（Iso）对FOS蛋白表达的诱导作用不受PKC抑制剂影响,但PKA抑制剂可使之完全抑制。非特异性磷酸酶抑制剂钒酸盐（VO4,1.5mmol/L）亦可显增强FOS的表达,9－AC不能使该作用进一步增强。放免测定显示9－AC（0.5mmol/L）对胞内cAMP和cGMP无显性影响。而Iso（10μmol/L）可明显升高cAMP的浓度。结果表明,9－AC可诱导培养的新生大鼠心肌细胞表达c-fos,其胞内作用途径与PKA的活性部分相关,而与cAMP、cGMP水平及PKC无关,上述作用特点及其与非特异性磷酸酶抑制剂相似的作用提示9－AC诱导c-fos表达可能是它影响了参与核内基因表达的蛋白转录因子的脱磷酸化过程。     

窦内压升高和灌流腺苷激活颈动脉窦压力感受器时延髓内c-fos蛋白的表达

在14 只隔离灌流颈动脉窦区的大鼠, 观察了窦内压(ISP) 升高和灌流腺苷 (adenosine, Ado) 激活压力感受器时延髓内c-fos蛋白的表达.结果显示: 在孤束核、最后区、延髓腹外侧头端区和中缝苍白核可见Fos蛋白样免疫阳性反应(FLI)神经元分布, 且其数量随ISP升高而增多.在给定ISP下, 颈动脉窦内灌流Ado, 可使上述区域中FLI表达明显增多.根据以上结果, 得出如下结论: c-fos在压力感受器反射延髓通路中的表达, 可由ISP增高和灌流Ado而增强, 表明Ado对压力感受器反射有易化作用.     

反义c－fos和c－jun抑制IL－1诱导阿片肽分泌

白细胞介素-1(IL-1)及阿片肽作为神经调质参与了神经细胞兴奋性毒性作用.以大鼠大脑皮层神经细胞为研究对象,探讨了IL-1、阿片肽和c-fos、c-jun表达产物之间的关系.结果表明,IL-1β能诱导大脑皮层神经细胞c-fos、c-jun mRNA瞬时短暂表达,15min增高,30min达高峰,c-fos mKNA 2h回至基线水平,c-jun mRNA 8h回至基线水平;联合应用c-fos、c-jun反义寡核苷酸能部分抑制IL-1诱导的大脑皮层神经细胞脑啡肽及β-内啡肽分泌增加,呈一定量效关系,相应意义寡核苷酸无抑制作用.提示IL-1促进大脑皮层神经细胞脑啡肽及β-内啡肽分泌作用部分受Fos和Jun蛋白调控.     

大鼠面部伤害性刺激后纹状体边缘区内原癌基因c-fos和NOS的表达

为了研究纹状体边缘区和痛觉的关系,用c-fos和NADPH－d双标记方法研究了大鼠面部伤害性刺激后c-fos蛋白（Fos）和NOS在纹状体边缘区的表达。面部伤害性刺激后30分钟,边缘区中即出现Fos表达,刺激后3小时,Fos表达达最高峰,而且主要在边缘区部位表达。正常大鼠纹状体边缘区中有密集的NOS阳性神经元及纤维,面部伤害性刺激3小时后,纹状体其余部位的NOS阳性胞体及纤维减少或消失,但边缘区中仍保留,并可见少数Fos和NOS双标记细胞,提示纹状体边缘区可能和面部痛觉的调制有关。     

褪黑素抑制原代培养鸭肾上皮细胞c—fos的表达

本研究采用Fos蛋白免疫组化染色方法观察了胎牛血清对原代培养鸭肾上皮细胞c-fos表达的刺激作用及褪黑素的阻断作用,以每一视野Fos染色阳性细胞的百分比为指标,每组实验观察14至17个视野,实验结果显示,正常对照组平均每视野Fos染色阳性细胞为44．31±2．77％,胎牛血清刺激组为63．07±3．93％,明显高于对照组IP＜0．01）,胎牛血清加10^-6mol/L褪黑素组为35．29±3．22％,明显低于单纯胎牛血清刺激组（P＜0．01）,但与对照组无明显差异（P＞0．05）,该结果表明褪黑素可以抑制原代培养鸭肾上皮细胞c-fos表达。     

实验性癫痫时脑内c—fos基因与阿片肽及兴奋性氨基酸的关系

细胞癌基因也称原癌基因,其命名与被确定时所在的逆转录病毒和细胞的名称有关。c-fos是v-fos的相应细胞对应物,V-fos是FJB鼠骨瘤病毒中分离出来的,c-fos的蛋白产物与v-fos相似,仅在羧端有差异,c-fos基因正常情况下不会引起癌变,它与细胞生长、分化有关。近来一些实验进一步证明c-fos还与调节细胞功能有关,许多细胞外刺激能诱导c-fos转录增加,一些能激活钙通道的条件、药物,或神经递质如细胞外高钾、钙通道激活剂BAYK     

