一种水溶性党参多糖的分离纯化及结构分析

采用水提醇沉法得到党参粗多糖(COP),采用Sevag法除去蛋白成份,接着通过Sephacry1 S-200HR及Sephadex G-25凝胶柱色谱分离得到均一多糖COP-1。凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定其纯度和平均分子量。高效液相色谱法(HPLC)确定其单糖的组成。红外光谱及核磁推测COP-1结构。结果表明COP-1平均分子量约为2.1×10~3 Da,且均由阶D-(2→1)呋喃果糖组成。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

Pseudomonas fluorescens sp-f铁载体高效液相凝胶色谱分析

利用高效液相凝胶色谱法对荧光假单胞菌所产铁载体进行了分析,结果显示高产铁载体P.fluorescens sp-f与P.fluorescens AB92001均可分泌3种铁载体,其中具有荧光的pyoverdine容易被细胞外的铁抑制。高效液相凝胶色谱法适用于假单胞菌铁载体的分析检测。     

高效凝胶色谱测定蛋白质分子量

自从1959年凝胶过滤色谱出现以来,很快就提出这种方法可做为一种测定蛋白质分子量的手段。但经典的凝胶过滤色谱流速慢、柱效低、检测灵敏度和操作的自动化程度也不高。因此,长期以来凝胶过滤主要还是作为一种分离的手段,并不经常用来测定分子量。近年来高效凝胶过滤色谱法的出现,使这项技术有了进一步的发展。一些新型的高效液相色谱柱也表现出在一定的分子量范围内分配系数(Kd)与分子量对数呈近似线性的关系,因此利用高效液相色谱的高效、高速、高     

交联透明质酸凝胶中交联剂的HPLC测定

目的建立交联透明质酸钠凝胶中交联剂二乙烯基砜(DVS)残留量的测定方法。方法用高效液相色谱法测定DVS残留量,色谱条件为:色谱柱为C8(4.6mm×250mm),流动相为25mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.0)-乙腈(90∶10),检测波长为210nm。结果DVS在1~50μg/g范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率98.4%,RSD为1.02%。结论用高效液相色谱法测定交联透明质酸钠凝胶中DVS残留量,方法准确、可靠,可用于产品质量控制。     

高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺的分子量及其分布

目的:探讨高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物的分子量及其分布.方法:采用Ultrahydrogel 250(300mmx7.8mm)色谱柱;以已知相对分子量的PEI为标样;醋酸-醋酸盐缓冲液(0.2mol/l醋酸-0.1mol/l醋酸钠)为流动相;柱温40℃;流速lml/min;示差折光检测器.结果:测得自制PEI衍生物的重均分子量(Mw)为5093,数均分子量(Mn)为2090、Z均分子量(Mz)为11031,分布宽度(Mw/Mn)为2.44.结论:高效凝胶色谱法操作简单、灵敏度高,适合于快速、简便地测定PEI及其衍生聚合物的分子量及其分布.     

深海真菌Penicillium herquei FS83次生代谢产物研究

利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、薄层层析以及高效液相色谱法等色谱技术从深海真菌Penicillium herquei FS83的液体发酵产物中分离得到5个化合物,通过波谱数据分析结合文献对照,分别鉴定为peniherin A(1)、sclerodin(2)、对羟基苯乙酸甲酯(3)、对羟基苯乙酮(4)、(R)-甲羟戊酸内酯(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2为首次从该属真菌中分离得到。生物活性实验显示,化合物1无明显细胞毒活性及抑菌活性。     

空间排斥色谱法在酶学中应用的研究进展

空间排斥色谱法是一种高分子聚合物的柱分级分离技术,通过这种方法可以使柱中溶解的聚合物分子按其大小被分离。空间排斥色谱法在生物化学、高分子化学、无机化学、医学、临床等领域内得到了广泛的应用。本文时空间排斥色谱法的发展历程、基本原理、常用凝胶的性质等进行了详尽的论述。着重介绍了空间排斥色谱法在酶的脱盐、酶溶液的浓缩、酶的分离与纯化、酶的分子量测定中的应用,它已成为测定高聚物分子量分布的重要工具。最后指出空间排斥色谱法结合其它检测器将代替传统空间排斥色谱法,加速空间排斥色谱法不断向快速、高效方向发展。     

HPLC法测定丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量

目的:采用高效液相色谱法测定市售八批丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量.方法:高效液相色谱法,Inertsill ODS-SP(4.6× 150mm,5 μm),流动相:甲醇-水(75∶25),检测波长:270 nm,流速:1.0 ml/min.结果:丹参酮ⅡA在(1.43～68.35)μg/ml范围内有良好的线性关系,r=0.9999 (n=6).丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量普遍偏低,只有山东饮片中的两个批次含量较高.结论:考察分析丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量,可为临床使用提供依据.     