腺苷对博莱霉素所致肺纤维化以及脾与骨髓等基质细胞坏死的影响

目的：应用双哌达莫（DPM）、腺苷（ADO）与ADO拮抗剂茶碱（TH）治疗博莱霉素（BLE）肺纤维化小鼠,观察肺、脾等病理变化,探讨肺纤维化发病机理,方法：实验第1天100只小鼠经气管注入BLE8．5mg.kg^-1,随机分BLE,DPM,ADO和TH四组,第2天起分别给予NS（100μl.d^-1)、DPM、ADO和TH,剂量为50mg.kg^-1.d^-1,共7天,第4－30天内处死动物,组织化学法观察肺内纤维变化与脾、胸腺、骨髓病理学改变。结果：BLE组和TH组第4－6生脾。胸腺须质与骨髓中许多基质细胞坏死导致组织严重疏松,BLE组第20天后脾与胸腺逐渐萎缩,肺与脾内网状纤维大量增加。DPM组与ADO组第4－6天脾、骨髓增死基质细胞较少。第30天肺未发生纤维化,淋巴器官未萎缩。结论：BLE能致脾、,骨髓等基质细胞大量坏死与严重组织疏松,内、外源性ADO能轻度减少基质细胞坏死,促进淋巴组织与造血组织增生,抑制BLE诱导的肺纤维化与淋巴器官萎缩。     

LPS诱导乳鼠心肌细胞p38蛋白激酶的激活与转位

探讨p38蛋白激酶信号传导通路在细胞中的特异性作用机制。应用共聚焦激光扫描技术观察心肌细胞中p38蛋白激酶的分布及LPS对其分布的影响。结果提示未受刺激静止的及EGF刺激的心肌细胞中,p38在胞浆和胞核中荧光强度呈散性分布。LPS刺激30分钟后,细胞核区的荧光强度明显增强,而胞浆区域的荧光强度降低,心肌细胞受LPS刺激激活后,其p38蛋白激酶由胞浆转位到胞核。     

食管鳞癌p53、c-erbB-2蛋白表达研究

为探讨p53、c-erbB-2蛋白表达与食管鳞癌生物学行为的关系,应用免疫组化LSAB法研究181例食管鳞癌中p53、c-erbB-2蛋白的表达。结果发现,正常食管粘膜均无p53、c-erbB-2蛋白的表达。47％食管鳞癌出现p53表达,p53阳性病例癌旁非典型增生上皮出现p53表达,p53阴性病例癌旁非典型增生上皮亦为阴性。p53阳性表达率与患年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级,临床TNM分期无关,且与预后无关。51.4%食管鳞癌呈现c-erbB-2蛋白表达,癌旁非典型增生上皮无c-erbB-2表达。c-erbB-2阳性率与肿瘤组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及肝转移有关,c-erbB-2阳性表达预后较差。结果提示,p53表达在食管鳞癌发生中起重要作用;c-erbB-2表达在食管鳞癌浸润转移中起重要作用。同时进行p53、c-erbB-2蛋白免疫组化检测,有助于对食管鳞癌进行早期诊断,监测病情和判断预后。     

组织蛋白酶D和nm23基因蛋白在乳腺癌中的表达及与淋巴结转移的关系

采用免疫组织化学 ABC法检测了 43例乳腺癌中的组织蛋白酶 D和 nm 2 3基因蛋白的表达。结果显示组织蛋白酶D在乳腺癌组织中表达阳性率为 76 .7% (33/43)。 43例乳腺癌中 2 5例伴有淋巴结转移 ,18例无淋巴结转移 ,其组织蛋白酶D表达阳性率分别为 92 % (2 3/2 5 )及 5 5 .6 % (10 /18) ,两者之间具有显著性差异 (P<0 .0 1)。 nm 2 3基因蛋白在 43例乳腺癌中阳性率为 72 .1% (31/43)。在有淋巴结转移和无淋巴结转移的乳腺癌中 nm2 3基因蛋白阳性率分别为 6 0 % (15 /2 5 )及80 .9% (16 /18) ,nm2 3基因蛋白的表达与淋巴结转移呈显著负相关 (P<0 .0 5 )。结果提示对乳腺癌根治术后无淋巴结转移 ,但组织蛋白酶 D表达阳性 ,nm2 3基因蛋白表达阴性的患者 ,可能具有潜在的复发和转移倾向 ,应多加关注 ,并密切随访。     

雌、孕激素对贝美格致痫大鼠大脑皮层、海马Glu和GABA免疫反应细胞的影响

采用免疫细胞化学双PAP法,观察雌二醇（E2）、孕酮（P）对贝美格（Bemegride,Be）腹腔致痫大鼠顶叶大脑皮层、海马CA1、CA3区Glu和GABA免疫反应细胞的影响。图像分析结果显示：Be致痫组皮层、海马Glu免疫反应平均阳性细胞数及光密度较正常组明显增加（P＜0.01）;CABA细胞数及光密度减少（P＜0.01）。给予E2后,Be致痫大鼠大脑皮层、海马Glu阳性细胞数目增多,光密度增高（P＜0.01）,GABA阳性细胞数目减少、光密度降低（P＜0.05,P＜0.01）而给予P后,致痫组GABA阳性细胞数目增多、光密度增高（P＜0.01）,Glu阳性细胞数目减少、光密度减低（P＜0.01）。提示雌、孕激素的致痫、抗痫作用与其调节脑内GABA和Glu系统的兴奋性有关。     