蝙蝠葛的化学成分研究

目的:对防己科蝙蝠葛属植物蝙蝠葛(Menispermum dauricum DC)的干燥根茎化学成分进行研究.方法:采用抗肿瘤细胞活性实验与中药化学实验相结合的方法,最终确定蝙蝠葛95％乙醇提取物,再经大孔树脂以70％乙醇溶液洗脱部位为其抗肿瘤活性部位,再经硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法、中低压液相色谱及高效液相色谱法等现代分离技术对其化学成分进行系统研究,分离得到单体化学成分,并通过其理化性质与波谱数据(Uv、IR、NMR、MS等)分析鉴定其化学结构.结果:从蝙蝠葛药材95％乙醇提取物中分离得到7个化学成分,分别鉴定为蝙蝠葛新诺林碱(1)、northalifoline(2)、青藤碱(3)、粉防己碱(4)、荷苞牡丹碱(5)、紫堇定(6)、香草酸(7).结论:其中化合物5、6、7均为首次从该属植物中分离得到.     

苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质

正交实验确定提取工艺后,用热水提取法得到苦瓜多糖(MCP).对MCP进行DEAE-32离子交换层析分离,得到3个多糖组分MCP1、MCP2和MCP3. 进一步采用Sephacryl S-400凝胶层析进行分离,经凝胶层析和高效液相色谱检测表明,MCP1、MCP2为均一性多糖组分.通过高效液相凝胶色谱法测定了两者的相对分子质量分别为1.16×106和7.45×105.用PMP衍生化法测定其单糖,结果表明: MCP1系由Man、Rham、GlcUA、GalUA、Glu、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,摩尔比为1.03:2.93:1.00:14.95:2.16:30.70:2.85:4.50.MCP2系由Rham、GalUA、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,对应的摩尔比为1.63:21.88:4.66:1.00:1.29.紫外光谱表明该多糖不含蛋白质和核酸.     

沙漠生物结皮芽孢杆菌产胞外多糖的纯化及其絮凝性的研究

【目的】以新疆古尔班通古特沙漠的生物结皮为样品,通过培养、筛选、分离得到一株高产胞外多糖(EPS)的菌株XJ-27,对XJ-27菌株所产的胞外多糖进行分离纯化,并对其絮凝性进行研究。【方法】利用DEAE sepharose CL-6B阴离子层析和Sephadex G100凝胶层析的方法对胞外多糖进行纯化,通过紫外分析方法和高效凝胶渗透色谱进行纯度的测定,利用高效凝胶渗透色谱法(HP-GPC)测定其分子量,以高岭土为体系对其絮凝性进行研究。【结果】利用层析分离的方法共得到2个胞外多糖的组分,对其中一个组分进一步纯化,得到组分EPS-I。结果表明,EPS-I纯度较高,分子量为575 kD。同时对胞外多糖的絮凝性进行了研究,结果表明该胞外多糖对高岭土为体系的絮凝率为80.4%。【结论】菌株XJ-27产胞外多糖,其胞外多糖具有絮凝性,对该胞外多糖进行分离纯化后,得到分子量为575 kD的多糖组分EPS-I。     

夏枯草多糖的分离、纯化及结构初步分析

采用100℃热水提取,得到夏枯草粗多糖。经阴离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析对粗多糖进行纯化分级,通过高效凝胶过滤色谱测得了其主要组分PLS3的重均分子量为8.3×10-5Da。对PLS3进行了红外分析,测定了其初步结构;并分别以气相色谱和柱前衍生化高效液相色谱法测定了粗多糖和PLS3的单糖组成,发现两者所含单糖种类一致,都为半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖,但两种物质的单糖组成相对摩尔百分比有所差异。     

一株胞外多糖产生菌的筛选鉴定及其多糖成分研究

以菌落周围有粘稠分泌物为初筛标准从土壤中筛选胞外多糖产生菌,苯酚-硫酸法测定初筛菌胞外多糖的产量;将胞外多糖产生菌LE-3进行形态学观察、BIOLOG分析与16S rDNA鉴定;提取菌株LE-3胞外粗多糖,该粗多糖经Sevage法除蛋白、透析和CM-琼脂糖凝胶FF、DEAE-琼脂糖凝胶FF、丙烯葡聚糖凝胶S-200HR柱层析进行纯化,傅里叶红外光谱法、薄层层析法和高效液相色谱法分析胞外多糖的单糖组成。结果表明:从土壤中筛出26株符合初筛标准的菌株,3株产糖量在5 g/L以上,其中菌株LE-3产量为5.29 g/L;根据形态学特征、BIOLOG和分子生物学分析,初步鉴定菌株LE-3为一株解淀粉芽孢杆菌亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.amyloliquefaciens);该菌株胞外粗多糖经Sevage法除蛋白、透析和三次柱层析纯化后,得到单一组分的LE-3胞外多糖;傅里叶红外光谱法、薄层层析法和高效液相色谱法分析确定该多糖为果聚糖。     

交织顶孢霉保肝活性物质的研究

利用吸附色谱、凝胶过滤色谱法等方法对交织顶孢霉发酵茵粉水提物中的保肝活性物质进行了分离纯化,根据其理化性质及各种光谱技术对分离到的化合物Ⅰ,化合物Ⅱ进行了结构鉴定。结果表明化合物Ⅰ为腺嘌呤,化合物Ⅱ为尿嘧啶。     

穿山龙多糖DMA的结构和抗氧化活性研究（英文）北大核心CSCD

采用热水煮提法和DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B凝胶层析对穿山龙多糖DMA进行提取和分离纯化。通过高效液相色谱法和气相色谱法鉴定DMA的纯度和糖原组成。采用红外光谱法,高碘酸氧化-Smith降解法,甲基化分析以及核磁共振法对多糖DMA的结构进行分析。利用羟自由基实验研究DMA的抗氧化活性。研究发现多糖DMA显示一个单一对称的色谱峰,主要由葡萄糖组成,是由→6)-α-D-Glcp-(1→组成的多糖。DMA具有清除羟自由基的活性。     

穿山龙多糖DMA的结构和抗氧化活性研究（英文）

采用热水煮提法和DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B凝胶层析对穿山龙多糖DMA进行提取和分离纯化。通过高效液相色谱法和气相色谱法鉴定DMA的纯度和糖原组成。采用红外光谱法,高碘酸氧化-Smith降解法,甲基化分析以及核磁共振法对多糖DMA的结构进行分析。利用羟自由基实验研究DMA的抗氧化活性。研究发现多糖DMA显示一个单一对称的色谱峰,主要由葡萄糖组成,是由→6)-α-D-Glcp-(1→组成的多糖。DMA具有清除羟自由基的活性。     

重组腺病毒Ad-GFP的纯化

目的：用色谱法纯化制备携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒。方法：采用5L生物反应器悬浮培养HEK-293N3S细胞进行病毒的扩增,冻融法裂解细胞,通过超滤、Source15Q离子交换层析和Sepharose4Fast Flow凝胶过滤层析进行分离纯化,采用分光光度法和高效液相色谱法分析重组腺病毒产品的纯度,采用组织培养半数感染剂量方法测定病毒的感染滴度。结果：通过两步色谱层析得到产品,经分光光度法分析,其D260nm/D280nm比值为1.21,高效液相色谱法分析其纯度达96.5%,产品滴度为1.0×1011U/mL,病毒颗粒数为1.76×1012/mL,比活性为5.68%。结论：确定了稳定可行的重组腺病毒色谱分离工艺,得到的产品在纯度、滴度和比活性等方面均符合国家食品药品监督管理局的标准。     

静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达、纯化与结晶

表达、纯化静水椎螺(Lymnaea stagnalis)乙酰胆碱结合蛋白(Ls-AChBP)并得到晶体。将静水椎螺乙酰胆碱结合蛋白cDNA序列克隆到表达载体pFastBac1上,构建了重组表达质粒pFastBac1-Ls-AChBP-His,经重组子筛选,得到重组杆状病毒质粒Bacmid,采用CellfectinⅡ脂质体,把带有外源基因的杆状病毒质粒Bacmid转染到昆虫细胞中,经镍柱和凝胶色谱柱对重组蛋白进行纯化得到五聚体,并用机器人进行结晶筛选获得其蛋白晶体。重组蛋白Ls-AChBP在Bac-to-Bac表达系统中得到高效表达并被纯化,结晶筛选得到晶体。