低氧对培养的肺血管周细胞凋亡的影响

为了研究低氧是否影响肺血管周细胞凋亡并参与腺泡内无肌肺动脉的构型重建, 用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化方法, 观察低氧（Ｈ） 组和低氧肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ） 组对肺血管周细胞凋亡发生率及抑凋亡基因ｂｃｌ２ 蛋白表达的影响。结果表明：Ｈ组和ＨＥＣＣＭ 组的凋亡指数明显较对照组减小。Ｈ 组和ＨＥＣＣＭ 组ｂｃｌ２ 蛋白的表达量分别是ＮＥＣＣＭ 组的１１７ 倍、１１３ 倍, 是Ｎ组的１３３ 倍、１２７ 倍。提示低氧诱导的抑凋亡基因ｂｃｌ２ 的过度表达, 对周细胞凋亡发生的抑制作用和低氧促进的周细胞增生过程可能都参与无肌肺动脉的构型重建, 与肺动脉高压的形成有关。     

人胎前额叶皮质神经肽Y免疫反应阳性神经元的发育

本文用免疫组化方法研究了人胎前额叶皮质中神经肽Ｙ（ＮＰＹ）免疫反应阳性神经元的发育。结果显示,ＮＰＹ阳性神经元最早于１６周出现于前额叶皮质的皮质下板,为未成熟的双极神经元。随着胎儿生长,皮质下板的ＮＰＹ阳性神经元数量逐渐增加,胞体增大,着色加深,突起增多增长。３０周后较少数量的ＮＰＹ阳性神经元也见于皮质的Ⅵ层及白质,皮质其它层阳性神经元数量很少。２８周后皮质内还能见到各种走向的ＮＰＹ阳性神经纤维,其数量随胎儿生长而增加。本研究提示,与其它动物相比,人类大脑皮质ＮＰＹ阳性神经元出现较早,其成熟过程基本上在出生前完成     

天花粉对小鼠子宫肥大细胞超微结构的影响

本研究用雌性中国１号小鼠１２只,分实验组和对照组,实验组分别腹腔注射天花粉后处死,取子宫组织作超薄切片,电镜观察。在天花粉作用下,常见子宫肥大细胞脱颗粒,呈功能活化状态,并与子宫平滑肌细胞紧密相邻。提示肥大细胞可能通过脱颗粒释放组胺促进子宫平滑肌的收缩。同时,也见肥大细胞与子宫结缔组织中的成纤维细胞,淋巴细胞等密切接触,提示成纤维细胞和淋巴细胞与天花粉作用下子宫肥大细胞的数量增多有关。     

小鼠肝脏树突状细胞前体分离培养及影响其成熟因素的初步探讨

本次首次建立了从小鼠肝脏分离、培养、扩增肝树突状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ,ＨＤＣ）前体的方法。采用经门静脉插管胶原酶二步循环灌流法及Ｐｅｒｃｏｌ不连续密度梯度离心法分离非肝细胞,得到含ＨＤＣ前体组分,将其分三组培养：第一组加入重组小鼠粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＭｒＧＭＣＳＦ）,待培养９天后,将细胞转移至鼠尾胶原上继续培养。第二组加入ＭｒＧＭＣＳＦ培养,但细胞不转移。第三组为对照组,仅加完全培养液。结果显示：第一、二组细胞于培养４天可见有许多细胞集落形成,第一组细胞转移至鼠尾胶原上培养１天后,细胞集落减少,而培养液中ＤＣ密度明显增加,光镜和扫描、透射电镜观察证明培养ＨＤＣ纯度达９５％,第二组则无上述细胞释放现象。实验结果提示,ＨＤＣ前体在体外受细胞因子刺激能大量扩增,但必须在胶原存在下才能分化成熟     

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜NOS阳性神经元的影响

实验用 β- NADPH脱氢酶组织化学染色研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜 NOS阳性神经元的影响。结扎双侧颈总动脉使视网膜缺血 ,3小时后松结复流。分别于缺血前 15分钟和再灌流前 1分钟腹腔注射维拉帕米 (5 m g/kg/次 ) ,对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活 3天后取视网膜进行 β- NADPH组化反应。结果表明 :视网膜缺血后 NOS阳性神经元减少 ,并出现 i NOS阳性细胞。在缺血前后应用维拉帕米可使视网膜内 NOS神经元较对照组显著减少 (P<0 .0 1) ,NOS神经元形态良好。说明维拉帕米减少大鼠视网膜缺血后 NOS阳性神经元 ,其相应 NO量减少 ,推测维拉帕米对大鼠缺血后视网膜功能具有保护作用。